張勇軍,郭越文(新疆維吾爾自治區哈密地區第二人民醫院檢驗科 839000)
標本溶血是由于采血不當、檢驗過程未按正規操作要求進行等原因而造成的紅細胞破壞,血細胞一些物質進入血清致樣品出現特有的紅色的現象[1-2];而溶血又是一種常見的、可干擾和影響臨床生化檢驗的因素。紅細胞、白細胞、血小板等血細胞的破壞會導致細胞內某些細胞成分釋放,這些成分在細胞內濃度如果與血漿不同,其逸出將會影響血漿中該成分的濃度,使測定結果發生改變[3]。本文結合有關溶血對部分臨床生化檢驗指標測定結果的影響,分析標本溶血原因并提出相應對策。
1.1 標本 正?;旌涎?00mL,由100例健康體檢者的血清混合而成。
1.2 儀器與試劑 日立7080全自動生化分析儀。丙氨酸氨基轉移酶(ALT)試劑盒,批號0312071;天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)試劑盒,批號0312071;總膽固醇(TC)試劑盒,批號0412071;三酰甘油(TG)試劑盒,批號0312071;尿酸(UA)試劑盒,批號0312071;葡萄糖(GLU)測定(GOD法)試劑盒,批號0212061;肌酐(Cr)(酶法)試劑盒,批號0312171;總膽紅素(TBIL)試劑盒,批號 0412141;總蛋白(TP)試劑盒,批號0312071;清蛋白(ALB)試劑盒,批號0412081;尿素(UREA)試劑盒,批號0312191。以上試劑均由四川省新成生物科技有限責任公司提供。
1.3 方法
1.3.1 嚴格按照試劑盒說明書在日立7080全自動生化分析儀上設定各檢測項目的參數。
1.3.2 清晨分別抽取100例體檢者空腹血5mL,分別置于2支試管中,每支2.5mL,其中1支采取室溫自然分離,30min后以1 200r/min離心10min,分離血清,取1mL血清作為正常血清備用,標識為對照組;另1支試管中的標本采用人工方法使其溶血,然后以相同條件離心,分離溶血血清1mL備用,標識為溶血組。
1.3.3 采用日立7080全自動生化分析儀,四川省新成生物試劑測定血清中ALT、AST、TC、TG、Cr、UREA、GLU、UA等11項指標水平,操作方法和步驟均按試劑盒說明書規定執行,每份正常血清和溶血血清共進行10次測定,取均值,分別計算100例標本各指標的測定均值,得到正常標本的測定均值及溶血標本的測定均值,并對測定結果進行對比觀察。
1.4 統計學方法 實驗數據用Excel軟件進行數據錄入,用SPSS13.0進行統計分析。計量資料比較采用t檢驗,以P<0.05為差異有統計學意義。
溶血組和對照組樣本生化檢驗結果見表1。
表1 兩組11項生化指標檢驗結果(±s)

表1 兩組11項生化指標檢驗結果(±s)
項目 AST(U/L)ALT(U/L)TBIL(μmol/L)UA(mmol/L)UREA(mmol/L)Cr(μmol/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)ALB(g/L)TP(g/L)GLU(mmol/L)對照組 33.50±18.36 30.48±17.59 12.77±3.43 289.31±80.60 5.24±0.54 76.03±15.02 4.82±0.57 1.54±0.12 39.16±3.21 77.00±2.84 4.89±1.06溶血組 41.21±22.27 37.42±18.23 10.34±2.46 292.17±81.29 5.13±0.39 62.22±15.71 4.27±0.19 1.19±0.16 42.66±3.34 83.54±3.17 4.01±0.78升降(%) 23.01 22.77 19.03 0.99 2.10 18.16 12.32 22.73 8.94 8.49 18.00 P<0.05 <0.05 <0.05 >0.05 >0.05 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05
隨著醫學技術的不斷發展,檢驗結果的準確性在診療中的作用越來越重要,而多數診療的決定是根據實驗室檢驗結果作出的。隨著各類先進自動化儀器的廣泛使用以及高質量試劑盒的應用、檢驗人員素質的普遍提高、檢驗科質控工作的不斷完善,檢驗結果的準確性和可靠性得到了不斷提高;但生化檢驗結果的準確性受諸多因素影響,實驗前的誤差占70%[4-5]。在基層檢驗工作中,由于采血不當、試管不潔、檢驗過程中未按操作規范進行操作等原因,均可引起不同程度的標本溶血,而標本溶血又成為日常檢驗工作中最常見的影響生化檢驗結果的原因。除此之外,反應時間和溫度也可影響臨床生化檢驗指標的測定[6]。由表1可以看出,11項生化檢驗中,溶血后AST、ALT、ALB以及TP較溶血前均有顯著升高,差異有統計學意義(P<0.05),分別升高23.01%、22.77%、8.94%和8.49%;溶血后TBIL、Cr、TC、TG及GLU較溶血前均有明顯降低,差異有統計學意義(P<0.05),分別降低19.03%、18.16%、12.32%、22.73%以及18.00%;UA、UREA溶血前后比較差異無統計學意義(P>0.05)。數據結果表明,樣本溶血幾乎對所有生化檢驗結果均有影響。而臨床標本溶血對生化檢驗有影響的因素主要有以下幾方面:(1)紅細胞的內液和外液濃度相差大,細胞內濃度明顯高于血清的生化檢驗指標ALT、AST等,溶血后上述物質釋放到血清中,導致測定結果偏高;(2)血紅蛋白紅色對比色分析法的干擾,如血紅蛋白能將膽紅素氧化成膽綠素,使血清膽紅素降低,同時溶血后,各細胞成分溶解于血清中,增加了血清體積,血清中UREA及GLU等物質濃度相對下降,測定結果將低于真實值[7-8]。(3)溶血標本中血紅素中的正鐵離子,可被試劑中的氧化劑氧化成為黃色的高鐵血紅素,對兩點比色法造成干擾;當紅細胞外血紅蛋白達到一定程度可造成TP、ALB測定值增高;(4)血紅蛋白還可以競爭性地抑制分析物與試劑中的反應物結合,使測定結果低于實際值。
從上述試驗數據可以看出,只要標本溶血,對許多的生化檢查項目的結果影響都很大,這樣的結果就可能干擾臨床醫生對患者的正確診斷,甚至造成誤診。在當今醫療糾紛越來越多的情況下,正確的檢驗結果在臨床診療中起著重要的作用。所以檢驗科工作人員在日常工作中,遇到溶血標本時應及時通知臨床醫生重新抽血,以獲取合格的生化標本;并且對患者及其家屬做耐心的解釋,以便得到理解和支持;負責抽血的人員也應加強技術訓練,以便減少因抽血不合格而對患者造成不必要的痛苦。另一方面,從方法學上克服和減少溶血的影響也很重要,對于溶血后血紅蛋白對光度比色的影響可通過設置樣品空白等措施加以克服,以提高臨床生化檢驗的準確性和可靠性。如確實不能獲取合格的標本,檢驗科也應該在結果上注明溶血及溶血程度,便于臨床醫生對所檢查的項目進行綜合分析,從而對疾病作出正確診斷。
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