涼粉草水煎液的高效液相色譜離子阱質譜分析研究

劉蘭軍宋偉峰

涼粉草水煎液的高效液相色譜離子阱質譜分析研究

劉蘭軍1宋偉峰2

目的建立涼粉草水煎液化學成分的高效液相色譜離子阱質譜分析方法。方法涼粉草采用水煎煮，煎煮液采用高效液相色譜離子阱質譜對其主要化學成分進行分析研究。結果在優化的實驗條件下，涼粉草水煎液的高效液相色譜質譜圖中有16個明顯的色譜峰，其中8個通過離子阱多級質譜進行了結構推測鑒定，5個通過對照品得到了化合物確證。結論高效液相色譜離子阱質譜是涼粉草化學成分分析鑒定的有效手段。

高效液相色譜；離子阱質譜；涼粉草；水煎液；化學成分

涼粉草（Mesona chinensis Benth.）又名仙草，為唇形科涼粉草屬一年生草本植物。全球有涼粉草屬植物約8～10種，我國產2種，分布于浙江、臺灣、福建、廣東、廣西及云南[1]。涼粉草具有清熱利濕、涼血解暑的功效，可用于治療高血壓、糖尿病、急性風濕性關節炎、中暑和黃疸等疾病[2]。文獻報道涼粉草中主要含有黃酮、酚類、萜類、鞣質、氨基酸和多糖等化學成分[3-6]，具有增強機體免疫的功效[7-8]。另外，涼粉草的指紋圖譜研究也有相關文獻報道[9-10]。由于涼粉草主要采用水煎煮的方式服用，研究其水煎液的化學成分具有重要的意義，但涼粉草水煎液的化學成分研究尚無報道。隨著高效液相色譜-質譜聯用技術的普及應用，該技術已經越來越多地應用于中藥分析。高效液相色譜-質譜法具有很高的靈敏度和選擇性，并且能夠提供豐富的結構信息，在中藥化學成分分析鑒定中具有很大的優勢。本文采用高效液相色譜離子阱質譜法（HPLC-IT-MS）分析研究涼粉草水煎液的化學成分，為涼粉草藥材的合理開發利用以及其質量控制提供技術依據。

1 儀器與試劑

Thermo Fisher LCQ Fleet高效液相色譜離子阱質譜聯用儀（美國Thermo Fisher公司）；Hypurity C18250mm×4.6mm，5μm高效液相色譜柱（美國Thermo Fisher公司）。

乙腈為色譜純，購自美國Fisher Scientific公司，其它試劑為分析純，購自廣州化學試劑廠，水為蒸餾水。對照品葡萄糖酸、蘋果酸、檸檬酸、咖啡酸和迷迭香酸均購自國家標準物質中心。涼粉草藥材購自廣州清平藥材市場，經鑒定為涼粉草（Mesona chinensis Benth.）。

2 實驗方法

2.1 樣品提取稱取涼粉草10g置圓底燒瓶中，加入100mL蒸餾水，加熱煮沸后煎煮1h，煎煮液冷卻后轉移至100mL的容量瓶中，蒸餾水定容，過0.45μm濾膜，待分析。

2.2 色譜及質譜條件色譜條件：Hypurity C18高效液相色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相A為水含0.5%的甲酸，B為乙腈，梯度洗脫：0～2min，98% A 2%B；2～12min，2%～10%B；12～35min，10%～45%B；35～40min，45%～95%B；后運行10min，98% A 2% B。流速0.5mL/min；進樣量10.0μL，柱溫25℃。

質譜條件：電噴霧（ESI）離子源，負離子檢測模式；噴霧電壓為4.0Kv；鞘氣（N2）流速：80a.u.；輔助氣（N2）流速：15 a.u.；碰撞氣體為氦氣。質譜掃描范圍為m/z50～1000，MSn碰撞能量為40%。

3 結果與討論

圖1為涼粉草水煎液的HPLC-IT-MS色譜圖，譜圖中有16個明顯的色譜峰，這些色譜峰保留時間、相對百分含量、一級質譜、多級質譜以及分子式的詳細信息見表1。通過分析每個色譜峰的保留時間、一級質譜和多級質譜信息，并結合文獻報道，對其中的8個化合物進行了推測鑒定，再通過與對照品的比較，對其保留時間、一級質譜和多級質譜信息進行比較，所推測鑒定的化合物中5個得到了確證。其中化合物1、3、4、8和14通過與對照品比較分別確證為葡萄糖酸、蘋果酸、檸檬酸、咖啡酸和迷迭香酸。化合物11的[M-H]-為m/z 521，該離子的碰撞誘導解離（CID）實驗產生一個m/z 359的離子碎片，其在反相C18柱的保留比迷迭香酸稍弱，通過與文獻比較，推測為異迷迭香酸苷。化合物7的[M-H]-為m/z 341，CID作用于該離子實驗產生m/z 179和135的離子碎片，其在反相C18柱的保留比咖啡酸稍弱，推測為咖啡酸葡萄糖苷。化合物6的[M-H]-為m/z 197，該離子的CID實驗產生m/z 179、135和73的離子碎片，碎片m/z 179為失去H2O所產生，推測化合物中含有羥基，碎片m/z 135為失去[H2O+CO2]所產生，推測化合物中含有羧基，通過與文獻比較，該化合物推測為丹參素或其異構體。色譜圖上的其它色譜峰由于缺乏相關的文獻報道和對照品，結構有待進一步分析鑒定。

圖1 涼粉草水提取液的HPLC-MS色譜圖

表1 涼粉草水提取液的化學成分分析

涼粉草是一種重要的藥食兩用植物資源，具有廣泛的生理活性。但有關其化學成分的研究報道不多，其水煎液的化學成分研究更是沒有文獻報道。由于涼粉草多以水煎煮服用，研究其水煎液的化學成分具有重要的意義。為了能系統全面的闡明涼粉草的化學成分，尋找出其活性成分，本實驗通過對涼粉草水煎液的HPLC-IT-MS分析研究，闡明了其中的水溶性極性成分。其主要成分為迷迭香酸（38.3%）、丹參素或異構體（20.1%）和異迷迭香酸苷（8.7%），另外還含有一定量的咖啡酸、葡萄糖酸、蘋果酸和檸檬酸，這些化學成分都具有各種不同的活性。本實驗為涼粉草的功效作用研究、合理開發利用和質量標準研究提供了科學依據。

[1] 中國科學院中國植物志編委會.中國植物志[M].北京：科學出版社,1997：1849.

[2] 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編(下冊)[M].北京：人民衛生出版社,1978：474.

[3] 陳豐連,黃錦茶,梁欣健,等.HPLC法測定涼粉草中齊墩果酸和熊果酸含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2010,21(4)：416-418.

[4] 劉小玲,李艷,林瑩,等.仙草保肝活性成分的分離純化與結構探析[J].廣西大學學報(自然科學版),2010,35(2)：330-336.

[5] 秦立紅,郭曉宇,范明,等.涼粉草中抗缺氧化學成分[J].沈陽藥科大學學報,2006,23(10)：633-636.

[6] 劉素蓮.涼粉草化學成分的初步研究[J].中藥材,1995,18(5)：247-248.

[7] 馮濤,郁晶晶,楊曉波.涼粉草多糖提取及純化工藝的研究[J].食品工業,2010(1)：82-85.

[8] 黃欽,許楨燦.涼粉草降糖制劑的研制與臨床應用[J].海峽藥學,1995,7(1)：778-779.

[9] 丁婕,黃松,張柏明,等.涼粉草的特征指紋圖譜研究[J].中草藥,2012,43(11)：2284-2287.

[10] 章懷奮,丁婕,黃松,等.涼粉草藥材生產質量的指紋圖譜評價研究[J].中國藥師,2012,15(4)：439-442.

Identification of the Chemical Components in Water Extract of Mesona Chinensis Benth. by High-performance Liquid Chromatography Coupled With Ion Trap Mass Spectrometry

Liu Lanjun Song Weifeng

High-performance liquid chromatography; Ion trap mass spectrometry; Mesona chinensis Benth.; Water extract; Chemical components

】ObjectiveA high-performance liquid chromatography coupled with ion trap mass spectrometry (HPLC-IT-MS) method was established for the identification of the chemical components in water extract of Mesona chinensis Benth.MethodsMesona chinensis Benth. was extracted with water, and the extract was analyzed by HPLC-IT-MS.ResultsUnder the optimized experimental conditions, 16 major peaks were obtained in the chromatogram, and 8 of them were identified by the MS and MSn information obtained by IT-MS. Moreover, 5 of the 8 identified compounds were confirmed according to the reference substances.ConclusionHPLC-IT-MS is a powerful tool for the rapid identification of the chemical components present in Mesona chinensis Benth.

1佛山市禪城區瀾石醫院，廣東佛山 528041

2中山大學附屬第三醫院，廣東廣州 510630

劉蘭軍（1975-），女，大專，主管藥師，主要從事醫院藥學研究，Email：152949550@qq.com，聯系電話：13172337127。

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1673-5846(2013)03-0061-03

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