云南雞屎藤根、莖、葉水提取物的體外抗菌研究

毛彩艷，袁芝瓊，林麗佳，申元英

（大理學院公共衛(wèi)生學院，云南大理 671000）

云南雞屎藤Paederia yunnanensis（Levl.）Rehd.作為一種藥食同源植物，不僅被云南多個少數(shù)民族用于治療多種疾病，也作為野菜食用〔1〕。《云南中草藥》記載雞屎藤有清熱解毒、祛風活絡、消腫止痛、化食除痰的功效，主治咽炎、扁桃體炎、痢疾、腸炎、疔瘡癤腫等疾病。國內(nèi)學者對不同產(chǎn)地雞屎藤開展了研究〔2-9〕。為了探討云南雞屎藤的抗菌、抑菌作用效果，本文用其根、莖、葉的水提取物對4種供試菌體外抑菌、殺菌作用進行了研究，為從中草藥中尋找抑菌藥物及云南雞屎藤的開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 藥材 云南雞屎藤于10月采集于滇中大姚縣城西郊坡地，海拔1350 m，樣品由大理學院馬曉匡教授鑒定為云南雞屎藤。供試藥物部位的界定，根：雞屎藤地下部分；莖：雞屎藤地上連接根、葉、花、果的部分；葉：包括葉片、葉柄和托葉。莖、葉陰干，根洗凈泥土切片曬干，分別用高速中藥粉碎機粉碎過40目篩，置于40℃恒溫干燥箱內(nèi)干燥到恒重，密封儲藏于4℃冰箱，備用。

1.2 供試菌株 供試所用菌株金黃色葡萄球菌（ATCC 25922）、痢疾桿菌（ATCC 2a24577）、大腸桿菌（ATCC 25923）、綠膿桿菌（ATCC 27853）均為標準菌，由大理學院基礎醫(yī)學院病原生物學綜合實驗室提供。

1.3 實驗試劑 MH瓊脂、MH肉湯等試劑購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.4 實驗儀器 旋轉蒸發(fā)器（RE-52A，上海亞榮生化儀器廠生產(chǎn)），SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（鞏義市子華儀器有限責任公司），高速中藥粉碎機（DFY-600），恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司），雙人單面超凈工作臺（VS-1300L-U，蘇凈集團安泰公司制造），定量濾紙（快速 201，灰分：0.01），高壓蒸汽滅菌器（MLS-3780，三洋電機株式會社），干燥箱（101C-2CB，上海市崇明實驗儀器廠），冰箱（博西華家用電器有限公司）。

2 實驗方法

2.1 提取物的制備 稱取云南雞屎藤根、莖、葉各100 g，分別加入500 mL超純水浸泡30 min，煮沸后文火煎20 min，各煎煮3次，把3次水煎液濾出混合后用定量濾紙過濾，濃縮濾液得根浸膏14 g、莖浸膏9 g、葉浸膏8 g，將所得浸膏120℃高壓滅菌20 min后用無菌水稀釋到1 g/mL，置于4℃以下保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 供試菌懸液的制備 從活化好的營養(yǎng)瓊脂平板上挑取形態(tài)相似的單個菌落置于2 mL生理鹽水中，調(diào)菌液濃度，使其相當于0.5麥氏標準比濁管，用MH液體培養(yǎng)基稀釋到含菌量為105cfu/mL備用，供試菌懸液在15 min內(nèi)接種完〔10〕。

2.3 最低抑菌濃度 分別取12支滅菌有塞試管，編號1-12號，1-10號管分別加入營養(yǎng)肉湯2 mL，在1號管中加入實驗藥液2 mL，混勻后吸取2 mL加入到2號管中，按同樣方法混勻2號管后吸取2 mL加入到3號管，依次稀釋到第9號管，9號管混勻后棄去2 mL，10號管不加藥液作供試菌生長對照管，11、12號管分別為實驗藥原液對照管和MH肉湯對照管，在1-10號管各管內(nèi)分別加入試驗菌液0.2 mL混勻，置于恒溫培養(yǎng)箱37℃下培養(yǎng)18 h，在對照管符合要求的條件下，肉眼觀察無細菌生長的藥液最低濃度為最低抑菌濃度（MIC）〔10-11〕。

2.4 最低殺菌濃度 測出MIC后，再依次從無細菌生長的各管中吸取0.2 mL培養(yǎng)物分別接種于營養(yǎng)瓊脂平板，置于恒溫培養(yǎng)箱37℃下培養(yǎng)18～24 h，平板上生長的菌落數(shù)小于5個對應的藥液最低濃度為最低殺菌濃度（MBC）〔12〕。

3 結果

在觀察結果與對照管比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）的前提下，云南雞屎藤根、莖、葉水提取物對4種供試菌均有一定的抑菌、殺菌作用，其MIC見表1，MBC見表2。

表1 云南雞屎藤根、莖、葉水提取物對4種供試菌的 MIC（mg/mL）

表2 云南雞屎藤根、莖、葉水提取物對4種供試菌的 MBC（mg/mL）

表1、表2中的結果顯示，根對綠膿桿菌的抑菌、殺菌作用均最強，其對4種供試菌的抑菌、殺菌作用在3個用藥部位中均最優(yōu)。葉對痢疾桿菌的抑菌作用最強，對金黃色葡萄球菌的殺菌作用最強。莖對4種供試菌的抑菌、殺菌作用相比根、葉沒有突出優(yōu)勢。

4 討論

近年來，隨著頻繁的抗生素不合理使用，臨床耐藥菌株不斷增加，細菌及真菌的耐藥性增強，致使臨床感染病死率不斷增高〔13〕。我國中醫(yī)藥在防治感染病方面歷史悠久，種類繁多，不易產(chǎn)生耐藥性，廣譜抗菌，毒副作用小，具有很強的開發(fā)優(yōu)勢。云南雞屎藤為茜草科雞屎藤屬多年生草質藤本植物，以地上部分和根入藥，主產(chǎn)于云南、貴州、廣西等省〔14〕。馬養(yǎng)民、栗原三郎、Ishikura等學者對雞屎藤的根、莖、葉、果實化學成分進行了鑒定，發(fā)現(xiàn)它們的成分存在很大的差異〔15-17〕。雞屎藤生長的自然環(huán)境、土壤環(huán)境和采收季節(jié)對其藥理作用存在著很大的影響〔18〕。

本實驗采用超純水煎煮提取云南雞屎藤根、莖、葉的有效成分，用常量稀釋法對4種供試菌的體外抑菌、殺菌作用進行測定，實驗結果表明，云南雞屎藤根、莖、葉對4種供試菌均有抑制、殺滅作用，并存在明顯差異。此實驗對了解云南雞屎藤根、莖、葉水提取物對4種供試菌有無抗菌作用、抗菌效果、用藥劑量、用藥部位的篩選有著重要意義，但對于其抗菌效果差異、作用機理和體內(nèi)抗菌效果還有待于進一步探討。云南有豐富的雞屎藤資源，此實驗也為云南雞屎藤的深入研究和開發(fā)利用提供了實驗依據(jù)。

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