紫外分光光度法測定玉屏風顆粒總黃酮含量

雷心心石 瑩李云秋*

紫外分光光度法測定玉屏風顆粒總黃酮含量

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目的測定玉屏風顆粒中總黃酮的含量。方法采用紫外分光光度法，以蘆丁為對照品，在509nm 波長處測定玉屏風顆粒中總黃酮的含量。結果蘆丁在0.008～0.040mg/ml濃度范圍內線性關系良好，平均加樣回收率(n=6)以蘆丁計為99.03%，RSD為1.01%。結論此方法操作簡單，精密度、穩定性和重復性良好，可以用于本品的質量控制方法之一。

玉屏風顆粒；總黃酮；含量測定；紫外分光光度法

玉屏風顆粒由黃芪、白術、防風三種藥物組成；能益氣固表以止汗泄，體虛易感風邪之人服之，有益氣固表以御外邪。該方中黃芪、防風均含有黃酮化合物。但尚未有文獻對玉屏風顆粒中的總黃酮含量進行檢測的報道。本文報道中藥制劑玉屏風顆粒中總黃酮含量測定方法的研究，可為玉屏風顆粒在生產過程中的質量控制提供參考性資料依據。

1 儀器與材料

UV2550紫外分光光度計（日本島津公司），IS09001電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；亞硝酸鈉（天津市博迪化工有限公司），硝酸鋁（天津市科密歐化學試劑有限公司），氫氧化鈉（汕頭市西隴化工廠有限公司）；乙醇（廣州化工試劑廠）；蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100080-200707）；玉屏風顆粒（廣東環球制藥有限公司，批號110802、110815、110910）。

2 方法與結果

2.1 對照品試液的配制精密取蘆丁對照品適量，加入70%乙醇制成濃度為2.0mg/ml的溶液，搖勻，即得。

2.2 樣品供試品溶液的制備取玉屏風顆粒0.25g，精密稱定，以適量70%的乙醇溶液，回流提取2h。冷卻，過濾，收集濾液，定容于25ml容量瓶中，備用。

2.3 測定波長的選擇取適量的蘆丁對照品與樣品溶液，分別置于25ml容量瓶中，加70%乙醇至6ml，再加入5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6min；再加入5%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6min，加入5%氫氧化鈉溶液10ml，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，放置10min顯色，以不加對照品或樣品的隱性試劑為空白，立即測定。在200～800nm波長范圍內掃描，對照品與樣品溶液在509nm處均有最大吸收，故選擇509nm為測定波長。

2.4 標準曲線繪制精密量取蘆丁對照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別置25ml容量瓶中，各加水至6ml，加入5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6min，再加入5%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6min，加入5%氫氧化鈉溶液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置10min，以相應試劑為空白，在509nm測定波長處測定吸光度A。以A縱坐標，濃度C為橫坐標，得回歸方程A=7.075C+0.1226（r=0.9998），在0.008～0.040mg/ml的范圍內，濃度與吸收度有良好的線性關系（圖1）。

圖1 標準曲線

2.5 精密度試驗精密量取供試品溶液3ml至25ml容量瓶中，按“標準曲線的繪制”項下的方法操作，并以相應試劑為空白。連續5次，計算吸光度的RSD為0.5%，表明儀器精密度良好。

2.6 重現性試驗精密稱取同一批樣品5份，每份0.25g，按供試品溶液制備方法進行平行制備，每份取3ml提取液，按“標準曲線的繪制”項下的方法操作，并以相應試劑為空白。計算玉屏風顆粒樣品的總黃酮含量的RSD值。RSD＜2%，表明此方法的重現性良好。

2.7 穩定性考察取同一樣品供試品溶液，按上述方法分別于0min、10min、20min、30min、40min、50min、60min測定吸收度，結果見下表，顯示在60min內穩定，RSD為0.4%。表明本方法穩定性良好。

2.8 加樣回收實驗精密吸取已知含量的蘆丁對照品溶液2ml（2.0mg/ml），分別加入6份已知含量的0.5g的樣品中，按供試品溶液制備方法制備，精密吸取3ml，按“標準曲線的繪制”項下的方法操作，并以相應試劑為空白。計算回收率，計算RSD為1.01%，表明本方法回收率較好。

2.9 樣品的含量測定分別精密稱取不同批次的三批樣品各0.25g，精密稱定，以適量70%的乙醇溶液，回流提取2h。冷卻，過濾，收集濾液，定容于25ml容量瓶中，備用。精密量取供試品溶液3ml至25ml容量瓶中，按“標準曲線的繪制”項下的方法操作。分別計算供試品溶液中總黃酮含量（按蘆丁計），得到三批樣品的總黃酮含量。結果見表1。

表1 3批樣品總黃酮含量(以蘆丁計)(mg/g)

3 討論

本實驗結果表明，以蘆丁為對照品，測定玉屏風顆粒中總黃酮的含量為27.76mg/g，該方法的精密度試驗、穩定性試驗，重現性實驗結果均良好，此法簡便、準確、靈敏度高，可作為測定黃酮類常用的方法。可為玉屏風顆粒在生產過程中的質量控制提供參考性資料依據。

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R927.2

A

1673-5846(2013)03-0225-02

1桂林醫學院，廣西桂林 541004

2廣西省河池市宜州中醫院藥劑科，廣西河池 546300

雷心心，女，實驗師。

李云秋，男，副教授，E-mail：leeyq88@126.com。