骨橋蛋白及白細胞介素—18在尋常型銀屑病患者血清中的表達及臨床意義

張麗 簡練 孫樂棟 張苑

[摘要]目的：檢測尋常型銀屑病患者外周血骨橋蛋白（OPN）、白細胞介素- 18（ IL- 18）的表達水平，并探討其臨床意義。方法：采用酶聯免疫吸附試驗（ ELISA）法檢測30例尋常型銀屑病患者（其中進行期18例， 靜止期12例）及30例對正常照者血清OPN、IL-18的表達水平。結果：尋常型銀屑病組患者血清骨橋蛋白和IL-18的表達水平明顯高于正常對照組（P<0.001）；進行期銀屑病患者骨橋蛋白和IL-18的表達水平明顯也高于靜止期（P<0.001），且骨橋蛋白、IL-18的表達水平和銀屑病的活動性均呈顯著正相關（P均<0.001）；骨橋蛋白和IL-18的表達水平也呈顯著正相關（P<0.001）。結論：OPN與IL-18在尋常型銀屑病中的表達上調提示它們可能參與了尋常型銀屑病的發病過程，且二者在該病的發生中起著協同作用。聯合檢測血清OPN、IL- 18 可以作為診斷銀屑病活動性的有效的指標之一。

[關鍵詞]尋常型銀屑病；骨橋蛋白；白細胞介素-18

[中圖分類號]R758.63 [文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455（2013）09-0947-03

銀屑病是一種常見的慢性炎癥性疾病，其病因和發病機制尚未完全清楚。近年來的研究表明，T 細胞活化及T細胞-角質形成細胞調節水平異常等在銀屑病發病機制中起著非常重要的作用。骨橋蛋白（osteopontin，OPN）和白細胞介素（interleuk in，IL-18）已被證實在炎癥反應和自身免疫性疾病發病過程中起重要作用[1-3]。本研究采用酶聯免疫吸附試驗（ ELISA）法檢測對30例尋常型銀屑病患者（其中進行期18例， 靜止期12例）及30例對正常照者血清OPN、IL-18的表達水平，以探討其在尋常型銀屑病發生及發展過程中的作用。

1 資料和方法

1.1 研究對象：30例尋常型銀屑病患者均來自本院皮膚科門診，其中男15例，女15例，進行期18例，靜止期12例，均符合《臨床皮膚病學》中尋常型銀屑病的診斷和分期標準[4]。年齡18～41 歲，平均28.6歲，中位年齡28.0歲。所有患者3個月內未系統使用皮質類固醇、免疫抑制劑、維A 酸類及VitD3類藥物， 亦未接受其他系統治療。正常對照組為來我院體檢的健康志愿者，共30例，其中男16例，女14例； 年齡18～39歲，平均年齡28.1歲，中位年齡27.0歲。患者組與正常對照組年齡與性別構成具有可比性。研究遵循程序符合單位負責人體試驗委員會所制定的倫理學標準，且所有受試者均已簽知情同意書。

1.2 主要試劑：OPN 與IL-18試劑盒均購于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 實驗方法：兩組均用EDTA抗凝管抽取5ml靜脈血，離心后取血清，放入EDTA管中，-80℃冰箱凍存。采用酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）法檢測血清中的OPN 和IL-18水平，嚴格按試劑盒說明書操作。

1.4 統計學處理：數據以（x±s）表示。采用SPSS 13.0分析軟件包進行統計處理，各組間血清OPN、IL-18 比較采用兩樣本t檢驗，骨橋蛋白和IL-18的相關性分析采用pearson相關分析。性別、年齡與骨橋蛋白和IL-18的相關性及骨橋蛋白、IL-18與銀屑病的活動性的相關性采用speaman相關分析。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清OPN 與IL-18表達水平：結果見表1。同正常對照組相比，尋常型銀屑病組OPN 與IL-18 的表達水平顯著增高，且進行期銀屑病組患者血清OPN 與IL-18表達水平明顯高于靜止期。

2.2 OPN、IL-18與銀屑病之間的相關性分析：正常對照組血清OPN與IL-18無相關性（P=0.736）；尋常性銀屑病患者中OPN和IL-18的表達水平與年齡和性別無相關性（P>0.05）；OPN、IL-18均與銀屑病的活動性呈明顯正相關（P均<0.001；r分別為0.849和0.841）；OPN和IL-18也呈顯著正相關（P<0.001；r=0.815），見圖1。

3 討論

銀屑病的病因及發病機制并不完全清楚， 目前普遍認為它是一種發生在遺傳基礎上的慢性復發性炎癥性、增生性皮膚病。近年來的研究表明，T 細胞活化及T細胞-角質形成細胞調節水平異常等在銀屑病發病機制中起著非常重要的作用。T細胞活化后分泌大量的細胞因子。根據細胞因子的分泌模式，人體內的Th 細胞可分為三個亞群，即Thl、Th2、Th0 亞群。正常機體內，Thl/Th2 網絡保持著動態平衡狀態。當Thl/Th2 平衡失調時，即某一亞群功能增強，另一亞群功能減弱（被稱作Thl/Th2 漂移），即可導致許多疾病的發生[5]。銀屑病患者體內普遍存在“Th1偏倚”現象，屬于典型的Thl反應模式，即Th1 細胞免疫應答強于Th2細胞免疫應答。

OPN是一種新近發現的與細胞外基質蛋白同源的促炎細胞因子，包含RGD（Arg-Gly-Asp）序列，又稱為早期T淋巴細胞活化因子或分泌性磷蛋白I， 屬于Thl型細胞因子。在細胞表面有許多OPN的受體，包括整合素ɑvβ3、ɑvβ1、ɑ4β1、ɑ9β1、ɑ8β1和CD44等。OPN可通過RGD序列與多種類型細胞的整合素受體相互作用而調節細胞的聚集、黏附、遷移、增殖，在炎癥反應和自身免疫性疾病中起重要的作用。現有研究認為，OPN 是免疫細胞募集及啟動Th1型細胞免疫的關鍵細胞因子[6]。其可誘導Thl型細胞因子（IL-12、INF-γ）的產生，抑制Th2型細胞因子（IL-10）的表達，從而在Thl/Th2失衡性疾病的發病中起作用[7]。本研究發現， 銀屑病患者OPN 血清水平高于正常對照組，且OPN與銀屑病的活動性呈顯著正相關，與相關研究結果相符[8-9]，提示OPN參與了銀屑病的發生并與疾病的發展有關。

白細胞介素（Interleukin-18，IL- 18） 是一種復雜的前炎癥細胞因子，在炎癥反應中起著雙向調節作用，最早被命名為IFN-γ誘導因子。主要由巨噬細胞樣細胞產生，T細胞、樹突狀細胞、成骨細胞、角質化細胞以及脂肪細胞也可產生。主要的效應細胞為T細胞和自然殺傷細胞（NK細胞）。大量的研究資料表明IL-18是一種輔助性T細胞1型的（Thl）細胞因子，能誘導Thl細胞、NK細胞分泌IFN-γ，IFN-ɑ、IL-2粒-巨噬細胞集落刺激因子，IL-2等多種細胞因子，抑制IL-4和IL-10的產生，并促進Thl細胞增殖。過度表達的IL-18 可直接作用于Th1 細胞，增強FasL 表達，從而促進FaS配體（FasL）介導的NK細胞的殺傷活性，啟動細胞凋亡[10-12]。現已證明，在IL-12刺激下Thl細胞，可強烈而持久地表達IL-18受體，故IL-18與IL-12有協同效應[13]。近來的研究還發現，在一定的條件下，IL-18還參與了Th2型細胞因子參與免疫調節，IL-18可以產生IgE和Th2細胞因子，比如IL-4、IL-5、LI-13等[14]。也有研究發現角質形成細胞也可分泌IL-18，并參與了銀屑病皮損局部的Thl免疫反應[15-16]。本研究發現， 銀屑病患者IL-18 血清水平高于正常對照組，并與銀屑病的活動性明顯相關，提示尋常性銀屑病患者血清中IL-18水平與銀屑病病情活動有關，可望為評估尋常性銀屑病活動性的指標。也表明其在銀屑病發病機制中起到一定的作用。

值得關注的是IL-18 可誘導活化T 細胞產生IFN-γ，促進Th1亞群的分化，增加OPN的表達。OPN可通過核轉因子-kB（NF-κB）的活化而上調細胞因子（IL-1和IL-18）和趨化因子（CCL1家族和CXCL家族）的表達，兩者相互作用，引發病灶部位的炎癥反應并可加重病情[17]。我們研究也發現OPN和IL-18的表達水平呈有顯著的正相關，提示兩者促炎作用有協同作用。因此，聯合檢測 OPN和I L- 18的表達水平，并深入研究相關因子的受體等的表達，尋找可能的治療靶點，對進一步闡明銀屑病的發病機制，判斷病情活動性及尋找更佳的治療方案具有重要價值。

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[收稿日期]2013-04-13 [修回日期]2013-05-07

編輯/張惠娟