外周血異型淋巴細胞比值聯合EBV-DNA載量在小兒傳染性單核細胞增多癥診斷中的應用研究

梁少霞

佛山市第五人民醫院兒科，廣東佛山 528211

對于小兒傳染性單核細胞增多癥而言，作為急性自限性傳染病一種，其基礎病理主要體現為EB病毒感染，并且對淋巴細胞造成侵犯，其癥狀為淋巴結腫大、發熱以及咽峽炎，以外周淋巴細胞增高為要表現[1-2]。小兒因為其機體抵抗力、自身免疫系統發育不完善，對外界環境的應激刺激表現出較差抵抗能力，患傳染性單核細胞增多癥疾病概率較高[3]。近年來，此種疾病出現概率顯著增加，對小兒生存產生嚴重威脅[4]。當前未明確此種疾病具體發病機制，并且其表現呈現出多樣化特點，發病早期無典型癥狀，顯著增加疾病診斷難度[5]。對此確定有效方法實施實驗室檢查，對于順利診斷傳染性單核細胞增多癥具有顯著價值。該研究選取該院2020年3月—2021年8月收治的50例小兒傳染性單核細胞增多癥引發的發熱患兒和其他發熱患兒50例作為研究對象，旨在探討實施小兒傳染性單核細胞增多癥診斷期間外周血異型淋巴細胞比值+EBV-DNA 載量檢測的應用可行性，為達到促進小兒傳染性單核細胞增多癥預后水平提升目標，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的50例小兒傳染性單核細胞增多癥引發的發熱患兒作為研究組；同時期選取該院收治的50例其他發熱患兒作為參照組。該研究通過醫院倫理委員會的批準。納入標準：患兒均接受外周血異型淋巴細胞比值+EBV-DNA 載量檢測；患兒以及家屬對于該次研究均知曉，并順利簽署知情同意書。排除標準：表現出嚴重臟器功能不全現象者；表現出先天畸形現象者；患有惡性腫瘤者。參照組男30例、女20例；年齡5～16歲，平均（8.02±1.23）歲。研究組男31例、女19例；年齡6～16歲，平均（8.09±1.25）歲。兩組研究對象一般資料比較，差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

利用全自動血細胞分析儀（日本Sysmex1000i）完成單核細胞百分比檢測。利用EDTA-K2 抗凝管完成1.5～2.5 mL 血量采取，之后進行混合顛倒，進行3～5 次搖勻。控制檢測時間為10 min～1 h。具體操作期間，主要利用原廠家質控品以及配套試劑完成，均依據相關要求規范，完成系列操作。利用實時定量PCR技術完成EBV DNA 載量檢測。具體為：首先抽取患兒4 mL 靜脈血，之后放置于枸櫞酸鈉抗凝管中。具體檢測期間，合理采用Tagman 熒光標記探針基因擴增技術完成對應檢測。對于PCR 擴增條件為：于各反應管中放入實時熒光PCR 檢測儀DA7600。依據以下條件完成擴增操作：選擇若干PCR 反應管，分別準備2 μl處理后樣品上清液放入，以8 000 r/min 轉速實施數秒離心，之后放入熒光定量PCR 檢測儀樣品槽中。依據對應順序合理完成陽性定量參考品、陰性質控品以及待測標本設置。在93℃環境下，合理進行2 min 預變性，之后于93℃環境下進行45 s變性后，于55℃環境下轉入進行60 s 變性。保持10個循環往復。最終在93℃環境保持30 s變性后，轉入55℃環境下進行45 s 變性。保持30 個循環往復。具體操作依據說明書嚴格展開。采集患兒末梢血進行，合理展開端氏染色操作。通過高倍顯微鏡引導，對異常淋巴細胞以及比例進行觀察。

1.3 觀察指標

針對兩組患兒合理展開外周血異型淋巴細胞比值+EBV-DNA 載量檢測，就兩組單核細胞（M）、EBV-DNA、異型淋巴細胞展開對比。

1.4 統計方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據處理，符合正態分布的計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

研究組M、EBV-DNA、異型淋巴細胞均高于參照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患兒M、EBV DNA、異性淋巴細胞比較(±s)

表1 兩組患兒M、EBV DNA、異性淋巴細胞比較(±s)

組別研究組(n=50)參照組(n=50)t值P值M（%）18.25±3.22 13.25±2.05 9.262＜0.001 EBV DNA（copies/mL）（7.32±2.25）×107（1.49±0.25）×107 18.210＜0.001異性淋巴細胞（%）29.25±5.52 2.02±0.15 34.868＜0.001

3 討論

對于傳染性單核細胞增多癥而言，作為亞急性或者急性淋巴細胞良性增生傳染病癥一種，主要因為EB病毒感染導致，于兒童時期或者青少年時期多見。于嬰兒、成年人或者老年群體則表現出相對較低發病率，屬于兒科發病率較高的疾病一種[6-11]。此種疾病癥狀復雜，缺乏典型性特征。少數會出現EB病毒相關性噬血細胞綜合征現象，或者出現自發性脾破裂情況，對患兒生命安全產生威脅[12]。

該次研究發現，研究組M（18.25±3.22）%、EBV-DNA（7.32±2.25）×107copies/mL、異型淋巴細胞（29.25±5.52）%均高于參照組（P＜0.05）。在相關研究中得出，患兒為單核細胞增多癥引發的發熱時M（17.35±3.14）%，異型淋巴細胞為（26.34±5.11）%，明顯高于其他發熱情況[13]，與該文所得結果相近，分析此種結果原因為，患兒在出感染情況后，自身機體淋巴細胞會表現出過度上升現象，從而獲得上述結果。通過對結果進行觀察發現，針對傳染性單核細胞增多癥患兒實施檢測期間，單核細胞具有重要意義。在患兒呈現出異型淋巴細胞增加現象后，會對應導致單核細胞百分比上升。分析儀器將異型淋巴細胞同單核細胞兩者相混淆，從而使單核細胞數量呈現出一定程度增加。此外針對單核細胞以及白細胞數量均上升患兒，需要考慮其出現白血病現象。對此，針對細胞形態，需要利用血涂片完成對應檢測。在實施傳染性單核細胞增多癥診斷期間，會出現異型淋巴細胞獲得廣泛應用。通常情形下，在發病后第3 天，異型淋巴細胞，在第7 天表現出逐漸增多現象，通常達到10%。在第2～3 周，最高可達到40%以上，之后逐漸降低，共持續5～7 周。期間需要注意，在其他病毒感染病癥中，也會發現異型淋巴細胞現象[14]，例如巨細胞病毒等。對此需要通過其他項目輔助，顯著提高小兒傳染性單核細胞增多癥診斷結果。

在實時熒光定量PCR 檢測技術獲得快速發展情況下，EBV-DNA 定量檢測獲得廣泛應用。作為EBV 感染分子生物學標記中的一種，EBV-DNA 定量檢測具有簡便、快速以及特異性強等系列優勢[15]。并且對于PCR 技術而言，其能夠高效擴增，表現出較高精確性以及特異性，于臨床診斷中獲得廣泛應用，可以幫助醫師對EB病毒感染患兒進行確診。并且在實施抗病毒療效判斷期間，能夠通過病毒核酸量進行客觀反映。此外在實施病原體感染血液篩查中，PCR 的有效運用，有效檢出尚未出現于窗口期內的抗原抗體感染，從而防止因為輸血而呈現出的系列感染性疾病傳播現象。

綜上所述，外周血異型淋巴細胞比值+EBVDNA載量聯合應用，可通過對M、EBV-DNA、異型淋巴細胞加以明確，顯著提高小兒傳染性單核細胞增多癥診斷準確性，為疾病早期確診奠定基礎。