牛羊口蹄疫病毒O型亞洲Ⅰ型滅活疫苗不同免疫程序免疫抗體效價對比試驗

雷新開

摘要：對黃牛多次免疫接種牛羊口蹄疫O型亞洲1型滅活苗的抗體效價進行檢測。結果表明，首免、二免、三免多次免疫牛羊口蹄疫O型亞洲1型滅活苗獲得免疫效果和抗體水平依次不同。其中首免、二免的免疫抗體水平較低，免疫合格率為63%左右，三免的免疫抗體水平較高，免疫合格率達93.3%以上，免疫的整體水平達到國家規定要求。

關鍵詞：口蹄疫；免疫接種；抗體檢測；比較試驗

中圖分類號：S851.35 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2013）06-0029-02

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄動物為主的急性、熱性、高度接觸性傳染病。被列為A類傳染病的首位，我國將它列為一類動物傳染病。口蹄疫病毒有7個血清型，其中O型亞洲Ⅰ型影響最為嚴重。為有效預防口蹄疫的發生和傳播，實行以春秋兩季免疫為主，長期進行全覆蓋強制免疫的口蹄疫免疫程序。在具體操作過程中，發現首次接種疫苗主要是激活免疫細胞產生免疫記憶，產生的抗體水平不高，也存在有個體免疫應答的差異。免疫間隔時間長短也直接影響免疫抗體水平的高低，不能形成較高的保護力，達不到抵御外界病毒侵襲的抗體水平。為使畜群免疫抗體水平能始終保持在有效保護的狀態，應用牛羊口蹄疫病毒O型亞洲Ⅰ型滅活疫苗進行多次免疫對比試驗，檢測黃牛體內的免疫抗體水平情況和形成保護力的狀況，旨在為有效防控該病提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）試驗動物。選擇昭平縣五將鎮義德村黃新牛場30頭黃牛作為試驗對象。

（2）抗體檢測儀器。酶標分析儀ZMX-988B型全自動酶標洗板機，臺式高速離心機（sigma1-15K），KH系列智能型電熱恒溫器；96孔ELISA板、U型96孔抗原抗體反應板、封板膜等。

（3）疫苗及試劑。牛羊口蹄疫病毒O型亞洲Ⅰ型滅活疫苗由賀州市動物疫病預防控制中心統一調撥，是新疆金宇保靈生物有限公司生產，批號2216006，檢測O型亞洲Ⅰ型口蹄疫抗體所用正向間接血凝試劑為中國農科院蘭州獸醫研究所生產，批號20121013，均在有效期內。

1.2 方法

（1）試驗方法。選擇30頭2～3歲的黃牛進行首次免疫注射牛羊口蹄疫病毒O 型亞洲Ⅰ型二價滅活疫苗，每頭2.0 mL，間隔30 d進行二次免疫，依次間隔30 d，對30頭黃進行第3次免疫接種，要求免疫接種口蹄疫病毒O型亞洲Ⅰ型滅活疫苗的時間和間隔時間要一致。

（2）采樣方法。分為2個試驗組，即二免組（2B組）和三免組（3B組）。二免后30 d，分別對已進行第二次免疫的30頭試驗黃牛進行血液采樣，共采血30份，每頭牛采血10 mL，并將采集的血樣離心，分離出血清樣品不能溶血，無菌分離血清待檢。三免后30 d，同樣對已經免疫第3次的30頭試驗黃牛進行血液采樣，共采血30份，每頭牛采血10 mL，將采集的血樣離心，分離的血清樣品不能溶血，無菌分離血清待檢。

（3）檢測方法。按照國標《正向間接血凝試驗監測口蹄疫抗體操作規程》進行。將待檢血清滅活，56 ℃水浴滅活 30 min；然后用稀釋液將待檢血清分別稀釋成1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256、1：512、1：1 024；用稀釋液將陰性對照血清稀釋成1：16，再將陽性對照血清稀釋成1：512；在干凈的V型96孔血凝板上每排的第1～8孔加各稀釋度待檢血清50 μL，第10孔加1：16的陰性對照血清，50 μL，第11孔加陽性對照血清（1：512）50 μL，第12孔各加稀釋液50 μL（空白對照）；將液體診斷液混勻，每排1～8孔和10～12孔加診斷液，每孔25 μL。

（4）振蕩。將加完樣品的V型滴定板在微量振蕩器上振蕩1 min，置室溫1.5～2.0 h，最后判定結果。

（5）結果判定標準。抗體效價≥1：128，99%以上起保護作用；抗體效價在1：（32～90），50%保護；抗體效價≤1：16不保護。

2 結果與分析

2.1 檢測結果

二免組和三免組各30頭黃牛的免疫抗體效價狀況見表1。由表1可見，二免組抗體效價較低，抗體效價≥1：32的為19份，占63.3%，最高抗效價為1：64；三免組抗體效價較高，抗體效價≥1：28的有28份，占93.3%，最高抗體效價達1：512。三免效果明顯好于二免。

2.2 分析

①在山區環境，同一條件下， 因個體差異，存有產生免疫抗體水平不一致的現象。

②首次免疫30 d后，進行二次免疫，間隔30 d開始血液采樣，檢測結果表明此階段牛體內產生的免疫抗體水平比較低，無法達到有效的保護力。

③按照免疫程序，二免后間隔30 d，進行第三次免疫，30 d后采樣檢測，檢測結果表明此階段牛體內產生的免疫抗體水平比較高，并形成較高的保護力可抵御外界病毒侵襲，有效地防控該病的發生。

3 結論

從試驗結果分析來看，兩次免疫注射口蹄疫疫苗的2B組省工省錢，但是免疫動物體內產生的抗體有效保護率較低，易被野毒和病毒感染，給疫病的發生、傳播留下了機會；而3B組雖然費工費時，費用比較高，但是免疫動物體內產生的抗體效價保持在一個相對均衡的水平上，起到了預防疫病的目的。因此，建議在生產中按免疫程序對牛使用免疫接種3次口蹄疫疫苗的免疫方案。

參考文獻：

[1] 丁永志.牛羊口蹄疫病毒O型亞洲1型滅活苗多次免疫程序免疫抗體效價對比試驗[J].甘肅獸醫導刊，2011（5）：31-33.