顯色劑對土壤磷酸酶活性測定結果的影響

杜社妮

（1.西北農林科技大學 水土保持研究所，陜西 楊凌 712100；2.中國科學院 水利部水土保持研究所，陜西 楊凌 712100）

植物生長發(fā)育需要大量的磷素，植物體需要的磷主要是從土壤中獲得，土壤的磷素營養(yǎng)包括有機磷和無機磷，我國土壤的有機磷一般占到土壤全磷的50%～80%［1］，有機磷對植物的供磷有一定的貢獻［2－5］，但是土壤中的少部分有機磷被植物直接吸收利用，大部分有機磷要在土壤磷酸酶的酶促作用下轉換為有效態(tài)磷才能被植物吸收利用［6］，因此土壤磷酸酶活性可以表征土壤磷素的狀況。影響土壤磷酸酶活性的因素的研究很多［7－12］，并且研究較深，但是不同顯色劑對磷酸酶活性測定結果的影響研究較少。測定土壤磷酸酶的方法有測釋放的無機磷含量法、酚酞磷酸鈉法、磷酸苯二鈉法、P－硝基苯磷酸鈉法及β－萘酚磷酸鈉法［13］，其中最常用的方法是磷酸苯二鈉法，但此法用到的顯色劑2，6－雙溴苯醌氯酰亞胺，價格高，要現(xiàn)用現(xiàn)配制，比較麻煩而且浪費。為了減少工作量和測定成本，本文比較研究了2，6－雙溴苯醌氯酰亞胺、2.5%的鐵氰化鉀和0.5%的4－氨基安替吡啉作顯色劑對土壤磷酸酶測定結果的影響，以期為土壤磷酸酶的測定尋求適宜的顯色劑。

1 材料與方法

1.1 供試土壤

土壤樣品為陜西長武國家生態(tài)系統(tǒng)研究網(wǎng)絡的長期定位研究觀測場，前茬為小麥茬。選取6個樣區(qū)，每個樣區(qū)設5個采樣點，每點取地面下0～20cm的土壤，然后5個采樣點的土樣混合、風干，研磨碎后過1mm篩，裝袋，供測定時使用。

1.2 試驗設計與方法

土壤磷酸酶的測定方法采用磷酸苯二鈉法［14］，實驗采用2種顯色劑，一種為常用的2，6－雙溴苯醌氯酰亞胺，另一種為2.5%的鐵氰化鉀溶液和0.5%的4－氨基安替吡啉溶液，每種顯色劑下設3個處理，即當天配制的顯色劑、配制后放置1d的顯色劑、配制后放置2d的顯色劑。實驗過程中所使用的儀器、程序、步驟、比色方法和其他試劑都相同，唯一不同的是加入的顯色劑不同。加入顯色劑后20～30min在分光光度計上于波長570nm處測定光密度值，用樣品的光密度值減去對照的光密度值的差值，根據(jù)用酚制備的標準曲線查出供試溶液中酚的含量。土壤的磷酸酶活性以每100g土酚的毫克數(shù)表示。

2 結果與分析

從表1可以看出，用放置1d和2d的2，6－雙溴苯醌氯酰亞胺作顯色劑測定的磷酸酶活性均小于用當天配置的2，6－雙溴苯醌氯酰亞胺作顯色劑測定的磷酸酶活性，且達到顯著性差異（P＜0.05）或極顯著性差異（P＜0.01）。用配制當天、配制放置1d和2d的2.5%的鐵氰化鉀和0.5%的4－氨基安替吡啉作顯色劑測定的磷酸酶活性的差異較小，沒有達到顯著性差異（P＞0.05）；用當天配制的2種顯色劑測定的磷酸酶活性也沒有達到顯著性差異；用配制后放置1d和2 d的2.5%的鐵氰化鉀和0.5%的4－氨基安替吡啉作顯色劑測定的磷酸酶活性與用當天配制的2，6－雙溴苯醌氯酰亞胺作顯色劑測定的磷酸酶活性的差異小，沒有達到顯著性差異。

表1 不同處理土壤磷酸酶的活性 mg／100g

3 結論

用2，6－雙溴苯醌氯酰亞胺作顯色劑測定土壤磷酸酶活性時，要現(xiàn)用現(xiàn)配，用2.5%的鐵氰化鉀和0.5%的4－氨基安替吡啉作顯色劑測定土壤磷酸酶活性時，最多不要超過3d。2.5%的鐵氰化鉀和0.5%的4－氨基安替吡啉代替2，6－雙溴苯醌氯酰亞胺作顯色劑測定磷酸酶活性，測定結果不受影響。

（

）

［1］Harrison A E.土壤有機磷：文獻述評［J］.土壤學進展，1990，18（1）：11－19.

［2］孫曦，章永松.有機肥料和土壤中的有機磷對水稻的營養(yǎng)效果［J］.土壤學報，1992，29（4）：365－369.

［3］Firsching B M，Claassen N.Root phosphatase activity and soil or－ganic phosphorus utilization by Norway Spruce［J］.Soil Biol Biochem，1996，28（11）：1417－1424.

［4］沈善敏，陳欣.中國土壤肥力［M］.北京：中國農業(yè)出版社，1998，212－273.

［5］Tarafdar J C，Claassen N.Organic phosphorus compounds as a phosphorus source for high plant through the activity of phosphatase produced by plant roots and microorganisms［J］.Biol Fertil Soils，1988（5）：308－312.

［6］Skujins J J.History of abiontic soil enzyme research.In：Burn s R.G.and Dick R.P.（eds.）.Soil Enzymes［M］.New York：Academic Press，1978：1－49.

［7］于群英.土壤磷酸酶活性及其影響因素研究［J］.安徽技術師范學院學報，2001，15（4）：5－8.

［8］沈菊培，陳利軍.土壤磷酸酶活性對施肥—種植—耕作制度的響應［J］.土壤通報，2005，36（4）：622－627.

［9］夏棟，許文年，趙自超，等.土壤磷酸酶測定中不同緩沖溶液對顯色液吸收波長的影響［J］.湖北農業(yè)科學，2012，51（5）：997－999.

［10］張國秀，趙允格，許明祥，等.黃土丘陵區(qū)生物結皮對土壤磷素有效性及堿性磷酸酶活性的影響［J］.植物營養(yǎng)與肥料學報，2010，18（3）：621－628.

［11］劉淑英.有機無機肥配施對灌耕灰鈣土堿性磷酸酶和土壤磷素的影響［J］.土壤通報，2011，42（3）：670－675.

［12］楊恒山，張慶國，邰繼承，等.種植年限對紫花苜蓿地土壤pH值和磷酸酶活性的影響［J］.中國草地學報，2009，31（1）：32－35.

［13］徐光暉，鄭洪元.土壤微生物分析方法手冊［M］.北京：農業(yè)出版社，1988：274－280.

［14］中國科學院南京土壤研究所微生物室.土壤微生物研究法［M］.北京：科學出版社，1985：273－275.