磷酸川芎嗪氣霧劑急性毒性及局部刺激性試驗(yàn)研究

楊 征 ，陳 雅 ，徐 果 ，胡金婷

(1.中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)野戰(zhàn)外科研究所大坪醫(yī)院藥劑科，重慶 400042; 2.安徽省蚌埠醫(yī)學(xué)院08級(jí)藥學(xué)系，安徽 蚌埠 233030)

川芎嗪是川芎的有效成分四甲基吡嗪，有較強(qiáng)的擴(kuò)張微血管、改善微循環(huán)、降低血黏度、改善血液流變學(xué)、降低毛細(xì)血管通透性、調(diào)節(jié)血小板功能和抗凝等作用，因此具有廣泛、潛在的臨床用途[1]。根據(jù)上述作用，大坪醫(yī)院將2，3，5，6－四甲基吡嗪磷酸鹽－水合物(磷酸川芎嗪)制成氣霧劑，通過氧氣混合吸入的方式而起到擴(kuò)張鼻黏膜血管的作用，以應(yīng)用于臨床。為確保用藥安全，現(xiàn)將其急性毒性及局部刺激性的實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試劑、儀器與動(dòng)物

磷酸川芎嗪氣霧劑(大坪醫(yī)院制劑室制備，批號(hào)為111205B)。BP110型電子天平(德國(guó)Sartorius);BX151型雙目顯微鏡(日本OLYMPS)。SD 大鼠，清潔級(jí)，雌雄各半，體重(200±15)g，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK－(軍)2007－004，由第三軍醫(yī)大學(xué)野戰(zhàn)外科研究所大坪醫(yī)院動(dòng)物中心提供。

1.2 方法

急性毒性試驗(yàn)[2－3]:SD大鼠10只，雌雄各半，體重(200±15)g，禁食12 h，以原供試品溶液1%磷酸川芎嗪氣霧劑5 mL/kg(相當(dāng)于原藥25 mg/mL，相當(dāng)于成人日劑量的250倍)，滴入大鼠雙側(cè)鼻腔及灌胃;觀察1周大鼠毒性反應(yīng)和死亡情況，未能測(cè)出1%磷酸川芎嗪氣霧劑滴鼻腔及灌胃無死亡情況。因此，將此給藥劑量定為一次1 mL每只的最大耐受量試驗(yàn)(MTD)。隨機(jī)分成空白組、對(duì)照組和給藥組，每組10只。禁食12 h后，給藥組以原供試品溶液1%磷酸川芎嗪氣霧劑1 mL滴入大鼠雙側(cè)鼻腔及灌胃;對(duì)照組同法給予相同體積0.9%氯化鈉注射液;空白組不作任何處理。給藥飼養(yǎng)7 d后，詳細(xì)觀察給藥后動(dòng)物的外觀、行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、大小便色澤、呼吸狀況，鼻、眼、口腔有無異常分泌物，體重變化、中毒反應(yīng)的起始時(shí)間、嚴(yán)重程度等。

局部刺激性試驗(yàn)[4]:SD大鼠30只，雌雄各半，體重(200±15)g，隨機(jī)分成空白組、對(duì)照組和給藥組，每組10只。給藥組以原供試品溶液1%磷酸川芎嗪氣霧劑1 mL滴入大鼠雙側(cè)鼻腔;對(duì)照組同法給予相同體積0.9%氯化鈉注射液;空白組不作任何處理。連續(xù)給藥7 d，末次給藥后24 h，分別處死給藥組、對(duì)照組、空白組大鼠5只;其余各組大鼠分別觀察至停藥48 h后各組處死3只大鼠;停藥72 h后各組處死2只大鼠，即時(shí)觀察各項(xiàng)指標(biāo)與解剖后的呼吸道局部黏膜的變化情況。

1.3 觀察指標(biāo)

一般情況觀察，觀察大鼠給藥后恢復(fù)期間的呼吸頻率、體表顏色改變以及是否出現(xiàn)哮喘、咳嗽、嘔吐、窒息;解剖給藥后鼻黏膜的變化情況，并按“局部黏膜刺激反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)”[5]以計(jì)分方式表示，包括紅斑、水腫、充血程度及范圍等。解剖顯微鏡檢查，取大鼠鼻腔及氣管切片，置40倍顯微鏡觀察變化。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn)

空白組、對(duì)照組、給藥組給藥后12 min內(nèi)先后進(jìn)食正常。連續(xù)給藥7 d內(nèi)各組大鼠外觀、行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、大小便色澤、呼吸狀況均顯正常，鼻、眼、口腔無異常分泌物;各組均無死亡，無中毒反應(yīng)。各組大鼠體重變化經(jīng) t檢驗(yàn)無顯著性差異(P＞0.05)，結(jié)果見表1。

2.2 局部刺激性試驗(yàn)

一般情況觀察:連續(xù)7 d鼻腔給藥及給藥恢復(fù)期間，各組大鼠呼吸頻率、體表顏色改變均未見異常，未見出現(xiàn)哮喘、咳嗽、嘔吐、窒息反應(yīng)。給藥組在給藥后3 min內(nèi)會(huì)出現(xiàn)輕微搔動(dòng)鼻子的

表1 急性毒性試驗(yàn)中各組大鼠體重的變化情況(n=10)

行為，3 min后停止搔動(dòng)。鼻腔未見異常分泌物，各組大鼠無1例死亡;給藥期間各組大鼠鼻腔黏膜未見紅斑、水腫、糜爛、潰瘍等癥狀;喉、氣管等呼吸道黏膜組織形態(tài)、色澤均無異常，未見充血、紅腫。

解剖顯微鏡檢查:在顯微鏡下，3組大鼠鼻黏膜與氣管黏膜對(duì)比無顯著差異。見圖1與圖2。

3 討論

本試驗(yàn)中，磷酸川芎嗪氣霧劑為一日給藥最大耐受量，相當(dāng)于臨床成人用藥量的250倍，在短期內(nèi)未見毒性反應(yīng)及死亡情況，表明急性毒性較小，安全可靠。為保證磷酸川芎嗪氣霧劑的含量不降低，其pH應(yīng)控制在2.5～3.5，酸性對(duì)鼻腔有一定刺激。為保證制劑使用安全，對(duì)該制劑進(jìn)行急性毒性及局部刺激性試驗(yàn)。在局部刺激性試驗(yàn)中，給藥組有輕微的搔動(dòng)鼻子的行為，根據(jù)其磷酸川芎嗪氣霧劑的理化性質(zhì)，初步分析是由于pH顯酸性對(duì)鼻腔有一定的輕微刺激導(dǎo)致大鼠的抵抗性反應(yīng)。經(jīng)過觀察，短時(shí)間內(nèi)其行為停止。解剖顯微鏡檢查觀察到，給藥組的鼻腔黏膜與氣管黏膜的毛細(xì)血管較清晰，試驗(yàn)證明磷酸川芎嗪氣霧劑對(duì)血管有擴(kuò)張作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，磷酸川芎嗪氣霧劑作為擴(kuò)張鼻黏膜血管用于臨床無明顯毒性及刺激性，可供臨床使用。

圖1 鼻腔黏膜解剖顯微圖

圖2 氣管黏膜解剖顯微圖

[1]項(xiàng)薔薇，羅運(yùn)春，朱妍艷，等.川芎嗪在哮喘小鼠氣道炎癥和氣道重塑中的作用及其機(jī)制[J].臨床兒科雜志，2011，8(29):773－776.

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[3]湯 杰，方建國(guó)，施春陽，等.魚腥草鼻用噴霧劑急性毒性、局部刺激性及過敏性的實(shí)驗(yàn)研究[J].中南藥學(xué)，2006，4(6):403－406.

[4]彭 燕，胡 輝，李 冬，等.“網(wǎng)脫Ⅰ號(hào)”口服液對(duì)小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)[J].中國(guó)藥師，2011，6(14):795 －796.

[5]王北嬰，李儀奎.中藥新藥研制開發(fā)技術(shù)與方法[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，2001:815.