非小細胞肺癌組織中VEGF表達的Meta分析

鐘麗娟，洪 偉，徐 萌

(1暨南大學附屬第一醫院，廣州510632;2惠州市第六人民醫院)

血管內皮生長因子(VEGF)是一種血管內皮分裂原，具有高度特異性，是目前已知作用最強的一種促血管生長因子［1］。由于VEGF對血管內皮細胞增殖、遷移和血管構建有較強的調控作用，其在非小細胞肺癌(NSCLC)中的表達，能否成為NSCLC早期診斷、預后判斷及療效監測的新方法，近年來已成為國內外學者研究的一大熱點。但由于受研究方法、條件、統計方法及研究對象等因素的影響，同類研究質量參差不齊，研究結果不盡相同。本研究運用Meta分析方法，對國內外多個運用免疫組織化學法檢測NSCLC組織中VEGF表達的文獻進行分析。

1 資料與方法

1.1 文獻檢索 以“VEGF、NSCLC、non-small cell lung cancer”等為英文檢索詞，檢索Cochrane Library、PubMed、SCI等數據庫中2005年至今的相關文獻;同時以“血管內皮生長因子、非小細胞肺癌”等中文關鍵詞檢索CNKI、萬方數據、中國生物醫學文獻數據庫等數據庫;輔以手工檢索。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準 ①國內外公開發表的，并提供原始數據的VEGF與NSCLC及其臨床病理關系的病例對照研究。②研究對象:NSCLC組為經病理檢查確診的NSCLC患者，取材前均未經放療或化療;對照組為癌旁或肺部良性疾病組織。③VEGF檢測方法為免疫組化法。④統計方法應用恰當，數據質量可靠，結果表達明確，可計算出比值比(OR)及95%可信區間(CI);對源于同一人群、數據使用一致的重復發表文獻，選擇樣本量最大的一篇文獻作為研究文獻。

1.2.2 排除標準 ①VEGF檢測方法為免疫組化非SP法及陽性判斷標準不一致者。②重復報告或資料雷同、質量較差等無法利用的文獻。③綜述、評論、會議摘要及病例報道類文章。④原始文獻研究對象不是人類。⑤重復報道、數據描述不清的研究。⑥沒有設置對照組。⑦小細胞肺癌研究。

1.3 質量評價 參照Lichtenstein等［2］的病例對照研究評價指南，對各獨立研究從以下幾個方面進行質量評估，以考察各個研究是否存在偏倚及其影響程度:①研究對象納入標準及其基本構成特征是否明確。②實驗設計是否科學。③處理因素及其方法是否準確。④統計方法是否恰當。⑤是否就本研究存在的偏倚進行了討論。以上5項，每滿足1項為1分，總分≥3分者，質量可靠。

1.4 統計學方法 應用Cochrane協作網提供的Rev-Man5.1統計軟件進行Meta分析。計算OR及95%CI作為效應量表示結果。對各研究進行異質性檢驗(以α=0.01為檢驗水平)。若各研究間不存在異質性，采用固定效應模型進行分析，反之則采用隨機效應模型。剔除研究中小樣本進行敏感性分析，重新估計合并效應量，并與排除前的合并效應量進行比較。繪制漏斗圖，檢驗其對稱性，從而識別文獻是否存在發表性偏倚。

2 結果

2.1 檢索結果及質量評價 共檢索到116篇相關文獻，根據文獻的納入和剔除標準，有9篇［3～11］納入Meta分析，累積NSCLC病例807例(NSCLC組)，對照組305例。質量評價結果顯示該9個研究的診斷標準明確、NSCLC組樣本量充足、結果數據明確，均≥4分，質量可靠。

2.2 VEGF表達分析結果

2.2.1 VEGF在NSCLC組和對照組的表達 納入的9篇文獻中，NSCLC組807例，對照組305例。由于各研究間差異無統計學意義(P=0.76)，故采用固定效應模型進行Meta分析。結果顯示，VEGF在NSCLC組中的表達高于對照組，差異有統計學意義(OR=11.34，95%CI為8.15 ～15.76，P ＜0.01)，見圖1。

圖1 VEGF在NSCLC組和對照組表達的Meta分析

2.2.2 VEGF表達與NSCLC臨床病理關系 對納入研究中VEGF在NSCLC中的表達進一步分析，Meta分析結果顯示，VEGF表達與NSCLC的分化程度(OR=0.29，95%CI為 0.16 ～0.53，P ＜0.01)、淋巴結轉移(OR=0.16，95%CI為 0.08 ～0.33，P ＜0.01)、TNM 分期(OR=0.36，95%CI為 0.22 ～0.58，P ＜0.01)有關，而與病理分型(P=0.97)及患者的年齡(P=0.97)性別(P=0.28)無關。

2.3 敏感性分析 在9篇NSCLC組與對照組文獻中剔除2篇［3，11］小樣本文獻的研究后發現，得到合并 OR 及 95%CI分別為 11.57、8.05 ～16.63(P ＜0.01)，與剔出前結果基本一致。由于本分析中各研究間差異無統計學意義(P=0.87)，采用固定效應模型進行Meta分析，現改用隨機效應模型進行Meta分析，得到合并 OR及95%CI分別為11.60、8.05 ～16.71(P ＜0.01)，與剔出前結果基本一致。

2.4 發表偏倚分析 在9篇文獻NSCLC組與對照組中，繪制漏斗圖發現，納入的文獻完整地出現在各自圖上，并且以合并效應量OR值為中心散開分布，基本對稱，呈倒置漏斗形，提示無明顯發表性偏倚，見圖2。

圖2 VEGF表達與NSCLC關系的漏斗圖分析

3 討論

VEGF能夠顯著增加微血管的通透性，是目前已知作用最強的血管通透因子，是由Ferrar等［12］從牛垂體濾泡星狀細胞培養液中分離純化而來的一類糖蛋白。VEGF是血小板衍生生長因子家族的一員，廣泛分布于人和動物體內的大腦、腎臟、肝臟、脾臟、胰腺和骨骼等組織中，但一般水平較低。目前已知VEGF與腫瘤血管生成、生長、浸潤密切相關，為明確VGEF表達與NSCLC之間的關系，本研究對此進行Meta分析。

本研究Meta分析納入的文獻，其設計方案一致，NSCLC組與對照組基線具有可比性，因此納入的文獻資料較可信、代表性較好。對源于同一人群、數據使用一致的重復發表文獻，選擇樣本量最大的一篇作為研究文獻。在納入的9篇VEGF病例對照研究文獻中，Meta分析結果顯示，VEGF在NSCLC組織中的表達水平顯著高于癌旁、良性肺部疾病組織，且VEGF表達與NSCLC的分化程度、淋巴結轉移、TNM分期明顯相關，但與其病理分型、年齡及性別無明顯相關。在NSCLC組與對照組中剔出小樣本研究后發現，剔出后的結果與剔出前結果基本一致，增加了結果的可靠性。偏倚因素的存在可能會影響Meta分析結果的真實性，通過漏斗圖分析可知，納入的研究分布基本對稱并且完整，各研究點圍繞合并效應量分布，呈倒漏斗形，說明納入的文獻發表性偏倚較小，從而進一步增加結果的可靠性。然而，本研究納入文獻均為公開發表的文獻，且文種限制在英文、中文，可能影響Meta分析的結果。

由于肺癌的發生是一個多因素、多階段的過程，僅從VEGF蛋白的表達水平加以研究，可能存在一定局限性。因此，我們建議對NSCLC進行聯合檢測(如bFGF、Survivin等);從基因水平檢測 VEGF相關基因與NSCLC的關系，并探討相應的基因治療;聯合血清VEGF水平檢測，提高準確性，為臨床選擇治療方法及判斷預后提供依據。同時，從不同機制了解NSCLC的侵襲和轉移，并進一步探索防止其侵襲和轉移的方法，是NSCLC治療取得突破性進展的希望。體外細胞培養實驗及動物腫瘤植入模型表明，抗VEGF藥物可促使腫瘤細胞凋亡［13］。目前，由VEGF介導新生血管信號通路的抑制劑已開始臨床應用，為晚期NSCLC患者改善預后提供了更多的選擇。貝伐單抗(Bevacizumab)就是抗血管生成靶向治療藥物中的典型代表，是一種針對VEGF的人類重組單克隆抗體。目前，一項大型Ⅲ期臨床試驗評估了Bevacizumab聯合標準化療方案(卡鉑/紫杉醇)的有效性和耐受性［14］。隨著研究的深入，VEGF靶向治療必將為腫瘤治療開創一個全新的領域。

總之，VEGF在 NSCLC組織中高表達，且與NSCLC的分化、淋巴結轉移、臨床分期密切相關，提示VEGF可能促進了癌灶局部微血管的生成，參與NSCLC的轉移和浸潤。檢測VEGF在NSCLC組織中的表達，可作為評估NSCLC生物學行為的重要指標，對患者的早期診斷、分期、判斷預后、篩選轉移高危病例具有重要價值，是抗血管生成靶向治療過程中指導治療、判斷療效及監測病情的重要生物標記物。

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