頭穴透刺對運動性疲勞大鼠下丘腦TPH、MAO-A的影響

張 淼，李虹霖，徐 飛

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001；2.黑龍江省醫(yī)院 康復(fù)科，黑龍江 哈爾濱 150036)

運動性疲勞是機體各種復(fù)雜內(nèi)在變化的一種綜合外在表現(xiàn)，是機體在長時間的運動后，其生理現(xiàn)象在運動過程中表現(xiàn)為機體運動能力下降，使其運動能力不能持續(xù)在特定的運動水平和/或預(yù)定的運動強度。對運動性疲勞防治的研究是運動醫(yī)學(xué)關(guān)注的熱點和焦點。大量研究[1-2]顯示，中醫(yī)藥對運動性疲勞有良好的防治前景。本組研究采用針刺預(yù)處理方法，觀察頭穴透刺對運動性疲勞的防治作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 取8周齡健康Wistar大鼠48只,雌雄各半，體質(zhì)量(200±10) g。由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，大鼠質(zhì)量合格證書編號：SCXK(黑)2008004。

1.2 試劑與儀器 試劑主要有TPH抗體和MAO抗體均購自于millipore公司，熒光定量Realtime PCR試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購自于takara公司產(chǎn)品。主要儀器有電子天平(賽多科斯，萬分之一)、水浴鍋、游泳箱(55 cm×55 cm×40 cm)、秒表。

1.3 實驗方法

1.3.1 動物分組 將48只大鼠隨機分為4組，每組12只，分別為空白對照組、模型組、頭穴透刺組和傳統(tǒng)針刺組。

1.3.2 造模方法 模型組和治療組方法參見文獻[3-4]建立疲勞力竭模型。空白對照組適應(yīng)性訓(xùn)練1周，正常飼養(yǎng)。

1.3.3 治療方法 頭穴透刺組和傳統(tǒng)針刺組大鼠每天在針刺預(yù)處理1 h后進行造模。每只大鼠針刺前束縛固定，參照中國針灸學(xué)會實驗針灸研究會制定的《動物針灸穴位圖譜》選穴。頭穴透刺組:針刺雙側(cè)百會透太陽、雙側(cè)足三里、腎俞、關(guān)元，留針15 min，出針1 h后進行造模。傳統(tǒng)針刺組:針刺雙側(cè)足三里、腎俞、關(guān)元，留針15 min,出針1 h后進行造模。空白對照組：正常飼養(yǎng)不給予任何處置。模型組：正常造模，造模前后均不給予任何治療。共進行4周的游泳大鼠模型訓(xùn)練，每周游6 d。第1周每天游30 min，每周遞增30 min。

1.4 觀察指標

1.4.1 一般狀況 觀察造模后各組大鼠的精神狀態(tài)、體毛、體質(zhì)量、大小便及活動情況等。

1.4.2 力竭游泳實驗 第4周末進行力竭性游泳，記錄游泳時間，力竭標準以大鼠游泳的協(xié)調(diào)動作消失，水淹沒鼻尖，身體下沉，至再次浮出水面的時間超過10 s,并連續(xù)3次者。

1.4.3 標本采集及熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng) 用1%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)腹腔注射麻醉，麻醉滿意后固定于鼠板上，用含4%多聚甲醛緩沖液灌注固定取下丘腦。參照文獻[5]提取RNA。逆轉(zhuǎn)錄參照試劑盒說明書進行操作。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)參照試劑盒說明書進行操作。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 造模后，各模型組大鼠的飼料、飲水量均有所減少，體毛干枯，體質(zhì)量緩慢增長，活動減少，眼裂變小，瞇眼明顯，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍。

2.2 各組力竭時間結(jié)果比較 見表1。

表1 各組力竭時間結(jié)果比較(±s,n=12)

2.3 對各組下丘腦組織中TPH、MAO-AmRNA表達的影響 見表2。

表2 對各組下丘腦組織中TPH、MAO-AmRNA表達的影響(±s,n=12)

3 討論

運動性疲勞是機體運動進行到一定階段必然出現(xiàn)的生理功能變化。本實驗采用目前國內(nèi)外有關(guān)疲勞的研究比較公認的成熟的動物模型——大鼠游泳疲勞模型。大鼠隨著游泳天數(shù)的增加神情倦怠，皮毛蓬亂枯槁，食欲減退，體質(zhì)量不增或略有降低，雙眼暗淡無光，對外界刺激反應(yīng)遲鈍等疲勞癥狀,提示運動性疲勞模型建立成功。研究[6-8]顯示,5-羥色胺在運動性疲勞中起著重要作用，是運動性疲勞的重要遞質(zhì)之一。MAO主要存在于線粒體內(nèi)，5-羥色胺的主要代謝途徑是在MAO作用下氧化脫胺，在適宜的條件下，通過MAO-A酶代謝生成5-HIAA。TPH是芳香族氨基酸羥化酶家族的一員，被認為是5-羥色胺合成的關(guān)鍵酶，其活性是5-羥色胺合成的前提，能催化L-色氨酸轉(zhuǎn)化為5-羥色胺，并影響著5-羥色胺的代謝功能。

中醫(yī)藥在扶正補虛，提高運動能力，調(diào)節(jié)機體免疫功能，延緩疲勞等方面積累了大量經(jīng)驗[9-10]。運動性疲勞屬中醫(yī)“虛證”范疇。針刺具有疏通經(jīng)絡(luò),激發(fā)正氣，改善血液循環(huán)，抗脂質(zhì)過氧化，清除自由基，調(diào)節(jié)免疫功能，糾正代謝紊亂，糾正運動性神經(jīng)—內(nèi)分泌—免疫調(diào)節(jié)紊亂等作用。研究發(fā)現(xiàn)，頭穴透刺能降低大鼠下丘腦組織中TPH mRNA表達，增強MAO-A mRNA表達，其抗運動性疲勞機制可能與此有關(guān)。

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