UV法和HPLC法測定藏藥多腺懸鉤子中總黃酮及蘆丁的含量

翟瑤　鐘文　林鵬程

摘要：對藏藥多腺懸鉤子（Rubus phoenicolasius）中總黃酮和蘆丁含量分別進(jìn)行了測定。采用UV法測定總黃酮的含量，總黃酮在0.20～1.00 mg（R2=0.999 6）時線性關(guān)系良好，平均回收率為99.2%。采用HPLC法測定蘆丁的含量，使用的色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱溫30 ℃，流動相為甲醇∶0.4%磷酸溶液（45∶55，V/V），結(jié)果表明，蘆丁在0.02～0.10 μg（R2=0.999 8）時線性關(guān)系良好，平均回收率為102.6%。該方法簡單、可靠、快速。

關(guān)鍵詞：多腺懸鉤子（Rubus phoenicolasius）；UV；HPLC；總黃酮；蘆丁

中圖分類號：O657.7+2；O657.32 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）09-2144-02

多腺懸鉤子（Rubus phoenicolasius）為薔薇科懸鉤子屬植物，藏藥中稱為才旦瑪杰巴、達(dá)才爾、克瑪、苦夏瑪?shù)取！毒е楸静荨分杏涊d：“味甘、苦、微辛。果味甘、酸，化味相同。治隆熱病、培根病、浮腫，治肺病特效。果實熬膏治熱病初起、惡寒發(fā)熱，單藥煎湯也有各種功效”[1]。黃酮類化合物具有抗病毒、抑菌、消炎等作用[2]，蘆丁是多腺懸鉤子中黃酮類化合物的一種，有很好的消炎作用[3]。目前對懸鉤子屬植物的已有研究多集中在化學(xué)成分、種植等方面，但未見對其總黃酮和蘆丁成分含量進(jìn)行測定的報道。本研究采用UV法和HPLC法對多腺懸鉤子總黃酮及蘆丁的含量進(jìn)行測定，對評價多腺懸鉤子的質(zhì)量具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

1.1.1 材料 多腺懸鉤子，2011年10月采于青海互助北山，由林鵬程教授鑒定為藏藥多腺懸鉤子。將多腺懸鉤子樣品去除雜質(zhì)，陰干粉碎備用。

1.1.2 儀器與試劑 Agilent 1200高效液相色譜儀（配備自動進(jìn)樣器、在線脫氣機(jī)、四元梯度泵、柱溫箱、DAD檢測器、Agilent 1200色譜工作站）；Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱（美國Agilent公司）；T6新銳-可見分光光度計（北京普析通用儀器廠）；KQ-300B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；蘆丁對照品自制，經(jīng)歸一化法測定，含量大于98%；甲醇（色譜級，美國天地公司）。

1.2 UV法測定總黃酮的含量

1.2.1 樣品溶液的處理 取1.00 g多腺懸鉤子粉末于100 mL圓底燒瓶中，加入30 mL 70%的乙醇，超聲30 min，熱回流1.5 h，將濾液過濾后，放入100 mL容量瓶中，加水至刻度處。

1.3 HPLC法測定蘆丁的含量

1.3.2 樣品溶液的配置[6] 取10.0 g多腺懸鉤子的粉末置于500 mL的燒杯中，加入300 mL 70%乙醇，超聲30 min，熱回流1.5 h后過濾，將濾液蒸干后，溶于色譜甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中。

2 結(jié)果與分析

2.1 UV法測定總黃酮的含量

2.1.2 精密度試驗 吸取1.00 mL樣品溶液，重復(fù)測定6次，計算吸光度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.57%，表明精密度良好。

2.1.3 重現(xiàn)性試驗 取同一份樣品，平行制備5份供試液，按上述條件測吸光度，計算RSD為0.84%，表明重現(xiàn)性良好。

2.1.5 樣品中總黃酮含量的測定 根據(jù)上述方法，測得多腺懸鉤子中總黃酮含量為2.34%。

2.2 HPLC法測蘆丁的含量

2.2.2 精密度試驗 吸取樣品溶液1.00 mL，加甲醇定容至10 mL，過0.45 μm的微孔濾膜，取5.00 μL溶液進(jìn)樣，重復(fù)測定 6 次，計算峰面積的RSD為1.01%，表明精密度良好。

2.2.3 重現(xiàn)性試驗 取同一份樣品，平行制備6份供試液，按上述條件進(jìn)行測定，計算其峰面積的RSD為0.67%，表明重現(xiàn)性良好。

2.2.4 加樣回收率試驗 量取1.00 mL樣品溶液，共6份，分別加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，按上述條件進(jìn)行測定，平均加樣回收率為102.6%，結(jié)果符合要求。

2.2.5 樣品中蘆丁含量的測定 根據(jù)上述方法，測得多腺懸鉤子中蘆丁含量為0.48%。

3 小結(jié)與討論

測定結(jié)果表明，該植物中總黃酮含量為2.34%，蘆丁含量為0.48%。

多腺懸鉤子在青海的分布較為廣泛，而黃酮類化合物具有抗病毒、抑菌、消炎等作用，是多腺懸鉤子中重要的功效成分。因此研究多腺懸鉤子中總黃酮含量對多腺懸鉤子的開發(fā)和研究是非常有意義的。本研究建立了UV法與HPLC法測定多腺懸鉤子中總黃酮與蘆丁含量的方法，為多腺懸鉤子品質(zhì)評價及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供了依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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[3] 王玉枝，曠亞非，彭 琳，等.食療食補功效的重要物質(zhì)-蘆丁[J]. 大學(xué)化學(xué)，2010（4）：109-113.

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