糖化血清白蛋白試劑盒的抗干擾性能評價

張桂春，賈江花，沃燕波

(寧波美康生物科技股份有限公司，浙江 寧波 315104)

糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一種全球性慢性疾病[1]，臨床工作中要使血糖全面長期達標，短期平均血糖的良好控制非常重要。GA是臨床上血糖檢測的指標，可反映機體2~4周內平均血糖水平[2,3]，被認為能在血糖變化最顯著時更確切和及時地反映血糖水平，對于評價糖尿病患者近期血糖控制情況及反映短期內血糖水平的變化具有較高的臨床價值[4,5]，已被納入2011版中國血糖檢測臨床應用指南[6]。

試劑盒的抗干擾性能越來越受關注，對于臨床實驗室來說，抗干擾性能評價可以明確干擾物引起的結果差異。本實驗的目的在于評價GA試劑盒的抗干擾性能，以指導樣本的質量評定，從而避免因樣品因素引起的檢測結果的偏差[7]，為臨床檢測提供一定的實驗數據。

1 材料與方法

1.1 材料 儀器為HITACHI 7180型全自動生化分析儀，GA試劑盒由寧波美康生物科技股份有限公司提供，干擾物質 Vc、乳糜、Hb、CB和FB分別購于 Sigma、 華瑞制藥有限公司、Amresco、Frontier scientific和J&K。

本實驗所用血清樣品來源于美康國賓健康體檢中心健康體檢者清晨空腹混合血清(乙肝、丙肝、HIV、梅毒四項陰性，血糖值正常，無溶血、黃疸和脂血)。將混合血清分裝后，于-20℃凍存。使用時先常溫下溶化，1 000 r/min離心5 min，取上清液。

1.2 方法

1.2.1 干擾血清的配制 Vc干擾樣品的制備：先用去離子水制備600 mg/L的Vc溶液作為儲存液，再以儲存液為基礎分別配制Vc系列濃度溶液，依次為 600、450、300、150、0 mg/L；然后再按稀釋 20 倍的比例，與血清樣本進行混合，得到系列濃度Vc干擾樣品，分別對應 Vc濃度為 30、22.5、15、7.5、0 mg/L。

脂血干擾樣品的制備：先用去離子水將乳糜干擾物(14500 FTU，定義為100%)配制成系列濃度溶液，依次為 100、75、50、25、0%；然后再按稀釋 10倍的比例，與血清樣本進行混合，得到系列濃度乳糜干擾樣品，分別對應乳糜為1450、1087.5、725、362.5 、0 FTU。

血紅蛋白干擾樣品的制備：先用去離子水制備100 g/L的Hb溶液作為儲存液，再以儲存液為基礎分別配制Hb系列濃度溶液，依次為100、75、50、25、0g/L；然后再按稀釋20倍的比例，與血清樣本進行混合，得到系列濃度Hb干擾樣品，分別對應 Hb 濃度為 5、3.75、2.5、1.25、0g/L。

黃疸干擾樣品的制備：(1)先用去離子水制備5.76 g/L的CB溶液作為儲存液，再以儲存液為基礎分別配制CB系列濃度溶液，依次為5.76、4.32、2.88、1.44、0g/L；然后再按稀釋 20 倍的比例，與血清樣本進行混合，得到系列濃度CB干擾樣品，分別對應 CB 濃度為 0.288、0.216、0.144、0.072、0 g/L。(2)用0.1mol/L的NaOH溶液制備4.0g/L的FB溶液作為儲存液，再以儲存液為基礎分別配制FB系列濃度溶液，依次為 4.0、3.0、2.0、1.0、0g/L；然后再按稀釋20倍的比例，與血清樣本進行混合，得到系列濃度FB干擾樣品，分別對應FB濃度為0.2、0.15、0.1、0.05、0 g/L。

1.2.2 操作 (1)在最佳儀器條件下，用GA試劑盒對上述樣品進行檢測，每個樣品連續測定3次。(2)根據EP7-A2文件，為了平均系統漂移影響，樣品的具體上機順序：高值-低值，低值-高值，高值-低值。(3)所有干擾樣品制備后，2h內上機檢測。

1.2.3 數據處理 由于儀器或檢測環境影響，產生的具有明顯偏差的樣品，應剔除，或重新進行測定。計算每個樣品測定的平均值、標準差(s)和變異系數(CV)，應CV≤10%，以保證干擾實驗是在精密度在控的條件下進行。在CV≤10%在控的條件下，按照下面的公式，繼續進行數據處理。回收率(%)=干擾樣品的測定均值/對照樣品的測定均值×100%。對照樣品即干擾物含量為0的樣品。當回收率≥110%或≤90%所對應的臨界干擾樣品濃度，即為GA試劑盒所能耐受的最大干擾。

2 結果

應用Excel軟件對數據進行分析。GA試劑盒Vc、乳糜、Hb、CB和FB抗干擾劑量效應實驗結果，見表1。

2.1 Vc對測試的干擾 當樣品中Vc濃度≤30 mg/L時，對GA的測定可產生非線性的干擾。計算得到的回收率在±10%范圍內，臨床可接受。

2.2 乳糜對測試的干擾 當樣品中乳糜濃度≤1450 FTU時，對GA的測定可產生非線性的干擾。計算得到的回收率在±10%范圍內，臨床可接受。

表1 GA試劑盒Vc、乳糜、Hb、CB和FB干擾實驗

2.3 Hb對測試的干擾 當樣品中Hb濃度≤5 g/L時，對GA的測定可產生非線性的干擾。計算得到的回收率在±10%范圍內，臨床可接受。

2.4 黃疸對測試的干擾 當樣品中CB濃度≤288 mg/L，FB濃度≤200 mg/L時，均可對GA的測定可產生線性的干擾，其線性干擾方程分別為Y=-0.012X+15.26，R2=0.957； Y=-0.018X+15.16，R2=0.987。結果見圖1和圖2。當CB≤144 mg/L，FB≤100 mg/L時，計算得到的回收率±10%范圍內，臨床可接受。當CB≥144 mg/L，FB≥100 mg/L時，計算得到的回收率超過10%范圍，超出臨床可接受范圍。同時，根據擬合曲線回歸方程，干擾物在不同濃度的干擾度能夠通過方程計算公式被估計。

圖1 CB對GA測定的干擾趨勢

圖2 FB對GA測定的干擾趨勢

3 討論

干擾物質主要來源于3個方面：內源性物質(人體血液中成分)、外源性物質(藥物或其他相關代謝物)、樣本污染物質(抗凝劑等)，本研究對常見的干擾物質Vc、乳糜、Hb、CB和FB進行了評價。實驗中，選取的干擾物的最高濃度為EP7規定的最高病理濃度[8]，以便能夠確定分析結果影響臨床應用價值的可疑干擾物的最低濃度。干擾樣本的準備方面，以添加物質以原血清基質的變化最小為原則，按照1:20的比例稀釋，干擾物配成的一系列的濃度為實驗濃度的20倍，空白對照樣本通過添加溶媒制成，和實驗樣本同時測定。

本研究發現GA試劑盒在樣品檢測過程中，當CB≥288mg/L及FB≥200mg/L時對GA的測定會產生負干擾趨勢，且均可產生線性干擾；當CB濃度≤144 mg/L，FB≤100 mg/L，其回收率在±10%范圍內，為臨床可接受范圍，對檢測結果沒有明顯影響。而Vc濃度≤30 mg/L，乳糜濃度≤1450 FTU，Hb濃度≤5 g/L，計算得到的回收率均在±10%范圍內，為臨床可接受范圍，對測定結果沒有影響。因此，GA試劑盒測定樣本時，對Vc、乳糜、Hb的抗干擾能力完全能夠滿足臨床需求。而CB濃度≤144 mg/L時，FB濃度≤100 mg/L時，計算得到的回收率均在±10%范圍內，為臨床可接受范圍。綜上，GA試劑盒具有較強的抗干擾性能，基本能夠滿足臨床的需求。

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