惠州地區淋球菌對抗菌藥物的耐藥性分析

余寶珠，龔宇花，黃輝如（.廣東省惠州市皮膚病防治研究所 56；.廣東省惠州市中心人民醫院 56）

淋病是我國高發的性病之一，如果治療不當，會引起嚴重的感染，如淋菌性前列腺炎以及淋菌性宮頸炎。近年來，由于各地抗菌藥物的不恰當使用，導致淋球菌耐藥性不斷增加，如果不加以控制，未來有可能找不到可以治療淋球菌感染的抗菌藥物。為了解惠州地區淋球菌對抗菌藥物的耐藥性及產β－內酰胺酶的淋球菌（PPNG）和質粒介導的高度耐四環素的淋球菌（TRNG）的流行情況，本文對2012年度分離的137株淋球菌進行了檢測，檢測其對6種抗菌藥物的最低抑菌濃度（MIC），報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 來自2012年1～12月本院性病門診患者泌尿生殖道分泌物中分離得到的137株淋球菌。所有菌株經革蘭染色、氧化酶試驗以及糖發酵試驗證實后，傳代1次洗于脫脂牛奶中，于－78℃低溫冰箱凍存備用。

1.1.2 淋球菌標準菌株 世界衛生組織（WHO）A、B、C、D及E標準菌株由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.1.3 抗菌藥物 阿奇霉素標準品購于中國藥品生物制品檢定所；壯觀霉素由國藥集團國瑞藥業有限公司提供；頭孢曲松鈉由上海羅氏制藥有限公司提供；青霉素由哈藥集團制藥總廠提供；四環素由哈藥集團制藥四廠提供；環丙沙星由哈藥集團制藥六廠提供。

1.1.4 培養基 GC基礎培養基（Oxoid公司生產）加入10%脫纖維新鮮羊血。

1.2 方法

1.2.1 抑菌濃度（MIC）測定 采用WHO西太平洋淋球菌耐藥監測規劃建議的瓊脂稀釋法，先將阿奇霉素、壯觀霉素、青霉素、頭孢曲松鈉、四環素以及環丙沙星按照要求配成原液，再倍比稀釋成不同的濃度，然后將3.7%GC基礎瓊脂高壓滅菌，水浴冷卻到50℃，加入脫纖維新鮮羊血（最終10%濃度）。取0.1mL倍比稀釋好的6種抗菌藥物工作液，加入10mL GC血液基，培養基。混勻后將平板傾倒，從低濃度到高濃度配制各種濃度。實驗菌株和標準菌株制成混懸液，接種于各種濃度的平板上，于36℃、5%二氧化碳環境下培養，36h后觀察結果，記錄最低MIC。同時用 WHO的A、B、C、D及E標準菌株作為質控。藥物敏感性判斷標準采用WHO西太平洋地區淋球菌耐藥監測規劃標準推薦的標準，即青霉素A、B、C、D及E標準菌株環丙沙星及頭孢曲松鈉均當MIC≤0.03mg/L時為敏感，當 MIC為0.06～0.50mg/L時為中度敏感，MIC≥1 mg/L時為耐藥；壯觀霉素當 MIC≤64mg/L時為敏感，≥128 mg/L時為耐藥；四環素 MIC≥16mg/L時為TRNG；阿奇霉素參考英國抗微生物化療學會推薦的臨界值（敏感：MIC≤于0.25mg/L，中 度 敏 感：MIC≤0.5mg/L，耐 藥：MIC≥1mg/L）[2]。

1.2.2 β－內酰胺酶檢測 采用紙片碘量法檢測菌株的β－內酰胺酶，取1個試管，加入2滴10 000U/mL的青霉素原液，2滴1%淀粉溶液，1滴碘試劑，形成藍色混合物，在一個濾紙條上滴上1滴試劑，將接種培養物涂在藍點上，放置1～2min，如果藍色變為無色意味著β－內酰胺酶陽性，否則為陰性。每次試驗用WHO的E株作為陽性對照，A株作為陰性對照。

2 結 果

2.1 PPNG及TRNG結果 137株淋球菌株中β－內酰胺酶陽性為51株，即PPNG，占37.2%；82株四環素 MIC＝16mg/L，即TRNG，占59.9%。

2.2 137株淋球菌MIC測定結果 見表1。青霉素MIC范圍0.062 5～16mg/L，MIC 0.06～0.50mg/L的中介株為10株，占7.3%，≥1mg/L的耐藥株為127株，耐藥率92.7%（127/137）；環丙沙星 MIC范圍4～32mg/L，耐藥率100.0%（137/137）；頭 孢曲松鈉 MIC 范圍 0.007 8～0.50mg/L，MIC≤0.03mg/L的敏感株為98株，MIC 0.06～0.5mg/L的中介株為39株，其敏感度為71.5%（98/137）；阿奇霉素 MIC范圍0.031 2～8mg/L，MIC≤0.25mg/L的敏感株為84株，MIC≤0.5mg/L的中介株為12株，≥1mg/L的耐藥株為41株，耐藥率29.9%（41/137）；壯觀霉素 MIC范圍2～64mg/L，MIC≤64mg/L的敏感株為137株，其敏感度為100.0%（137/137）。

表1 137株淋球菌對6種抗菌藥物的耐藥情況[n（%）]

3 討 論

淋病作為最常見的性病之一，在我國一直有較高的發病率。由于目前患者對性病有一種恐懼忌醫心理，許多淋病患者沒有得到規范的治療，導致許多耐藥淋球菌株產生。淋球菌的耐藥情況在不同時間和不同地點會有不同的表現，因此，定期規范檢測淋球菌的耐藥情況就十分必要。

淋球菌的耐藥機制主要由質粒介導和染色體介導引起，質粒介導引起的耐藥一般是高度耐藥，染色體介導引起的耐藥一般是低度耐藥[1]。近年來，各地報道了多種淋球菌耐藥菌株，其中多數地區淋球菌對青霉素以及四環素都已產生嚴重耐藥性[2－3]。淋球菌對青霉素及四環素的耐藥性由耐藥質粒介導，耐藥質?？稍诓煌鷮匍g進行交換，導致耐藥性在不同菌株及不同種屬間傳遞，引起耐藥性流行[4－5]。本研究結果顯示，惠州地區淋球菌對青霉素的耐藥率為92.7%，PPNG為37.2%，TRNG檢出率為59.9%。青霉素與四環素已經不能作為淋病治療的一線藥物，但是PPNG與TRNG的檢測作為淋球菌耐藥性流行病學的重要檢測指標仍具有一定的意義。

對于其他類抗菌藥物的耐藥性，各地報道不同。環丙沙星作為一種廣譜抗菌的喹諾酮類藥物，通過抑制細菌的DNA合成而發揮作用，對淋球菌有一定的療效。本研究結果顯示，惠州地區淋球菌對于環丙沙星的耐藥率達到100.0%。余克花等[6]的研究顯示，南昌地區淋球菌對環丙沙星的耐藥率為49.6%，而曹文苓等[7]發現廣州地區淋球菌對環丙沙星的耐藥率高達98.9%，牛玉峰[8]報道江蘇淮安淋球菌對環丙沙星的耐藥率也達到95.8%。這些研究結果提示環丙沙星也不能作為治療淋病的一線藥物。

阿奇霉素對于包括淋球菌、支原體以及衣原體在內的多種病原微生物均有一定效果，臨床上應用廣泛[9－10]，一些研究結果提示一些耐阿奇霉素的淋球菌菌株出現。本研究結果表明，惠州地區阿奇霉素耐藥率高達29.9%，由此提示醫務工作者今后加強對此藥物治療淋病的耐藥性監測。大多研究未發現耐頭孢曲松鈉的淋球菌菌株，本文的結果也一樣，但是作者發現對于頭孢曲松鈉的中介株比例達到了28.5%，因此，同樣應加強對于頭孢曲松鈉的監測。壯觀霉素的研究結果令人振奮，敏感株比例達到100.0%，與絕大多數報道一致。

綜上所述，壯觀霉素和頭孢曲松鈉可以作為治療惠州地區淋病的首選藥物，但應定期監測其耐藥情況。

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