YB-1、EGFR表達與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生和發(fā)展的相關(guān)性

孫麗 楊毓琴 高毅 龐琪 李云霞 王秋香

子宮內(nèi)膜異位癥（EM）是一種激素依賴性的疾病，在育齡婦女中較常見，發(fā)病率10%～15%。近年來臨床有年輕化和發(fā)病率上升的趨勢，主要引起進行性痛經(jīng)，性交痛和不孕，不孕率高達30%～40%[1]，嚴重影響家庭的和諧以及生活的質(zhì)量。人們對內(nèi)異癥的機制更近一步的深入，近年來最受關(guān)注的理論是“在位內(nèi)膜決定論”，子宮內(nèi)膜干細胞、古子宮的研究是其進一步的發(fā)展和補充[2]。在形態(tài)上子宮內(nèi)膜異位癥是良性的病變，但卻有廣泛種植，侵潤，遠處轉(zhuǎn)移和較易復發(fā)的特點，因此子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病也可能與很多基因的控制有關(guān)，一些癌基因的檢測可能作為內(nèi)異癥早期診斷以及治療的指標[3-4]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 EM組 資料選取2006年3月—2012年4月甘肅省人民醫(yī)院病理科石蠟包埋組織，所有標本均為甘肅省人民醫(yī)院婦科患者因進行性痛經(jīng)等原因影響正常生活，行子宮切除手術(shù)治療并經(jīng)病理學（見異位腺體上皮和間質(zhì)細胞）確診為EM的60例患者的組織（標本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，HE染色，并由固定病理醫(yī)師診斷）。術(shù)前1年內(nèi)未使用過激素治療，年齡30～50 歲。取其各自子宮在位及異位內(nèi)膜組織，其中38 例增生期，22 例分泌期。

1.1.2 對照組 為40 例同期在本院住院平素月經(jīng)規(guī)律，近1年內(nèi)未使用過激素治療，因盆腔良性病變（非EM）、非惡性腫瘤等原因行子宮切除術(shù)的患者，年齡30～50 歲，取其子宮內(nèi)膜，其中22 例增生期，18 例分泌期。

1.2 實驗方法 用免疫組織化學法檢測各子宮內(nèi)膜異位組織和在位內(nèi)膜中EGFR蛋白的表達。取子宮在位內(nèi)膜以及異位內(nèi)膜組織后用10%甲醛液固定，乙醇脫水，石蠟包埋，制成厚0.4 μm連續(xù)切片、貼片、烤片，按羅氏全自動免疫組化染色機染色，脫水透明，中性樹膠封固。EGFR為兔抗人單克隆抗體（即用型），由中杉金橋技術(shù)公司提供。用已知陽性切片作陽性對照，以PBS 緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判定 采用雙盲法觀察結(jié)果，在高倍顯微鏡下（10×40）觀察細胞著色情況，以鏡下細胞質(zhì)或細胞核中出現(xiàn)棕黃色或棕色顆粒為陽性細胞，按細胞著色程度，淺黃色為弱陽性（+），棕黃色為中度陽性（++），棕褐色為強陽性（+++），無染色反應著為（-），陽性為有表達。

1.4 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 15.0 統(tǒng)計學軟件進行處理，率的比較采用χ2檢驗和Yates校正χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三組患者子宮內(nèi)膜組織中YB-1 的表達 YB-1 在三組子宮內(nèi)膜組織中的分布特點一致，均主要分布在子宮內(nèi)膜腺上皮細胞的細胞核及細胞漿中，正常子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜異位癥中YB-1 的表達強度相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。在位子宮內(nèi)膜與異位子宮內(nèi)膜中YB-1 的表達強度相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 三組患者子宮內(nèi)膜中YB-1 的表達

正常子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜異位癥中YB-1 的表達強度相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），在位子宮內(nèi)膜與異位子宮內(nèi)膜中YB-1 的表達強度相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.2 三組患者子宮內(nèi)膜組織中EGFR的表達 EGFR在三組子宮內(nèi)膜組織中的分布特點一致，均主要分布在子宮內(nèi)膜腺上皮細胞的細胞膜及細胞漿中。正常子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜異位癥中在位子宮內(nèi)膜中EGFR的表達強度相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；正常子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜異位癥中異位子宮內(nèi)膜中EGFR的表達強度相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；在位子宮內(nèi)膜與異位子宮內(nèi)膜中YB-1 的表達強度相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 三組患者子宮內(nèi)膜中EGFR的表達

2.3 三組患者子宮內(nèi)膜組織中YB-1、EGFR的分布 YB-1 在三組子宮內(nèi)膜組織中的分布特點一致，均主要分布在子宮內(nèi)膜上皮細胞的細胞核及細胞漿。但在正常子宮內(nèi)膜，子宮內(nèi)膜異位癥的在位子宮內(nèi)膜，子宮內(nèi)膜異位癥的異位子宮內(nèi)膜中的著色程度依次增強，EGFR在三組子宮內(nèi)膜組織中的分布特點一致，均主要分布在子宮內(nèi)膜上皮細胞的細胞膜及細胞漿。但在正常子宮內(nèi)膜，子宮內(nèi)膜異位癥的在位子宮內(nèi)膜，子宮內(nèi)膜異位癥的異位子宮內(nèi)膜中的著色程度依次增強（如圖1～6）。

圖1 EGFR在正常子宮內(nèi)膜腺上皮細胞膜和細胞質(zhì)胞漿中為弱表達。

圖2 EGFR在子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位子宮內(nèi)膜的腺上皮細胞膜和胞漿中度陽性表達。

圖3 EGFR在子宮內(nèi)膜異位癥患者的異位子宮內(nèi)膜的腺上皮細胞膜和胞漿強陽性表達。

圖4 YB-1 在正常子宮內(nèi)膜腺上皮細胞核和胞漿中表達為陰性。

圖5 YB-1 在子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位子宮內(nèi)膜的腺上皮細胞核和胞漿中度陽性表達。

圖6 YB-1 在子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位子宮內(nèi)膜的腺上皮細胞質(zhì)中強表達。

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥是最常見的婦科疾病之一，發(fā)病率10%～15%，發(fā)病機制尚不明確。近年來最受關(guān)注的學說為“在位內(nèi)膜決定論”，即子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位內(nèi)膜可能為子宮內(nèi)膜癥發(fā)生的遺傳性基礎，某些基因的表達可能對內(nèi)膜細胞的粘附、侵襲和生長起到至關(guān)重要的作用。

YB-1 是一個定位于1 p 34 染色體片段，分子質(zhì)量為35 ku的基因，通過與基因啟動子區(qū)的Y-box元件結(jié)合,調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程，參與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和惡化等過程。在本次研究中YB-1 在正常子宮內(nèi)膜，子宮內(nèi)膜異位癥的在位子宮內(nèi)膜以及異位子宮內(nèi)膜中的表達呈遞增趨勢，與Silveira等[5]多數(shù)學者的觀點一致，即：YB-1 在子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位內(nèi)膜，異位內(nèi)膜組織和細胞，以及子宮內(nèi)膜異位癥患者腹壁的巨噬細胞內(nèi)均有高表達，特別是在子宮內(nèi)膜異位癥患者的子宮內(nèi)膜上皮細胞內(nèi)表達更高。

表皮生長因子受體（EGFR）是一種基因定位于7 號染色體7 p 13-g 22，分子量為170 KD的糖蛋白，大多數(shù)存在于細胞膜和胞漿內(nèi)，有酪氨酸激酶的活性，具有促進各種上皮組織細胞增殖和分化的效應。在本次研究中示：EGFR在三組子宮內(nèi)膜組織中的分布特點一致，均主要分布在子宮內(nèi)膜腺上皮細胞的細胞膜及細胞漿內(nèi)。但在正常子宮內(nèi)膜，子宮內(nèi)膜異位癥的在位子宮內(nèi)膜，子宮內(nèi)膜異位癥的異位子宮內(nèi)膜中的著色程度依次增強。與Luo X等[6]研究相一致，即EGFR廣泛存在于人類的生殖器官如子宮、卵巢、胎盤等部位的細胞膜和胞漿內(nèi)EGFR，且參與細胞的生長、增殖、分化、粘附等現(xiàn)象。EGFR有望成為為一個潛在的早期診斷和治療子宮內(nèi)膜異位癥的靶點。

本次研究表明，YB-1與EGFR在子宮內(nèi)膜中的表達呈協(xié)同作用，與Stratford AL等[7]對乳腺癌的研究相一致，即YB-1 可正調(diào)控表皮細胞生成因子受體(EGFR)的表達，促進乳腺癌細胞的惡性增殖從而抑制YB-1 活性能夠有效地抑制腫瘤生長。因此YB-1 與EGFR聯(lián)合檢測有助于對子宮內(nèi)膜異位癥的早期診斷和治療提供可靠的依據(jù)，達到更好的治療效果。