肺炎克雷伯菌超超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的檢測分析

尹娟 王朔

肺炎克雷伯菌是醫(yī)院內(nèi)感染的常見病原菌，產(chǎn)AmpC酶、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)或同時表達這兩類酶是其主要耐藥機制之一。目前國際上將同時產(chǎn)ESBLs和質(zhì)粒型AmpC酶稱為超超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(SSBLs)陽性。隨著產(chǎn)SSBLs肺炎克雷伯菌檢出日益增多，耐藥性更強，其引起感染的難治性和醫(yī)院內(nèi)感染的爆發(fā)流行給臨床治療和感染控制帶來很大的困難[1]。本文應(yīng)用紙片增強法對本院臨床分離的89 株肺炎克雷伯菌進行了SSBLs檢測，指導(dǎo)臨床合理使用抗菌藥物，控制醫(yī)院內(nèi)感染。

1 資料與方法

1.1 菌株來源 收集本院2011年4月-2013年4月門診分離的各種標(biāo)本的非重復(fù)的肺炎克雷伯菌89 株。所有菌株均經(jīng)法國生物梅里埃公司ATB全自動微生物鑒定儀鑒定。

1.2 儀器與試劑 ATB全自動微生物鑒定儀及配套細菌鑒定板條和試劑為法國生物梅里埃公司產(chǎn)品；M-H瓊脂為英國Oxoid公司產(chǎn)品；3-氨基苯酚硼酸（APB）為美國Sigma公司產(chǎn)品。

1.3 測試紙片 頭孢他啶(CAZ)、頭孢噻肟(CTX)、頭孢西丁(FOX)、頭孢替坦(CTT)、頭孢他啶/克拉維酸(CD02)、頭孢噻肟/克拉維酸(CD03)均為Oxoid公司產(chǎn)品；FOX/APB和CTT/APB紙片的制備:FOX和CTT紙片上分別加入10 μL 40 μg/μL的APB液制成FOX/APB和CTT/APB紙片。

1.4 方法

1.4.1 ESBLs的檢測 利用CAZ和CTX及CD02和CD03紙片,根據(jù)CLSI關(guān)于肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs的紙片法確認實驗,檢測ESBLs[2]。

1.4.2 AmpC酶的檢測 將FOX、FOX/APB和CTT、CTT/APB兩組紙片,按照CLSI紙片擴散法藥敏試驗標(biāo)準，貼于涂布有待檢菌的M-H平皿表面，35℃培養(yǎng)18～24 h，觀察并分別記錄兩組紙片的抑菌環(huán)直徑，含有APB比不含APB的任一組抑菌環(huán)直徑≥5 mm判為AmpC酶陽性[3]。

1.4.3 SSBLs的確認 同時產(chǎn)AmpC酶和ESBLs的菌株為SSBLs陽性株。

1.5 質(zhì)量控制 大腸埃希菌ATCC 25922 和肺炎克雷伯菌ATCC 700603（ESBLs陽性），購自衛(wèi)生部臨床檢驗中心；陰溝腸桿菌029 M（AmpC酶陽性）由浙江大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院饋贈。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用WHONET 5.4 軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理和分析。

2 結(jié)果

89 株肺炎克雷伯菌中檢出ESBLs陽性42 株，占47.2%；AmpC 酶陽性19 株，占21.3%；SSBLs陽性7 株，占7.9%。見表1。

表1 89 株肺炎克雷伯菌檢出的ESBLs、AmpC酶和SSBLs的株數(shù)和百分比

3 討論

近年來，由于廣譜抗菌藥物大量使用，特別是新型β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物(β-內(nèi)酰胺酶抑制劑／復(fù)合劑、頭霉素類、氧頭孢烯類等)在臨床上廣泛應(yīng)用，病原菌耐藥性日益嚴重，已成為全球關(guān)注的問題。SSBLs作為β-內(nèi)酰胺酶中一種特殊的酶，是指某一細菌同時產(chǎn)生質(zhì)粒介導(dǎo)的ESBLs和AmpC酶，其特點是降解的底物更加廣泛，水解率更高；產(chǎn)SSBLs菌株對碳青霉烯類之外的所有β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物及其含酶抑制劑的復(fù)合劑耐藥，其耐藥性同時具有ESBLs和AmpC酶的特點，更易通過質(zhì)粒在不同菌株、菌種乃至不同菌屬中傳播，耐藥性更強，傳播更易，使相應(yīng)細菌感染的控制更為棘手[4]。

本文應(yīng)用紙片增強法檢測89 株肺炎克雷伯菌中檢出ESBLs(+)42 株，占47.2%；AmpC酶(+)19 株，占21.3%，SSBLs(+)7 株，占7.9%。本組數(shù)據(jù)表明肺炎克雷伯菌的ESBLs檢出率與國內(nèi)外的報道相似，未見明顯變化[5-6]，而王明瓊報道從2006年- 2010年，ESBLs檢出率逐年增加[7]；而AmpC酶和SSBLs檢出率略高于國內(nèi)外其它醫(yī)院的報道[6,8]，本研究調(diào)查分析發(fā)現(xiàn)大多數(shù)感染AmpC酶和SSBLs菌株的患者住院時間較長，且臨床醫(yī)師都經(jīng)驗性地選擇使用過三代頭孢（或三代頭孢／酶抑制劑）控制感染，該類抗菌藥物的應(yīng)用增加了對AmpC酶和SSBLs的選擇壓力，同時隨著AmpC酶陽性株檢出的增加，耐藥質(zhì)粒傳播更廣，致使SSBLs的產(chǎn)酶株隨之增加，容易引起醫(yī)院內(nèi)交叉感染爆發(fā)流行；所以建議臨床實驗室技術(shù)人員和感染控制人員應(yīng)對其有充分認識，及時、快速、準確地對其進行檢測，定期公布，此舉對指導(dǎo)臨床合理使用抗菌藥物，動態(tài)觀察病原菌在醫(yī)院的分布情況，控制其傳播流行均有十分重要的意義。

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