GC—ECD法測定珠子參中有機氯農藥殘留量

基金項目：痛舒膠囊大品種培育示范項目（編號：2010BC007）

通信作者：趙毅，男，云南人，正高級工程師，主要從事藥品質量標準提高方面的研究，Email：yf_niu@126com

摘要：目的：建立了氣相色譜一電子捕獲檢測（ECD）法測定珠子參中有機氯農藥殘留方法。方法：采用Agilent DB-624毛細管柱（30 m×032 mm×18 um）；升溫程序：初始溫度100℃，15℃/min升至220℃，再以10℃/min升至250℃，保持17 min；進樣量：10ul。結果：六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）、五氯硝基苯（PCNB）對照品均在0～400 ug/l濃度范圍內呈現良好的線性關系。 結論：該方法準確可行，重復性好，可用于珠子參及其制劑的有機氯農殘檢測。

關鍵詞：珠子參；有機氯農殘；GC-ECD

中圖分類號：R284

文獻標識碼：A

文章編號：1007-2349（2013）07-0054-03

有機氯農藥是一類廣譜的殺蟲劑，曾經在中國最大規模的使用，雖然有機氯農藥被禁用了多年，但六六六，滴滴涕等有機氯農藥和他們的代謝產物化學性質穩定，在農作物和環境中消解緩慢，由此造成了有機氯農藥在土壤中的大量殘留[1]。中藥材的種植期較長，尤其是多年生的根類藥材，更易受有機氯農藥的污染，所以有機氯農藥殘留在中藥材的檢出率相當高。而有機氯農藥易在脂肪中積累，造成慢性中毒，危害人體健康，所以有必要建立各種中藥材的有機氯農殘檢測方法。珠子參是一種中藥藥材，來源于五加科植物珠子參的干燥根狀莖，主產于甘肅、陜西、寧夏、山西及我國西南地區。其氣微，味苦、微甘，嚼之刺喉，具有補肺，養陰，活絡，止血，是我國最常用的中藥之一[2]。本實驗選取珠子參為研究對象，建立了氣相色譜一電子捕獲檢測（ECD）法測定珠子參中六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）和五氯硝基苯（PCNB）3種有機氯農藥殘留方法，為珠子參的安全使用提供了科學的質量控制依據，同時也為中藥材有機氯農藥殘留檢測方法提供借鑒。

1 實驗部分

11 儀器與試藥 Agilent 6890N氣相色譜儀，Ni63電子捕獲檢測器（ECD），自動進樣器，Agilent化學工作站，SK8200HP型超聲波清洗儀，TDl-40B離心機，N-1001型旋轉蒸發儀，AG285型電子天平。

有機氯農藥對照品包括六六六的4種異構體、滴滴涕的四種異構體、五氯硝基苯，其中六六六（BHC）包括：甲體六六六（α-BHC）、乙體六六六（β-BHC）、丙體六六六（γ-BHC）、丁體六六六（δ-BHC）四種異構體（質量分數大于990%）；滴滴涕（DDT）包括PP′-DDE、PP′-DDD、OP′-DDE、PP′-DDT四種異構體（質量分數大于990%）；五氯硝基苯（PCNB，質量分數大于981%）。所有對照品質量濃度均為100μg/ml，均由農業部環境保護科研檢測所提供。

丙酮（分析純）；石油醚（分析純60～90℃）；二氯甲烷（分析純）；氯化鈉和無水硫酸鈉均為分析純；硫酸（分析純）；水為去離子水；二氯甲烷、石油醚、丙酮均經蒸餾裝置重蒸餾。

10批珠子參藥材樣品采自珠子參主產地。

12 方法與結果

121 色譜條件 Agilent DB-624彈性石英毛細管柱（30 m×032 mm×18 um），升溫程序：初始溫度100℃，15℃/min升至220℃，再以10℃/min升至250℃，保持17 min；進樣口溫度230℃，檢測器溫度300℃，采用不分流進樣，進樣量：10ul；載氣為高純氮（質量分數>99999%），總壓力：22 kPa，總流量：531 mL/min，電流：1nA。理論塔板數按ɑ-BHC峰計算不低于39×105，兩個相鄰色譜峰的分離度大于2。

122 溶液的制備

1221 混合對照品溶液的制備 精密量取α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、PP′-DDD、OP′-DDE、PP′-DDT、PCNB 對照液各05 mL，置25 mL量瓶中，加石油醚（60～90℃）至刻度，即得質量濃度為2 μg/mL的混合對照品貯備液。精密量取2 μg/mL的混合對照品儲備液適量，加石油醚（60～90℃）制成5、10、40、100、200、400 μg/L的混合對照溶液。

1222 供試品溶液的制備 取樣品于60℃干燥4 h，粉碎，過5號篩，取約2 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加人20 mL蒸餾水浸泡過夜，精密加丙酮40 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷至室溫，再稱定重量，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉約6 g，精密加二氯甲烷30 mL，稱定重量，超聲處理15 min，放冷至室溫，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，靜置（使分層），將有機相迅速轉入裝有適量無水硫酸鈉的100 mL具塞瓶中，放置4 h。精密量取35 mL，于40℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60～90℃）如前反復操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（60～90℃）溶解并轉移至10ml具塞刻度離心管中，加石油醚（60～90℃）精密稀釋到5ml。小心加入濃硫酸1 mL，振搖1 min，3000 r/min離心10 min。精密量取20 mL上清液，置具刻度的濃縮瓶中，連接旋轉蒸發器，40℃下將溶液濃縮至適量，精密稀釋至10 mL，即得供試品溶液[3]。

123 測定法 精密吸取供試品溶液和與之相對應濃度的混合對照品溶液各1 uL，分別連續進樣3次，取3次平均值，按外標法計算供試品中9種有機氯農藥殘留量。

13 分析方法學考察

131 系統適應性試驗 按供試品溶液制備供試品溶液方法制備供試品溶液和缺有機氯農殘的陰性供試品溶液，按照“21”項色譜條件分別進樣對照品、陰性樣品、供試品1ul，結果見圖1。由圖譜可以看出供試品溶液色譜中與對照品溶液色譜相應的位置上有相同的色譜峰出現。而陰性樣品無此峰出現，表明此處理方法對有機氯農殘的含量測定無干擾。

132 線性關系考察 分別精密量取適量混合對照品貯備液，用石油醚（60～90℃）稀釋成：0、5、10、40、100、200、400 ug/L，7個質量濃度梯度的對照品溶液。各取1 uL注人氣相色譜儀，依21色譜條件。分別以各組分峰面積為橫坐標，質量濃度（ug/L）為縱坐標繪制標準曲線，計算標準曲線方程和相關系數。結果表明，在上述色譜條件下，各對照品在0～400 ug/L范圍內呈良好的線性關系，結果見表1。

133 加樣回收率試驗 精密稱取6份供試品（樣品來源云南老君山，含量分別為：總BHC-0019 mg/kg；總-DDT未檢出；PCNB-0005 mg/kg）每份約2g，分別加入濃度為100 ug/L的混合對照品各10 mL，混合后揮干溶劑。按“222”項制備供試品，按照“21”項色譜條件，測定含量，計算其回收率。RSD分別為：09%、08%、11%，表明該方法的回收率較好，結果見表2。

134 方法的最低檢測限實驗 配制質量濃度為05 ug/L和10 ug/L的混合對照品溶液進樣，以3倍的噪聲作為方法的最低檢出量，測得α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、PP′-DDD、OP′-DDE、PP′-DDT、PCNB的最低檢測限濃度均為50ng/l。

135 精密度試驗 精密吸取40 ug/L混合對照品溶液，按照“21”項色譜條件，重復進樣6次，每次進樣1 uL，測定峰面積，RSD分別為：05%、14%、05%，表明該方法的儀器精密度較好。

136 重復性試驗 精密稱取樣品（樣品來源云南老君山），按“222”項制備供試品，平行試驗6份，按照“21”項色譜條件，進樣1 uL，測定峰面積，總BHC、PCNB的RSD分別為：19%、20%，表明該方法具有良好的重復性。

137 穩定性試驗 取同一份供試品溶液（樣品來源云南老君山），按照“21”項色譜條件，于0、2、4、6、8、12 h分別進樣1 uL，測定峰面積，總BHC、PCNB的RSD分別為：16%、12%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

138 樣品測定 精密稱取10批珠子參樣品，按“222”項制備供試品，按照“21”項色譜條件，進樣1 uL，測定含量，結果見表3。

方法學考察結果證明，該方法靈敏度，精密度好，對珠子參中有機氯農藥殘留的測定簡便、結果科學可靠。

2 討論

21 樣品前處理的選擇 樣品前處理采用超聲提取一硫酸磺化法[4～5]，由于每批樣品形狀上的差異，其有機層的色素量均有差別，在用濃硫酸凈化時，可適當增加振搖時間及硫酸量，直至硫酸層近無色，必要時使用漩渦混懸器。

22 色譜柱選擇 本實驗對色譜柱進行了選擇，使用HP-5及HP-1，DB-624這3種色譜柱分別進行分析，發現HP-5柱對PP′-DDD，OP′-DDT的分離度只達到116，而HP-1不能完全分離9種農殘對照品，而使用DB-624柱，可在較短時間內完成分析，分離度達到391。

2010年版《中國藥典》未對珠子參中的農藥殘留量進行限量，參考同版藥典中黃芪和甘草農藥殘留量限度規定[3]（總六六六和總DDT均不得過千萬分之二、五氯硝基苯不得過千萬分之一）、以及國外貿行業《藥用植物及制劑進出口綠色行業標準》中關于農藥殘留量限度規定（總六六六和總DDT均不得過02mg/kg、五氯硝基苯不得過01mg/kg），由表2的數據可以看出，本文所涉及的珠子參產地中有機氯農藥殘留均不超標，且遠遠低于參考限度，但不同產地珠子參之間有機氯農藥殘留有一定的差異，如所收集的云南大理地區的樣品中檢測出了DDT而其他產地均未檢出，云南麗江地區的樣品中未檢測到六六六而其他產地均有檢出，為了使中藥材能更好的走出國門，建議規范中藥材的種植，建立 GAP 基地。本研究制定的珠子參有機氯農藥的檢測方法，準確可行，為更好控制珠子參質量提供了科學依據。

參考文獻：

[1]成啟剛，寇登民，張靜，等氣相色譜法測定人參、黃芪中有機氯農藥殘留[J].南開大學學報：自然科學版，2004，37（2）：125～128

[2]段啟，許冬瑾，李彩萍GC-ECD法測定白術中有機氯農藥殘留量[J]中草藥期刊，2009，40（11）：1825～1827

[3]國家藥典委員會中華人民共和國藥典[M].一部北京：中國醫藥科技出版社，2010

[4]趙春杰，郝桂明，李歡欣毛細管氣相色譜法測定黨參中有機氯類農藥殘留量[J].中國藥學雜志，20027：25

[5]陳建民，張曙明，劉慧靈，等中藥中有機氯農藥殘留量檢測方法及限量標準研究[J].中國藥學雜志，20002：40