異煙酸-硫代巴比妥酸顯色反應測定酒中氰化物的研究

張 婭，李春江，王 茜

（紅河州質量技術監督綜合檢測中心，云南 蒙自 661100）

氰化物是食品安全重點關注的物質之一，其是一類劇毒化合物，可經過呼吸道、消化道以及皮膚進入體內，迅速作用于呼吸酶，引起組織內窒息，從而引起組織衰竭以至機體死亡[1]。白酒中的氰化物主要來自于原料，如木薯以及其他含有氰甙類配糖體的野生植物發酵過程中水解產生氫氰酸。大部分氫氰酸在原料蒸煮是可揮發掉，但仍會有少量的氫氰酸殘留在白酒中[2]。

氰化物的檢測方法有很多種，如氣相色譜法[3-5]、離子色譜法[6-7]、液相色譜法[8]、離子選擇電極法[9-11]、分光光度法[12-14]等。國標中酒的氰化物測定方法是異煙酸-吡唑啉酮分光光度法[15]，異煙酸-巴比妥酸光度法是國標測定生活飲用水中氰化物的方法之一[16]，而硫代巴比妥酸與巴比妥酸具有相似的結構。本實驗對異煙酸-硫代巴比妥酸光度法測定酒中氰化物進行的研究，結果表明，在弱酸性環境和氯胺T存在的條件下，氰化物可與異煙酸-硫代巴比妥酸形成一種藍色染料，該染料在波長642nm處有一個最大吸收峰，其吸光度值與氰化物含量在一定范圍內呈良好的線性關系，可用于微量氰化物的定量分析。將該方法用于酒中氰化物的測定，結果與國家標準方法相吻合，加標回收率為96.6%～105.6%，方法的穩定性和靈敏度均令人滿意。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

酒樣：采購于當地市場；氰化物：上海徐行化工廠；KH2PO4-NaOH、；NaOH、乙酸、乙酸乙酯：天津市風船化學試劑科技有限公司；異煙酸-硫代巴比妥酸、氯胺T：國藥集團化學試劑有限公司；以上試劑均為分析純，實驗用水為超純水。

氰化物標準溶液配制：100μg/mL（準確濃度用銀鹽法[1]標定）；KH2PO4-NaOH緩沖溶液：0.05mol/L；異煙酸-硫代巴比妥酸溶液配制：稱取2.5g異煙酸和2.0g硫代巴比妥酸，加入1mol/L NaOH溶液30mL，溶解后鉀純水至100mL；氯胺T溶液：10.0g/L，現用現配；NaOH溶液：0.05mol/L和0.50mol/L；3%乙酸溶液的配制；乙酸溶液：10g/L；酚酞指示劑：1.0g/L；乙酸乙酯溶液：10g/L。

1.2 儀器與設備

T6新世紀型紫外可見分光光度計：北京普析通用有限公司；UV-2550型紫外可見分光光度計：日本島津公司。

1.3 方法

1.3.1 標準曲線的繪制

取10μg/mL 氰化物標準溶液0.1mL～1.0mL于25mL比色管中，加入0.05mol/L NaOH 溶液至12.5mL，放置10min，加入一滴酚酞指示劑，用乙酸調節至紅色剛好消失，再加入KH2PO4-NaOH緩沖溶液5.0mL，氯胺T溶液0.5mL，混勻，放置4 min后，加入異煙酸-硫代巴比妥酸溶液5.0mL，并用水稀釋至刻度，混勻，放置30min后，以試劑空白為參比，用比色皿，于波長642nm處測定吸光度值A，以氰化物含量（2cm）對A繪制標準曲線。

1.3.2 酒樣分析

取1.0mL試樣與25mL具塞比色管中（若酒樣渾濁和有色，按照文獻[1]方法進行蒸餾，取樣量為2mL），按1.3.1操作測定吸光度值。以標準曲線法定量同時進行對照分析以及加標回收率實驗。氰化物含量計算公式：

式中：X為試樣中氰化物含量，mg/L；m為從標準曲線查到的試樣中氰化物質量，μg；V為試樣的體積，mL。

2 結果與討論

2.1 吸收光譜

氰化物標準溶液的吸收光譜見圖1。在該實驗條件下，氰化物與異煙酸-硫代巴比妥酸形成的藍色染料，在波長642nm處有一個最大吸收峰，所以本方法選擇642nm作為測量波長。

圖1 氰化物標準溶液的吸收光譜圖Fig.1 Absorption spectra of standard cyanide solution

2.2 酸度的影響

取不同pH值的KH2PO4-NaOH緩沖溶液進行實驗，結果見表1。實驗結果表明，溶液的pH值為5.7時的吸光度值達到最大，因此選用pH 5.7的KH2PO4-NaOH緩沖溶液進行后續實驗。

表1 酸度對氰化物含量的影響Table 1 Effect of acidity on cyanide content

2.3 氰化物轉化時間及氯胺T用量的影響

選用不同的氯胺T用量和氰化物轉化時間進行實驗，結果見表2和表3。從表2、表3可知，實驗選擇氰化物轉化時間4min和0.4mL的氯胺T用量具有較大的吸光度值（A）。

2.4 異煙酸-硫代巴比妥酸用量的影響

顯色劑的用量對顯色反應有較大影響，顯色劑用量不夠會導致顯色反應不完全。不同用量的異煙酸-硫代巴比妥酸顯色反應吸光度值（A）見表4。由表4可知，實驗選用5mL異煙酸-硫代巴比妥酸反應具有最大且穩定的吸光度值。

表2 氯胺T用量對氰化物含量的影響Table 2 Effect of the amount of chloramine-T on cyanide content

表3 氰化物轉化時間對氰化物含量的影響Table 3 Effect of cyanide conversion time on cyanide content

表4 異煙酸-硫代巴比妥酸用量對氰化物含量的影響Table 4 Effect of the amount of isonicotinic acid-thiobarbituric acid on cyanide content

2.5 共存物質的影響

酒中含有一定量的乙酸乙酯、乙酸和大量的乙醇，為確定其對測定結果的影響，本實驗加入無水乙醇0.6mL，1g/L～5g/L的乙酸乙酯和乙酸。當測定含量為6.0μg氰化物時，相對誤差在±5%范圍內。可見酒中常見物質對測定基本沒有影響，方法的選擇性較好。

2.6 標準曲線

本檢測方法氰化物含量在0～10.0μg/25mL范圍內符合朗伯比爾定律，標準曲線的回歸方程為A=0.0663c+0.0038，r=0.9997。

2.7 精密度實驗

對1.00μg和8.00μg 氰化物標準溶液和2份白酒樣平行測定5次，測定結果的平均值分別為為1.03μg 和8.05μg，0.24mg/L和0.12mg/L，相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）分別為2.1%和1.5%，2.9%和3.2%，反映該方法精密度良好。

2.8 酒樣分析

取3份酒樣按按1.3.2操作測定氰化物含量，同時與國標法（異煙酸-吡唑啉酮法）對照，并作加標回收率實驗，結果見表5。

表5 酒樣中氰化物含量的分析結果Table 5 Analytical results of cyanide content in alcoholic drink

由表5可知，該方法對氰化物含量的檢測結果與國標法吻合，加標回收率為96.6%～105.6%，說明該檢測方法準確度高。

3 結論

結果表明，在pH 5.7，氯胺T用量0.4mL，氰化物轉化時間4min，異煙酸-硫代巴比妥酸用量5mL的條件下，吸光度值達到最大。據此建立了酒中氰化物的異煙酸-硫代巴比妥酸分光光度法，用本法檢測的結果與國標法吻合，方法精密度良好，加標回收率為96.6%～105.6%，準確度高，可以用于酒中微量氰化物的檢測。

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