基于不同檢測方法的乙型肝炎病毒感染血清標志物模式分析

江雁瓊，遲 瓊，詹鈾超（廣州醫學院第五附屬醫院檢驗科 510700）

乙型肝炎病毒（HBV）/感染的血清學標志物[HBV表面抗體（HBsAg）、HBV 表面抗體（抗－HBs）、HBV e抗原（HBeAg）、HBV e抗體（抗－HBe）、HBV核心抗體（抗－HBc）] 檢測是診斷HBV感染和判斷病毒復制的重要指標之一[1]。目前酶聯免疫吸附試驗（ELISA）仍是乙型肝炎血清學標志物檢測的主要方法，但是近年來有越來越多的臨床實驗室將電化學發光法（ECLIA）用于這些標志物檢測[2－3]。由于 ECLIA 與 ELISA 檢測原理和特性不同，因此ECLIA檢測乙型肝炎血清學標志物會出現一些不同于ELISA檢測的模式。本實驗室對ECLIA與ELISA檢測乙型肝炎血清學標志物會出現的各種模式進行了綜合分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 檢測對象 全部標本均來自本院的患者，共20 709例，年齡1d至97歲，其中男11 292例，女9 417例。20 709例標本中，有11 923例標本來自2010年3～5月住院患者，另外8 786例標本來自2011年3～5月住院患者。

1.2 方法 對2010年3～5月收集的11 923例患者標本采用ELISA檢測5項（HBsAg、抗－HBs、HBeAg、抗－HBe、抗－HBc）血清學標志物，試劑購自上海科華生物工程股份有限公司。對2011年3～5月收集的8 786例患者標本采用ECLIA檢測相應指標，試劑購自雅培診斷公司。均嚴格按說明書進行操作。

1.3 統計學方法 組間率的比較采用χ2檢驗，抗－HBs定量數據的組間比較采用Kruskal－Wallis H檢驗。全部統計分析均使用SPSS17.0統計軟件完成。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 HBsAg陽性患者性別分布 ELISA檢測的11 923例患者中，男性HBsAg陽性率明顯高于女性，二者差異有統計學意義（χ2＝6.298，P＜0.05），見表1。ECLIA檢測的8 786例患者中，也發現男性HBsAg陽性率明顯高于女性，二者差異也有統計學意義（χ2＝15.196，P＜0.05），見表2。

表1 ELISA檢測11 923例患者的HBsAg陽性率

表2 ECLIA檢測8 786例患者的HBsAg陽性率

2.2 兩種不同方法檢測乙型肝炎血清學標志物結果模式 見表3。由ELISA檢測的11 923例患者乙型肝炎血清學標志物的結果匯總表現為20種不同模式，由ECLIA檢測的8 786例患者乙型肝炎血清學標志物的結果匯總表現為19種不同模式。用ECLIA檢測乙型肝炎血清學標志物后，出現4種新的模式，即3、4、5，1、2、3、5，1、3、4、5，1、2、3、4、5陽性模式，同時原先用ELISA檢測可見的5種模式未能重現，這5種模式包括3，1、2，1、3，1、4，1、2、5陽性模式。

2.3 2，2、5，2、4、5這3種陽性模式陽性率的比較 見表4。2010年3、4和5月用ELISA分別檢測4 357、3 768和3 798例住院患者的乙型肝炎血清標志物，統計分析發現模式2，2、5和2、4、5陽性率在3個月住院患者之間差異均有統計學意義。2011年3、4和5月用ECLIA分別檢測2 990、2 791和3 005例住院患者的乙型肝炎表面標志物，統計分析發現2，2、5，2、4、5模式陽性率在3個月住院患者之間差異無統計學意義。2010年3個月11 923例住院患者和2011年3個月8 786例住院患者之間模式2，2、5和2、4、5陽性率比較差異均有統計學意義。

2.4 抗－HBs定量結果比較 見圖1。對ECLIA測定抗－HBs濃度大參考區間上限的3組2，2、5，2、4、5 3種模式組抗－HBs定量結果進行統計分析，發現3組之間比較差異有統計學意義（χ2＝86.24，P＜0.01）。

2.5 HBsAg和抗－HBs同時陽性的比例 見表5。2011年3～5月用ECLIA檢測8 786例住院患者乙型肝炎血清標志物發現HBsAg和抗－HBs同時陽性的患者77例，陽性率為0.88%。2010年同期用ELISA檢測11 923例住院患者中僅測出11例患者為HBsAg和抗－HBs同時陽性，陽性率為0.09%。用Fisher精確概率檢驗證實兩組之間HBsAg和抗－HBs同時陽性的比例差異有統計學意義。

表3 11 923例/8 786例患者20種模式乙型肝炎血清學標志物檢測結果（ELISA/ECLIA）

表4 表面抗體陽性3種模式的陽性結果[n（%）]

圖1 3種抗－HBs陽性模式組抗－HBs定量結果比較

表5 乙肝表面抗原和表面抗體同時陽性的比例

3 討 論

HBsAg是HBV S基因編碼的包膜蛋白，是機體感染HBV后最早出現的血清學標志物之一[4]?？梗璈Bs是HBsAg刺激機體產生的保護性中和抗體，有清除HBV防止再感染的作用。但抗－HBs滴度較低時，不能阻止或全部阻止 HBV DNA在體內復制。HBeAg和HBsAg都是HBV C基因前C區和C區翻譯產物，它們的大部分氨基酸序列相同，但是前者是一種分泌型蛋白，由感染后的肝細胞分泌[4－5]。HBeAg和HBcAg分別有其特異的抗原表位，可分別誘導機體產生抗－HBe和抗－HBc?？梗璈Be一般存在于無癥狀HBV攜帶者及非活動期慢性肝炎患者中，一般在HBeAg消失后出現，表示HBV在體內復制減少或終止，傳染性減弱或消失，病情開始恢復[4]。抗－HBc是人感染HBV后第一種出現的抗體。

HBV血清學5項標志物同時檢測可以出現不同的結果模式[4，6]。本文資料證實，ELISA檢測的11 923例患者乙型肝炎血清學標志物的結果匯總表現為20種不同模式，ECLIA檢測的8 786例患者乙型肝炎血清學標志物的結果匯總表現為19種不同的模式。由此提示ELISA和ECLIA檢測住院患者乙型肝炎血清學標志物都可出現多種不同的結果模式。兩種方法檢測乙型肝炎血清學標志物都可出現的結果模式有15種。這15種包括全陰性及1，2，4，5，1、5，2、4，2、5，3、5，4、5，2、3、5，2、4、5，1、3、5，1、4、5，1、2、4、5陽性模式。應用 ECLIA 檢測乙型肝炎血清學標志物后，出現4種新的模式，即3、4、5，1、2、3、5，1、3、4、5，1、2、3、4、5陽性模式，同時原先用ELISA檢測可見的5種模式未能重現，這5種模式包括3，1、2，1、3，1、4，1、2、5陽性模式。

在ELISA檢測出現的20種結果模式中，陽性率大于1.00%的模式包括全陰性及2，2、4，2、5，4、5，2、4、5，1、3、5，1、4、5陽性模式；在ECLIA檢測出現的19種結果模式中，陽性率大于1.00%的模式包括全陰性及2，5，2、5，4、5，2、4、5，1、3、5，1、4、5陽性模式。因此全陰性模式及2，2、5，4、5，2、4、5，1、3、5，1、4、5陽性模式是HBV血清學5項標志物檢測相對較常見到的結果模式。其臨床意義總結如下：全陰性模式表明患者未受HBV感染或感染后未產生有效免疫應答；2陽性模式表明機體已經產生保護性中和抗體，但抗體滴度低于保護性水平時，需要及時追加乙肝疫苗免疫接種；2、5陽性模式表明機體既往感染HBV，處在恢復期；4、5陽性模式提示機體既往感染HBV，體內雖產生抗－HBe和抗－HBc，但是這兩種抗體無任何保護作用，對患者病情的判斷需要結合肝功能檢測及病毒核酸檢測結果；2、4、5陽性模式提示機體既往感染HBV，體內已經產生保護性抗－HBs，但是抗－HBe和抗－HBc仍然存在，對患者病情的判斷除了評價3種抗體相對水平外，還需要結合肝功能檢測及病毒核酸檢測結果；1、3、5陽性模式是通常所說的“大三陽”，出現這種結果模式的患者一般處在HBV感染的急性期或慢性活動期，病毒在體內大量復制，傳染性強；1、4、5陽性模式是通常所說的“小三陽”，這種結果模式見于急性感染后病情趨于好轉或者見于HBV攜帶者。對于ECLIA檢測HBV血清學標志物出現4種新的模式（3、4、5，1、2、3、5，1、3、4、5，1、2、3、4、5陽性模式），可能的解釋如下：3、4、5陽性模式若能排除HBsAg的帶現象，則提示患者感染HBV后處于HBeAg轉換期，體內HBeAg和抗－HBe處于轉換過程中的動態平衡狀態[7]；1、2、3、5陽性模式提示患者體內有抗－HBs，但不足以完全中和HBsAg，可能因為不同HBV亞型感染或HBV S區基因突變導致 HBsAg和抗－HBs共同存在；1、3、4、5陽性模式提示患者感染HBV后處于“大三陽”和“小三陽”轉換期，體內HBeAg和抗－HBe處于轉換過程中的動態平衡狀態，或者由于HBV的C區發生變異；1、2、3、4、5陽性模式是一種罕見模式，可能是患者處于多種抗病毒藥物治療過程中，病毒的S區或C區基因發生變異[8]。ECLIA檢測發現的HBsAg和抗－HBs共同陽性模式的總陽性率要高于傳統的ELISA，除了患者因素以外，檢測方法學可能是造成此種差異的重要原因之一。

對2010年和2011年3、4和5月住院患者2，2、5，2、4、5 3種模式陽性率分別進行比較分析，結果發現，ECLIA檢測出的2，2、5，2、4、5 3種模式陽性率在2011年3個月住院患者之間差異均無統計學意義，而ELISA檢測出的2，2、5，2、4、5 3種模式陽性率在3個月住院患者之間比較差異均有統計學意義。2010年3個月11 923例住院患者和2011年3個月8 786例住院患者之間模式2，2、5和2、4、5陽性率比較差異均有統計學意義。這些發現提示對于全部用ECLIA檢測乙型肝炎血清學標志物或既開展ECLIA又保留ELISA的實驗室而言，在審核和解釋乙型肝炎血清學標志物結果時需要注意這些差異性。

如前文所述，抗－HBs是HBsAg刺激機體產生的保護性中和抗體，有清除HBV防止再感染的作用。本文研究對2，2、5，2、4、5 3種抗－HBs陽性模式進行分組，對3組間抗－HBs濃度水平進行比較分析發現其差異均有統計學意義，2、4、5陽性模式組抗體濃度水平要高于其他兩組，提示機體抗－HBs濃度水平可能與抗－HBe和（或）抗－HBc是否存在有一定關系。

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