老年淋巴瘤患者microRNA—21的表達(dá)及臨床意義分析

王俊　宋奎

[摘要] 目的 研究microRNA-21（miR-21）在老年淋巴瘤細(xì)胞中的表達(dá)，探討miR-21表達(dá)與老年淋巴瘤臨床病理特征的關(guān)系及其在淋巴瘤發(fā)生發(fā)展中的臨床意義。方法 選取在該院診治的62例老年淋巴瘤患者為研究對(duì)象，通過(guò)健康體檢老年人群60名外周血的正常對(duì)照組的比較，用FQ-PCR方法檢測(cè)miR-21表達(dá)，并判斷其表達(dá)與淋巴瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。結(jié)果 老年淋巴瘤患者外周血中循環(huán)miR-21的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組。結(jié)論 外周血循環(huán)miR-21檢測(cè)可能成為早期診斷老年淋巴瘤患者的新標(biāo)志。

[關(guān)鍵詞] 老年；淋巴瘤 microRNA-21；表達(dá)；臨床意義

[中圖分類(lèi)號(hào)] R4 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2013）01（a）-0056-02

淋巴瘤是相對(duì)少見(jiàn)的惡性腫瘤類(lèi)型，老年淋巴瘤患者的預(yù)后要比年輕患者差，其心、肺、肝、腎和消化系統(tǒng)的功能明顯衰退，對(duì)化療的耐受性也較差，在進(jìn)行抗腫瘤治療中出現(xiàn)的不良反應(yīng)會(huì)更為嚴(yán)重。因此，提高診斷的準(zhǔn)確性，加強(qiáng)治療的預(yù)后分析對(duì)老年淋巴瘤患者臨床治療獲得成功具有重要的意義。研究表明，miR-21通過(guò)降解靶mRNA，或抑制其翻譯對(duì)靶基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)，在細(xì)胞的分化、增殖和凋亡中發(fā)揮著重要的作用，腫瘤患者血清中miR-21的表達(dá)可能成為新的腫瘤標(biāo)志物[1]。該研究通過(guò)檢測(cè)該院2009年1月—2011年12月期間收治的腫瘤患者血清中miR-21的表達(dá)，探討其在老年淋巴瘤患者臨床診治中的意義。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取在該院診治的62例老年淋巴瘤患者為研究對(duì)象。男36例，女26例。患者平均年齡63歲。對(duì)患者的腫瘤活檢組織和外周血進(jìn)行收集。并以60名健康體檢老年人群外周血作為正常對(duì)照組。

1.2 方法

采用miR-21提取試劑盒提取腫瘤組織和血清中的miRNA，用FQ-PCR檢測(cè)miR-21的表達(dá)水平。首先，以15 μL反應(yīng)體系為載體，混合3 μL逆轉(zhuǎn)錄酶與10 ng總RNA， 進(jìn)行16 ℃30 min、42 ℃30 min、85 ℃5 min的逆轉(zhuǎn)錄，取得逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA。然后，以20 μL反應(yīng)體系為載體，進(jìn)行150倍轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA的稀釋?zhuān)旌? μL稀釋的cDNA與2 μLTaqMan引物，進(jìn)行95 ℃10 min的變性，隨后進(jìn)行40個(gè)95 ℃15 s，60 ℃ 60 s的循環(huán)。最后，以U6snRNA作為內(nèi)對(duì)照，通過(guò)2△△△Ct計(jì)算改變倍數(shù)檢測(cè)miRNA的表達(dá)水平[2]。

2 結(jié)果

所有淋巴瘤細(xì)胞系中miR-21表達(dá)最高為234.86，最低為2.25。而正常對(duì)照淋巴細(xì)胞中miR-21的相對(duì)表達(dá)為（1.12±0.03）。與正常淋巴細(xì)胞相比，所有淋巴瘤細(xì)胞系中miR-21表達(dá)均高于正常淋巴細(xì)胞，見(jiàn)表1。

3 討論

目前，從淋巴瘤WHO分類(lèi)的亞型中可以看出，大約有一半的亞型其發(fā)病的中位年齡超過(guò)了50歲。可以預(yù)計(jì)，隨著整個(gè)社會(huì)老齡化的發(fā)展，老年淋巴瘤患者將成為淋巴瘤診療工作中的重要群體。而老年患者隨年齡增加，機(jī)體功能逐漸衰退，對(duì)化療、放療耐受能力下降，同時(shí)常伴有心臟病、糖尿病及呼吸道等系統(tǒng)的慢性疾病，易發(fā)生并發(fā)癥，加強(qiáng)治療的預(yù)后分析是老年淋巴瘤患者臨床治療的關(guān)鍵。miR-21是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)和前沿之一，它含有22個(gè)核苷酸，從長(zhǎng)度大約為3 400個(gè)核苷酸的前轉(zhuǎn)錄本體中分離出來(lái)，由單基因編碼。miR-21參與細(xì)胞生命過(guò)程中早期發(fā)育、增殖、凋亡、死亡等一系列的重要進(jìn)程，成為腫瘤診斷的新的分子標(biāo)志[3]。這必將為進(jìn)一步提高老年淋巴瘤患者治療水平奠定基礎(chǔ)。

3.1 淋巴瘤患者miR-21的表達(dá)分析

3.1.1 調(diào)控靶基因 miR-21作為單鏈非編碼RNA，通過(guò)與靶基因mRNA互補(bǔ)位點(diǎn)的結(jié)合在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因的表達(dá)。

3.1.2 預(yù)后估計(jì) 基因及其蛋白表達(dá)腫瘤的發(fā)生發(fā)在展中起著關(guān)鍵的作用，通過(guò)檢測(cè)腫瘤患者血清中miR-21的表達(dá)，可成為預(yù)后判斷的有利工具。

3.2 淋巴瘤患者miR-21表達(dá)的臨床意義分析

①以miR-21為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)基因藥物，抑制淋巴瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。上述病例研究表明， miR-21在淋巴瘤中表達(dá)上調(diào)，淋巴瘤細(xì)胞miR-21表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)正常淋巴細(xì)胞miR-21表達(dá)量，據(jù)此可以推測(cè)miR-21通過(guò)復(fù)雜的調(diào)控參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[4]。利用這一原理，可從調(diào)節(jié)腫瘤基因表達(dá)水平的角度來(lái)實(shí)現(xiàn)治療腫瘤的目的，即應(yīng)用反義miR-21抑制miR-21的表達(dá)能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。臨床上以miR-21為靶基因，當(dāng)miR-21在腫瘤中高表達(dá)或作為癌基因時(shí)，導(dǎo)入與miR-21互補(bǔ)的反義寡聚核苷酸序列AMO，降低其表達(dá)水平，有效抑制淋巴瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和促進(jìn)凋亡。②miR-21表達(dá)與化療藥物具有協(xié)同作用。目前，有研究證明，抑制miR-21表達(dá)能增強(qiáng)白血病細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。同時(shí)，研究表明，以miR-21為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)基因藥物，抑制淋巴瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋后，臨床治療中可加入拓?fù)涮婵担ㄒ环NDNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑）可以進(jìn)一步對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用。因此，抑制miR-21可以增強(qiáng)腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陳衛(wèi)群，孔德勇，王卉，等.淋巴瘤患者循環(huán)microRNA-21的檢測(cè)及其臨床意義[J]. 重慶醫(yī)學(xué)，2012（6）：21-22，25.

[2] 張繼信，呂曉濤，李保玉.microRNA在淋巴細(xì)胞分化及淋巴瘤發(fā)生中作用的研究進(jìn)展[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2009（4）：92-96.

[3] 肖琳，王振寧，徐惠綿.microRNA-21在腫瘤中異常表達(dá)的意義[J]. 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志，2009，6（5）：463-467.

[4] 張繼新，呂曉濤，高穎，等.microRNA-21在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2010，26（2）：43-47.

（收稿日期：2012-11-14）