野生和栽培金鐵鎖抗氧化活性比較

黃建華肖建青劉錫葵*

（1 中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室，云南 昆明 650201；2 中國科學院研究生院，北京 100049）

野生和栽培金鐵鎖抗氧化活性比較

黃建華1,2肖建青1劉錫葵1*

（1 中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室，云南 昆明 650201；2 中國科學院研究生院，北京 100049）

目的 野生和栽培金鐵鎖抗氧化活性比較。方法 以 Vc 和 BHA 為參照，采用 DPPH 方法對野生和栽培金鐵鎖根乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物抗氧化活性進行測試。結果 野生和栽培金鐵鎖根乙酸乙酯、正丁醇提取物抗氧化活性 IC50 值分別為443μg/mL、1265μg/mL 和 378μg/mL、1877μg/mL。結論 ①野生和栽培金鐵鎖各提取物抗氧化活性基本一致；②無論野生還是栽培金鐵鎖抗氧化作用都比較弱；③無論栽培還是野生金鐵鎖，抗氧化活性物質基本都集中在乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物之中，均以乙酸乙酯提取物最強；④雖然栽培金鐵鎖乙酸乙酯提取物抗氧化活性要強于野生金鐵鎖、野生金鐵鎖正丁醇提取物抗氧化活性要強于栽培金鐵鎖，但相對于陽性對照 Vc和BHA來說均很小，差異并不是很明顯。

金鐵鎖；DPPH；抗氧化活性

金鐵鎖（Psammosilene tunicoides W.C. Wuet C.Y.Wu）為石竹科單屬單種植物，別名獨定子、小霸王、昆明沙參、金絲矮陀陀、土人參、對葉七、麻參等，主要分布于我國云南的大部分地區、貴州西北部、四川西南部和西藏東南部，為我國西南地區特有物種[1]。始載于《滇南本草》，以根入藥，有散瘀定痛、止血、消癰排膿散瘀、祛風除濕的功效[2]。味苦、辛，性溫，有小毒。歸肝經。用于治療跌撲損傷、風濕痹痛、胃寒痛、瘡癤及創傷出血等癥[3]，是多種著名中藥的組成成份，如：云南白藥系列、云南紅藥膠囊、貴州金骨蓮膠囊、福建痛血康膠囊等[4]。化學研究表明金鐵鎖主要含有齊墩果烷型五環三萜皂苷、環肽及有機酸等化合物[5-13]。藥理研究證明，金鐵鎖水煎浸膏及其總皂苷對實驗性類風濕性關節炎大鼠灌胃后具有顯著的鎮痛、抗炎作用[14-16]；對慢性增殖性炎癥、抑菌有一定的作用[3]；對免疫細胞具有一定的增強和調節作用[17]。

中藥的抗菌、消炎和增強免疫調節作用，一般與抗氧化活性具有一定的相關性，具有重要的作用，通過清除人體內自由基，還原氧化物質，從而達到保護和促進機體的作用［18,19］。關于金鐵鎖的抗氧化活性未見文獻報道，本文采用DPPH方法，應用Vc和BHA為參照，通過對野生和栽培金鐵鎖根的抗氧化作用進行比較分析，探討野生和栽培金鐵鎖活性的差異，為金鐵鎖的人工栽培提供科學依據。

1 材料與儀器

1.1 儀器與試劑

722 S型可見分光光度計：上海精密科學儀器有限公司生產；FA 2004型電子天平：上海精密科學儀器有限公司生產。DPPH（1，1-二苯基-2-苦基肼自由基）和BHA（叔丁基羥茴香醚）：為Sigma-Fluka公司產品；Vc：國產分析純試劑；95%乙醇，分析純，天津化學試劑有限公司；其他溶劑均為國產分析純。

1.2 藥材

栽培金鐵鎖于2010年10月采自云南武定縣，野生金鐵鎖根于2010年11月購于云南白藥集團，經鑒定均為金鐵鎖（Psammosilene tunicoides W. C. Wu et C. Y.Wu），標本均保存于中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室。

2 方 法

2.1 樣品的提取

野生金鐵鎖根部5kg、栽培金鐵鎖根部2kg分別粉碎后用80%乙醇浸提6次，每次浸提時間1d，減壓回收至無乙醇味，分別得到乙醇提取物1370g、184g。乙醇提取物分別用2倍體積的蒸餾水混懸后依次用等體積石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取3～5次，合并相同萃取溶劑分別減壓回收溶劑得石油醚提取物5.6g、1.0g，乙酸乙酯提取物22.4g、3.4g，正丁醇提取物257g、60.3g，水提取物886g、102g，作為待測樣品。

2.2 抗氧化活性測定[20]

2.2.1 DPPH液的配制

準確稱取DPPH試劑25mg，用95 %分析純的乙醇溶解，并定量轉入250mL容量瓶中，用95%乙醇定容，搖勻，得質量濃度為100mg/L（約2.5×10-4mol/L）的DPPH儲備液，置于冰箱中冷藏備用。

2.2.2 樣品溶液的配制

準確稱取以上待測試的樣品10.0mg，溶解在分析純的乙醇中，并轉入25mL的容量瓶中，用乙醇定容，搖勻，得質量濃度為400mg/L的樣品溶液，置于冰箱中冷藏備用。

2.2.3 BHA標準溶液的配制

準確稱BHA樣品2.5mg，溶解在分析純的乙醇中，并轉入100 mL的容量瓶中，用乙醇定容，搖勻，得質量濃度為25mg/L的樣品溶液，置于冰箱中冷藏備用，作為陽性對照樣品。

2.2.4 VC標準溶液的配制

準確稱Vc樣品1.5mg，溶解在分析純的乙醇中，并轉入100mL的容量瓶中，用乙醇定容，搖勻，得質量濃度為15mg/L的樣品溶液，置于冰箱中冷藏備用，作為陽性對照樣品。

2.2.5 清除DPPH自由基能力的測定

準確量取1.2mLDPPH液，加入2.8mL 95%乙醇溶液，混勻，在λ=520nm測吸光度Ac（自由基清除率為0）。分別準確量取各樣品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.4、1.8、2.2mL，加入1.2 mL DPPH液及2.6、2.4、2.2、2.0、1.8、1.4、1.0、0.6mL的95 %乙醇溶液混合均勻，在λ=520nm測吸光度Ai。另外分別準確量取各樣品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.4、1.8、2.2mL，加入3.8、3.6、3.4、3.2、3.0、2.6、2.2、1.8mL的95 %乙醇溶液后混合均勻，在λ=520nm測吸光度Aj（空白校正因子）。同時以BHA和Vc作為陽性對照。按式K＝[1-（Ai-Aj）/Ac]×100%計算自由基清除率K值，并進一步計算其自由基清除率IC50值。

3 結 果

3.1 野生金鐵鎖根、栽培根各部分提取物的DPPH自由基清除率

3.1.1 野生金鐵鎖根各提取物對DPPH自由基清除率的測得結果（表1）。

表1 野生金鐵鎖根部提取物對DPPH自由基清除率

從表1可以看出：野生金鐵鎖根各提取物對DPPH自由基的清除率隨著濃度增大呈現逐步增強的趨勢；但不同提取物對自由基的清除差別較大，同樣濃度下乙酸乙酯提取物對自由基的清除率最強，其次是正丁醇提取物。乙醇、石油醚和水提取物對自由基的清除率比較弱，其中，水提取物對DPPH自由基的清除率最弱，其次是乙醇提取物；并且乙醇提取物、石油醚提取物和水提取物隨著濃度加大對自由基的清除率沒有明顯變化。實驗結果表明野生金鐵鎖根對自由基清除物質主要集中在乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物中。

3.1.2 栽培金鐵鎖根各提取物對DPPH自由基清除率的測得結果（表2）。

表2 栽培金鐵鎖根部提取物清除DPPH自由基清除率

3.2 金鐵鎖野生根、栽培根各部分提取物的DPPH自由基清除活性IC50值及其比較（表3）。

表3 野生和栽培金鐵鎖抗DPPH自由基氧化活性（IC50）

從表3可看出，野生和栽培金鐵鎖各提取物抗氧化活性基本一致：①無論野生還是栽培金鐵鎖抗氧化作用都比較弱；②無論栽培還是野生金鐵鎖，抗氧化活性物質基本都集中在乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物之中，均以乙酸乙酯提取物最強；③雖然栽培金鐵鎖乙酸乙酯提取物抗氧化活性要強于野生金鐵鎖、野生金鐵鎖正丁醇提取物抗氧化活性要強于栽培金鐵鎖，但相對于陽性對照Vc和BHA來說均很小，差異并不是很明顯。

4 討 論

金鐵鎖野生資源分布比較狹窄，同時生長比較緩慢，已嚴重限制了藥材資源的應用和開發利用。開展金鐵鎖人工栽培繁殖已成為緩解金鐵鎖資源的重要途徑和手段，同時也有利于野生資源的保護。然而栽培金鐵鎖和野生金鐵鎖是否存在差異？差異有多大？是否具有于野生藥材同等的藥效？已成為金鐵鎖人工栽培的關鍵，必須進行全面的比較分析和評價。本文采用DPPH自由基清除法對栽培和野生金鐵鎖抗氧化活性進行了初步的快速比較評價，結果表明野生金鐵鎖和栽培金鐵鎖的抗氧化活性和部位基本一致，栽培金鐵鎖具有與野生金鐵鎖同樣的作用，為金鐵鎖的人工栽培提供了初步的依據；為下一步進一步深入的化學成分和活性比較評價提供了一定的依據和基礎。

[1]王特文.西南特有植物—金鐵鎖[J].中藥材,2003,26(23):22.

[2]中華人民共和國藥典一部1977版[M].北京:人民衛生出版社, 1978:362.

[3]王學勇,邱德文,蔣朝暉.苗族藥物金鐵鎖研究進展[J].中國中醫基礎醫學雜志,2002,8(11):77-82.

[4]張慶瀅,劉小燭,毛常麗.藥用植物金鐵鎖的研究進展[J].云南農業大學學報,2009,24(1):139-143.

[5]浦湘渝,周俊.金鐵鎖的一個新三萜成分[J].云南植物研究,1987, 9(3):36.

[6]浦湘渝,周俊.金鐵鎖皂甙的研究[J].云南植物研究,1989,11(12): 198-202.

[7]鐘惠民,華燕,倪偉,等.金鐵鎖的兩個新三萜皂苷[J].云南植物研究,2003,25(3):361-365.

[8]鐘惠民,倪偉,華燕,筍.金鐵鎖的新三萜皂苷[J].云南植物研究, 2002,24(6):781-786.

[9]丁中濤,周俊,譚寧華.金鐵鎖中的四個環二肽[J].中草藥,2000,31 (11):803-805.

[10]丁中濤,汪有初,周俊,等.金鐵鎖根中的環肽成分[J].云南植物研究,2000,22(3):331-336.

[11]丁中濤,保志娟,楊雪瓊,等.金鐵鎖根中的3個環二肽[J].中國中藥雜志,2003,28(4):337-339.

[12]Tian JM,Shen YH,Yang XW,et al.Tunicyclin A, the First PlantTricyclic Ring Cycloheptapeptide from Psammosilene tunicoides [J].Organic Letters,2009,11(5):1131.

[13]趙鑫,王丹,朱瑞良,等.金鐵鎖的化學成分和藥理活性研究進展[J].中草藥,2006,37(5):796-799.

[14]王學勇,許建陽,邱德文,等.金鐵鎖總皂苷抗炎鎮痛作用及作用機理研究[J].中國實驗方劑學雜志,2006,12(5):56.

[15]許建陽,王發強,鄭維發,等.金鐵鎖水煎浸膏對實驗性類風濕關節痛鎮痛作用的研究[J].武警醫學,2003,14(10):589.

[16]許建陽,王發強,鄭維發,等.金鐵鎖對實驗性RA小鼠痛閾及血清N0/NOS含量的影響[J].中醫藥學刊,2004,22(1):82-84.

[17]鄭維發,石楓.金鐵鎖總苷對小鼠細胞免疫功能的影響[J].武警醫學,2003,14(10):598-602.

[18]先宏,吳可,孫存普.中藥抗氧化活性的主要成分及其自由基清除作用[J].國外醫學中醫中藥分冊,2003,25(3):150.

[19]李秋紅,李廷利,黃莉莉,等.中藥抗氧化的作用機理及評價方法研究進展[J].時珍國醫國藥,2008,19(5):1257.

[20]廖紅梅,肖建青,劉錫葵.野生樹頭菜抗氧化活性[J].食品研究與開發,2011,32(2):13-15.

R961

：B

：1671-8194（2013）02-0060-03

*通訊作者：E-mail：liuxikui@mail.kib.ac.cn