針刺對變應性鼻炎大鼠模型血清IL-5和鼻黏膜組織IL-5 mRNA表達的影響

盧健敏

(泉州醫學高等?？茖W校,福建 泉州 362000)

變態反應性鼻炎(AR)為耳鼻喉科常見病，由于環境等因素其發病率逐年上升，目前尚無根本有效的治療方法，給病患的生活和工作造成諸多負面影響。本病屬祖國醫學“鼻鼽”“鼽嚏”范疇，其病機與肺、脾、腎功能失調密切相關。針刺療法是祖國醫學治療疾病的重要方法，本實驗對針刺治療大鼠變應性鼻炎的機制進行初步探討。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 健康SD大鼠，SPF級，180～220 g，雌雄各半。由上海斯萊克實驗動物有限公司提供，許可證號：scxk(滬)2007-0006，飼養于泉州醫學高等?？茖W校實驗中心，室內溫度控制在20～25 ℃，相對濕度控制在60%～80%。

1.2 藥物與試劑 氯雷他啶粉碎后用生理鹽水配成0.03%的混懸液。卵白蛋白：上?；瘜W試劑廠(20100212)。IL-5試劑盒,深圳晶美公司生產。PCR引物，TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0試劑，購自寶生物工程(大連)有限公司。

2 實驗方法

2.1 分組 將大鼠適應性喂養1周后，隨機分為空白組、模型組、針刺組、藥物對照組,每組各10只。

2.2 AR模型的建立 按照安氏的方法[1]。對模型組、針刺組、藥物對照組動物進行造模，造模動物以卵白蛋白(OVA)0.30 mg，氫氧化鋁粉末30 mg加生理鹽水至l mL形成混懸液，腹腔內注射，隔日1次，共7次。腹腔注射免疫完成后, 每側鼻腔均以5% OVA的生理鹽水溶液20 μL局部免疫，每日1次，共7次。

2.3 干預方法 鼻部激發的同時分別對針刺組進行針刺干預、對藥物對照組動物進行藥物干預，藥物對照組用氯雷他啶混懸液0.1 mg/(kg·d)，灌胃[2],每日1次，共7次。

針刺組穴位參照華氏[3]及動物比較學方法選取。雙側后(足)三里：膝關節后外側在腓骨小頭下約5 mm處；肺俞：第3胸椎棘突下兩旁肋間；腎俞：第2腰椎下旁開約3 mm，各穴位采用直刺法，用醫用毫針直刺皮膚表層后放手，刺入深度分別為足三里穴約3 mm、肺俞穴約2 mm、腎俞穴約2 mm，留針30 min，每5 min行捻轉手法刺激1次，每次1 min，連續7 d；模型組用生理鹽水灌胃2 mL/次，每日1次，共7次。

2.4 觀察指標及檢測方法

2.4.1 血清白細胞介素-5(IL-5)含量測定 25%烏拉坦腹腔注射麻醉后將大鼠仰臥位固定。腹腔主動脈取血4 mL，放入離心機離心，取上清液，采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附(ELISA)法，嚴格按試劑盒說明進行操作。

2.4.2 鼻黏膜IL-5 mRNA表達的檢測 取血后取鼻黏膜,用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)法，進行IL-5 mRNA(信使RNA)水平表達的檢測。具體方法：從美國國立衛生院所維護的國際權威數據庫網站獲得最新版本的SD大鼠IL-5和內參基因β-actin的mRNA序列。利用引物設計專業軟件Primer 5.0設計其引物。然后委托大連寶生物工程有限公司完成引物合成。IL-5m RNA引物:5’-GAGGCTTCCTGTTCCTACTC-3’，3’-TCACCCGTTACCTTCAGACT-5’，采用美國TriZol試劑一步法提取總RNA→反轉錄反應→PCR反應，反應結果通過凝膠電泳分析系統檢測。

3 結果

對大鼠血清IL-5含量及鼻黏膜IL-5 mRNA相對表達量的影響：見表1。

表1 對大鼠血清IL-5含量及鼻黏膜IL-5 mRNA相對表達量的影響(±s，n=10)

4 討論

AR是臨床常見的非感染性疾病，以鼻癢、噴嚏、清涕、鼻塞為主要表現，AR并不是一個孤立的疾病，常與哮喘、鼻竇炎等合并存在，本病發病機理復雜，是由多種細胞，多種細胞因子和多種傳導途徑作用于鼻部的結果[4]。人類IL-5主要由活化Th2亞群細胞產生[5]。IL-5調控著嗜酸性粒細胞(EOS)的產生、活化和分布，它能激發EOS在變應性炎癥局部浸潤，從而發揮生物學功能，IL-5可使EOS存活時間延長，抑制EOS的凋亡[6]。IL-5可作為AR療效評價的一個指標[7]。

AR與祖國醫學的“鼻鼽”相類似。本病多由臟腑虛損，衛表不固，風寒異氣侵襲而致，屬本虛標實之證，其病位在肺與脾腎有關。故針刺穴位治療AR可從溫肺散寒、補腎健脾等方面進行[8]。研究[9]表明針刺穴位能夠調節人體的免疫功能，可通過影響患者總IgE和特異性IgE進而對變應性疾病起治療作用。腎俞、肺俞，分別為肺、腎兩臟的背俞穴，是兩臟之氣輸注于背腰部的穴位，針刺該穴可以起到補益肺腎的作用，后(足)三里是足陽明胃經的合穴有健脾和胃的功效。本實驗結果表明：針刺腎俞、肺俞、后(足)三里可能是通過降低AR大鼠血清IL-5含量,抑制鼻黏膜組織IL-5 mRNA的表達進而對AR起治療作用。

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