藏藥寬筋藤中總黃酮和蘆丁含量的測定

鐘文　翟瑤　盧永昌

摘要：對藏藥寬筋藤（Fallopia aubertii）中總黃酮和蘆丁的含量進行了測定。確定了總黃酮的比色測定法和蘆丁的高效液相色譜法，總黃酮的回歸方程Y=0.080 5 X+0.000 9， R2=0.999 8。蘆丁的色譜分離條件流動相為甲醇∶0.1%磷酸溶液（40∶60，V/V），回歸曲線為Y=131 0.8 X+1.553 9，R2=0.999 8，總黃酮和蘆丁分別在0.004～0.032 mg/mL、0.4～3.0 μg范圍內呈良好的線性關系，該方法簡單、快捷、準確，可作為寬筋藤的質量控制標準。

關鍵詞：寬筋藤（Fallopia aubertii）；總黃酮；蘆丁；HPLC

中圖分類號：O657.7+2；O657.32 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）09-2151-02

寬筋藤（Fallopia aubertii）為蓼科植物木藤蓼的莖，在藏藥中又名“勒哲”，是藏藥中的常用藥材。在藏藥藥典《晶珠本草》中記載，其功效為清除隆熱癥[1]。黃酮類化合物在植物界分布廣泛，對植物生長具有重要作用，同時也具有一定的抗菌防病功效[2]。蘆丁是黃酮化合物中的一種，有降低毛細血管通透性和脆性的作用[3]。對寬筋藤中的總黃酮和蘆丁含量的測定尚未見報道，為控制該藥材的質量，結合相關文獻[4-11]，采用比色法測定寬筋藤中的總黃酮，HPLC法測定蘆丁的含量，該方法的建立為控制寬筋藤的質量提供依據。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與材料

Agilent 1200高效液相色譜儀（含自動進樣器、四元梯度泵、DAD檢測器）；T6新銳-紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器）；KQ-300B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；索式提取器。

甲醇、乙醇、磷酸為色譜級試劑；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均為化學純。

寬筋藤于2011年10月采于青海省互助北山，由青海民族大學化學與生命科學學院毛繼祖教授鑒定，蘆丁對照品由中國藥品生物檢定所提供。

1.2 方法

1.2.1 比色法測定總黃酮含量

1）對照品溶液的制備。稱取蘆丁對照品20 mg，用70%乙醇溶解并定容于100 mL的容量瓶中，搖勻，得0.2 mg/mL的標準溶液。

2）標準曲線的制備。精確吸取標準溶液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分別置于25 mL容量瓶中，加入1 mL 5% NaNO2溶液， 搖勻，放置6 min；加入1 mL 10% Al（NO3）3溶液，搖勻，放置6 min；加入10 mL 5% NaOH溶液，再加水至刻度，搖勻，放置15 min。以試劑空白作為參比溶液。用1 cm比色皿，在510 nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，得到回歸方程Y=0.080 5C+0.000 9，R2=0.999 8。結果表明，蘆丁對照品在0.004～0.032 mg/mL范圍內呈良好的線性關系。

3）樣品測定方法。稱取寬筋藤干粉1.0 g置于100 mL圓底燒瓶中，加入30 mL 70%乙醇，加熱回流 1 h，反復提取3次，趁熱過濾，濾液用70%乙醇定容于100 mL容量瓶中，得到黃酮提取液，待用。

1.2.2 HPLC法測定蘆丁含量

3）樣品溶液的制備。稱取寬筋藤干粉10 g，加入300 mL 70%乙醇反復回流提取1 h，重復3次，濃縮蒸干，再用甲醇定容于50 mL容量瓶中，所有需測定的溶液均先過0.45 μm的濾膜[6]。

2 結果與分析

2.1 總黃酮的測定結果

2.1.1 重現性試驗 稱取寬筋藤干粉1 g，共5份，分別按上述方法測定吸光度。結果RSD值為1.42%，重現性試驗符合要求。

2.2 蘆丁的HPLC法測定結果

2.2.4 樣品中蘆丁含量的測定 根據上述方法，測得寬筋藤中蘆丁含量為0.081%。

3 小結與討論

研究結果表明，寬筋藤中總黃酮含量為0.620%，蘆丁含量為0.081%。由于本試驗材料為植物的莖部，相對于植物全草來說，黃酮類物質的含量不多。

3.1 流動相選擇

在流動相的選擇過程中，選擇甲醇與水適量比例，反復試驗，使雜質峰與所測物質峰充分分離，加入適量酸可達到最佳分離效果，定量更準確。

3.2 檢測波長選擇

用蘆丁的甲醇溶液在紫外可見光分光光度儀上掃描，發現在254 nm和360 nm處都有吸收，由于在液相上254 nm處雜質峰比較多，所以選用360 nm作為檢測波長。

參考文獻：

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