HPLC法測定甲亢合劑中的阿魏酸黃芩苷含量

摘要：目的：HPLC法測定甲亢合劑中的阿魏酸、黃芩苷含量。方法：采用高效液相色譜法測定甲亢合劑中的阿魏酸、黃芩苷，色譜柱：大連依利特HypersilODS2（150 mm×46 mm，5μm），流動相分別為乙腈-0085%磷酸溶液（17：83）、甲醇-水-磷酸（47：53：02）；流速：1 mL/min；檢測波長：316nm、278nm；柱溫：35℃結果：阿魏酸、黃芩苷分別在0068μg～0272μg（r=09999）、0345μg～1380μg（r=09999）范圍內呈現良好線性關系，阿魏酸的平均回收率為9802%，RSD=103 %；黃芩苷的平均回收率為9849%，RSD=082%。結論：本方法簡便，準確，重現性好，可供本品質量控制。

關鍵詞：甲亢合劑；阿魏酸；黃芩苷含量

中圖分類號：R2842

文獻標識碼：A

文章編號：1007-2349（2013）07-0060-03

甲亢合劑由生石膏、麥冬、花粉、石斛、當歸、生地、白芍、川芎、黃連、黃芩、烏梅、石蓮肉、夏枯草等13味中藥組成，具有養陰血、清胃火之作用，對治療甲亢等療效顯著。為控制該制劑的質量，保證臨床用藥安全有效，通過實驗研究及文獻調閱，采用以當歸、川芎中阿魏酸和黃芩中黃芩苷作為定量測定的指標成份，并建立定量測定方法，所建立的方法能客觀反映甲亢合劑的品質，對其質量進行有效控制。

1 儀器、試劑與樣品

11 儀器 LC-10AT高效液相色譜儀（島津公司），SPD-10Avp紫外檢測器，CLASS-VP色譜工作站。Meter AE240電子天平。

12 試藥 硅膠 G，青島海洋化工廠，甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。阿魏酸對照品（批號：110773-200611）、黃芩苷對照品（批號：0715-200212）。甲亢合劑為本院生產，批號：120812、120819、120901。

2 方法與結果

21 阿魏酸的含量測定[1]

211 對照品的制備 精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇溶解，質量濃度為136 μg/mL，即得。

212 供試品溶液的制備 精密量取供試品3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至定容，用045 μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。

213 陰性對照溶液的制備 按甲亢合劑處方比例，稱取除當歸、川芎的其余藥味，按照甲亢合劑的制備工藝，制備不含當歸、川芎的陰性樣品，按212項下方法操作，制成缺當歸、川芎的陰性對照溶液。

214 色譜條件 色譜柱為HypersilODSbp（150 mm×46 mm，5 μm，大連依利特公司）；流動相為乙腈-0085%磷酸（17：83）；流速為 1 mL/min；柱溫35 ℃；檢測波長316 nm；理論塔板數按阿魏酸計算應不低于5000。

215 線性關系考察 取阿魏酸對照品（136 μg/mL）溶液5，10，12，15，20μL，按上述阿魏酸色譜條件進樣測定，以峰面積為縱坐標，阿魏酸進樣量為橫坐標，得線性回歸方程：Y=5906519746X+77287859，r=09999（n=5），結果表明阿魏酸進樣量在0068μg～0272μg 范圍內與峰面積線性關系良好。

216 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液（質量濃度為136 μg/mL）10 μL，相同條件下重復進樣5次，求得阿魏酸平均峰面積為803332（RSD=065%）。

217 重復性試驗 取同一批號供試品6份，按照正文定量測定方法操作并測定，其平均含量為0268mg/mL（RSD=154%），表明方法重復性好。

218 空白試驗 取陰性樣品溶液10 μL，按214項下進行測定，結果缺當歸、川芎的陰性樣品溶液在阿魏酸對照品色譜峰相同保留時間處未顯色譜峰，表明：陰性樣品沒有干擾（見圖1）。

219 穩定性試驗 精密吸取重復性試驗樣品，照上述色譜條件進樣10 μL，分別在0，2，4，6，12，24h 測定，共進樣6次，記錄峰面積，結果表明阿魏酸峰面積計算，RSD=043 %，表明供試品溶液在在室溫下放置24 h內基本穩定。

2110 回收率試驗 精密量取已知阿魏酸含量的同一批號供試品6份，加入一定量阿魏酸對照品，按212項下方法制備，依法測定，計算回收率，結果見表1

2111 樣品測定 取3批樣品，按212項下供試品制備方法制備，按上述色譜條件測定峰面積，按外標法計算含量，結果見表2，色譜圖見圖1。

A、供試品；B、對照品；C、缺當歸、川芎對照品；1、阿魏酸

22 黃芩苷的含量測定[1]

221 對照品的制備 取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成質量濃度為69 μg/mL的對照品溶液。

222 供試品溶液的制備 精密量取供試品1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇定容，用045 μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

223 陰性對照溶液的制備 按甲亢處方比例稱取除黃芩的其余藥味，按照甲亢合劑的制備工藝，制備不含黃芩的陰性樣品，按222項下方法操作，制成缺黃芩的陰性對照溶液。

224 色譜條件 色譜柱為HypersilODSbp（150 mm×46 mm，5μm，大連依利特公司）；流動相為甲醇-水-磷酸溶液（47：53：02）；流速為 1 mL·min-1；柱溫為35 ℃；檢測波長為278 nm；理論塔板數按芍藥苷計算應不低于3000。

225 線性關系考察 精密吸取黃芩苷對照品（69 μg/mL）溶液5，10，12，15，20 μL，按234色譜條件測定，以峰面積為縱坐標，黃芩苷質量濃度為橫坐標，進行線性回歸，計算得回歸方程Y=3577836019X+9705102236，r=09999，結果表明黃芩苷進樣量在0345μg～1380 μg 范圍內與峰面積的線性關系良好。

226 精密度試驗 吸取黃芩苷對照品溶液（質量濃度69 μg/mL）10 μL，相同條件下重復進樣5次，求得黃芩苷平均峰面積為2478787（RSD=056%），表明儀器精密度良好。

227 重復性試驗 精密量取甲亢合劑（批號：120812）6份，按232項下供試品制備方法制備，照上述色譜條件進樣10 μL，記錄峰面積。經計算黃芩苷平均含量為 712 mg/mL（RSD=112%）。

228 空白試驗 取陰性樣品溶液10μl，按224項下進行測定，結果缺黃芩的陰性樣品溶液在黃芩苷對照品色譜峰相同保留時間處未顯色譜峰，表明：陰性樣品沒有干擾（見圖2）。

229 穩定性試驗 精密吸取重復性試驗樣品，照上述色譜條件進樣10 μL，分別在0，2，4，6，12，24 h 測定，記錄峰面積，結果表明黃芩苷平均峰面積的RSD=078%，表明供試品溶液在在室溫下放置24 h基本穩定。

2210 回收率試驗 精密量取已知黃芩苷含量的同一批號供試品6份，加入一定量黃芩苷對照品，按222制備方法制備供試品溶液，依法測定，計算回收率，結果見表3。

2211 樣品測定 取3批樣品，按222項下供試品制備方法制備，按上述色譜條件測定峰面積，按外標法計算含量，結果見表4，色譜圖見圖2。

3 討論

阿魏酸的含量測定試驗參考文獻[1]項下采用流動相甲醇-0085%磷酸（13∶87），流動相甲醇-01%磷酸（30∶70），結果阿魏酸采用流動相乙腈-05%醋酸（17∶83）可以基線分離不受其他組分干擾，分離效果好，準確度高。黃芩苷的含量測定試驗采用流動相甲醇-冰醋酸-水（50∶1∶50），流動相乙腈-水-磷酸（20∶80∶01），流動相甲醇-水-磷酸（47∶53∶02），結果甲醇-水-磷酸（47∶53∶02）流動相分離效果好，準確度高。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會中華人民共和國藥典[S]（一部）北京：中國醫藥科技出版社，2010：510～1212