妊娠期肝內膽汁淤積癥患者胎盤組織中HO-1的表達變化及意義

李紅霞，劉伯鋒，姚珍薇，邵 勇

(1延安大學附屬醫院，陜西延安716000;2延安大學醫學院;3重慶醫科大學第一附屬醫院)

妊娠肝內膽汁淤積癥(ICP)是妊娠期特有的疾病，可導致早產、胎兒窘迫及突然胎死宮內，使圍產兒及新生兒病死率增高，但ICP發病機制至今仍未完全明了。血紅素氧化酶(HO)是進化上高度保守的一族微粒體酶，在調節機體鐵離子穩定、抗氧化防御機制中有重要作用。HO有三種同工酶，HO-1為誘導型，其與妊娠期高血壓疾病和胎兒宮內發育遲緩的關系屢有報道［1，2］，但 HO-1與 ICP 關系的研究報道較少。2010年6月～2011年12月，我們采用免疫組織化學及圖像分析的方法檢測了HO-1在不同程度ICP胎盤組織中的表達，旨在為進一步探討ICP的病因及臨床防治提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 60例ICP患者(ICP組)，年齡(27.53±2.43)歲。均為初產婦，單胎，胎次(2.59±1.29)次，孕周(37.24±1.48)周。均符合《中華婦產科學》［3］ICP診斷標準，其中臨床分度為輕度(膽酸20～50 μmol/L，ALT 50～100 U，AST 50～100 U，3 項指標只要有兩項達到即符合標準)、中度(膽酸50～100 μmol/L，ALT 101～150 U，AST 101～150 U，3項指標只要有兩項達到即符合標準)、重度(膽酸＞100 μmol/L，ALT＞150 U，AST＞150 U，3項指標只要有兩項達到即符合標準)各20例。另選擇30例晚期妊娠住院正常孕婦為對照組，年齡(26.23±2.01)歲，胎次(2.51±1.26)次，孕周(38.52±0.53)周。無妊娠期高血壓疾病、慢性高血壓、糖尿病及其他心血管等內科疾病，無皮膚瘙癢及黃疸，肝腎功能正常。

1.2 HO-1檢測方法 胎盤娩出后迅速避開鈣化點，取母體面中央區約1.0cm×1.0cm組織，置于4%多聚甲醛中固定、石蠟包埋。使用SP免疫組化法檢測HO-1表達。一抗使用多克隆兔抗人血紅素氧合酶-1(HO-1)抗體(Sigma公司)，稀釋度為1∶100，二抗采用生物素標記的羊抗兔IgG(1∶100)(武漢博士德公司)。3，3-二氨基苯聯胺染色，鏡下檢查細胞質或胞膜呈棕黃色或黃色顆粒為陽性。用圖像分析儀對HO-1表達進行定量分析，以平均光密度(OD)值表示著色強度。OD值越大表示抗原含量越高。

1.3 統計學方法 采用SAS8.2統計軟件，計量資料用±s表示，兩兩比較用q檢驗，P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

HO-1表達于胞質或胞膜，對照組整個絨毛實質均有著色，且為明顯棕黃色(見圖1)。重度ICP者僅部分滋養細胞著色，絨毛基質內的毛細血管內皮細胞著色少或無(見圖2)，中度ICP者少數絨毛部分著色(見圖3)，而輕度ICP者整個絨毛實質幾乎均有著色，且為明顯棕黃色(見圖4)。對照組胎盤組織中HO-1表達的OD值為1.512 6±0.102 4，輕、中、重度ICP胎盤組織中HO-1表達的OD值分別為1.253 6±0.112 5、1.130 7±0.106 4、0.721 8±0.105 9，對照組與輕度 ICP者比較，P＜0.05，與中度ICP者比較，P＜0.01，輕、中度ICP與重度比較，P 均 ＜0.05。

圖1 HO-1在正常胎盤組織中強陽性表達(SABC×400)

圖2 HO-1在重度ICP妊娠胎盤組織中弱陽性表達(SABC×400)

圖3 HO-1在中度ICP妊娠胎盤組織中陽性表達(SABC×400)

圖4 HO-1在輕度ICP胎盤組織中陽性表達(SABC×400)

3 討論

ICP是妊娠期特有的并發癥，目前病因不明。有學者對 ICP 胎盤的形態學［4］、組織計量學［5］、血流動力學［6］及胎盤膜對氧的擴散能力［7］等進行研究，結果提示ICP胎盤改變可能僅引起胎盤氧儲備力下降，胎盤自身因素可能并非ICP胎兒缺氧及死亡的確切原因。

近年研究提示HO-1具有抗炎、抗凋亡、抗增生效應，并且在相關病癥如動脈硬化、腦缺血、器官移植排斥反應中具有細胞保護作用。因此，HO-1的生物學活性及其在臨床眾多疾病中的保護作用已受到諸多學者的關注。HO的抗氧化作用有最佳表達閾值［8］，HO適量表達，可以減少細胞死亡、蛋白質氧化及脂質過氧化，促進細胞增殖;表達量過高，則可能破壞細胞的完整性;表達降低，保護作用下降，細胞易受各種有害因素的侵襲。Makino等［9］認為HO-1降低血管張力的作用主要通過內源性一氧化碳(CO)的作用而實現。CO可以調節子宮胎盤血流動力學，參與滋養細胞分化與浸潤、胎盤血管的功能調控，使循環血管保持一定程度的松弛，以適應妊娠的需要，保證子宮胎盤的血流灌注［10～12］。據報道，HO表達增多能增加胎盤血管和舒張，且與CO的生成量呈正相關［10］。國外學者研究表明，正常妊娠時大鼠和人類胎盤均有大量HO-1表達，且妊娠大鼠HO-1水平顯著高于其非孕時肝和脾中的HO水平［11］。隨妊娠進展需要較多的CO維持胎兒的發育。HO是血紅素降解生成CO的限速酶，隨妊娠進展HO需要量亦增加。HO-1蛋白主要定位于胎盤合體滋養細胞及絨毛間質細胞，胎盤干絨毛動脈血管周圍基質亦有陽性表達［12］。本研究結果與此一致。HO-1的作用可能有利于滋養細胞從母血中攝取更多營養物質、調節絨毛血管的發育。研究發現，將人類HO-1基因轉染至冠狀動脈內皮細胞，能加速細胞的生長和血管生成［10］。對妊娠的大鼠轉染HO-1基因后，鼠仔的體質量明顯增加，且轉染組胎盤組織中VEGF、IGF-1及其受體表達相應增加，提示HO-1及其催化產物不僅能直接增加胎兒胎盤循環血流，還能通過信號轉導系統，加強胎盤生長因子的表達和激活，進一步改善胎盤循環和胎兒生長發育［2］。若HO的表達不足，可能與病理妊娠有關。

本實驗發現HO-1在不同程度ICP患者胎盤組織中均有表達，并且隨著ICP患者病情加重表達減弱。經圖像分析重度ICP者HO-1表達水平比輕度和中度者明顯下降。HO-1在ICP胎盤組織中表達下調，此可能是ICP的發病原因之一。Ahmed等［13］亦有類似的結果。提示妊娠期胎盤部位表達的HO-1可能作為內源性保護系統，保護胎盤組織免受氧化損傷及調控胎盤血管舒張，對正常妊娠維持起重要作用。故推測HO-1表達的異常是造成ICP及胎兒不良預后的原因之一，并且與疾病的嚴重程度有關。臨床監測HO-1對于確定疾病分度、療效觀察及胎兒預后均有積極意義。

［1］Deramaudt BM，Braunstein S，Remy P，et al.Gene transfer of human heme oxygenase into coronary endothelial cells potentially promotes angiogenesis［J］.Cell Biochem，1998，68(1):121-127.

［2］Kresier D，Nguyen X，Wong R，et al.Heme Oxygenase-1 modulates fetal growth in the rat laboratory［J］.Investigation，2002，82(6):687-692.

［3］曹澤毅.中華婦產科學［M］.北京:人民衛生出版社，1999:503.

［4］Costoya AL，Leontoic EA，Rosenberg HG，et al.Morphological study of placental terminal villi in intrahepatic cholestasis of pregnangy:histochemistry ，light and electron microscopy［J］.Placenta，1998，1(4):361-368.

［5］劉伯寧，沈寧，陶文琪，等 妊娠期肝內膽汁淤積癥胎盤的組織計量測定［J］.中華婦產科雜志，1985，13(20):132.

［6］Kaar K，Jouppila P，Kuikka K，et al.Intervillous blood flow in normal and complicated late pregnancy measured by means of an intravenous 133Xe method［J］.Acta Obstet Gynecol Scand，1980，59(1):7-10.

［7］王曉東，劉淑蕓，衡正昌.妊娠肝內膽汁淤積癥胎兒宮內缺氧機理的初步探討［J］.中華婦產科雜志，1998，33(2):68.

［8］Colin-Gonzalez AL，Orozco-lbarra M，Chanez-Cardenas ME，et al.Heme oxygenase-1(HO-1)upregulation delays morphological and oxidative damage induced in an excitotoxic/pro-oxidant model in the rat striatum［J］.Neuroscience，2012，29(12):1142-1146.

［9］Makino A，Kamata K.Elevated plasma endothelin-1 level in streptozotolin induced diabetic rats and responsiveness of the mesenteric arterial bed to endothelin-1［J］.Br J pharmacol，1998，123(6):1065-1072.

［10］Lyall F，Barber A，Myatt L，et al.Hemeoxygenase expression in human placenta and placenta bed implies a role in regulation of trophoblast invasion and placenta function［J］.FASEB，2000，14(1):208-219.

［11］Kreiser D，Nguyen X，Wong R，et al.Heme oxygenase-1 modulates fetal growth in the rat［J］.LAB Invest，2002，82(6):687-692.

［12］McCaig D，Lyall F.Inhibitors of heme oxygenase reduce invasion of human primary cytotrophoblast cells in vitro ［J］.Placenta，2009，30(6):536-538.

［13］Ahmed A，Rahman M，Zhang X，et al.Induction of placental heme oxygenase-1 is protective against TNF alpha-induced cytotoxicity and promotes vessel relaxation［J］.Mol Med，2000，6(5):391-409.