加味定喘片乙醇提取工藝的研究

李文烈 孟作環 曹海芳 柏艷柳 李錦 鄭曉杰

（石家莊以嶺藥業股份有限公司，河北 石家莊 050035）

加味定喘片乙醇提取工藝的研究

李文烈 孟作環 曹海芳 柏艷柳 李錦 鄭曉杰

（石家莊以嶺藥業股份有限公司，河北 石家莊 050035）

目的：優化加味定喘片乙醇提取工藝。方法：采用正交試驗設計法，以鹽酸麻黃堿、黃芩苷含量和出膏率為評價指標，優選加味定喘片乙醇提取工藝。結果：加味定喘片乙醇提取工藝優選為加60%乙醇回流提取2次，每次2 h，第1次加10倍量，第2次加8倍量。結論：優選的提取工藝科學合理，可為工業化生產提供依據。

加味定喘片；鹽酸麻黃堿；黃芩苷；出膏率；正交設計；乙醇提取工藝

加味定喘片是由麻黃、白果、黃芩等藥物組成的中藥復方制劑，具有宣肺降氣、清熱化痰之功效，臨床治療哮喘療效確切。為充分提取有效成分，保證藥效，同時省工節能，降低生產成本，本研究以鹽酸麻黃堿、黃芩苷含量和出膏率為評價指標，以提取次數、提取時間、加乙醇量為考察因素，采用L9（3）4正交試驗法對乙醇提取工藝進行優化，現報道如下。

1 實驗儀器與材料

1.1 儀器

回流提取裝置，高效液相色譜儀（Agilent 1100），色譜柱：Waters Sunfire C18（4.6 mm×150 mm）。

1.2 試劑與藥品

鹽酸麻黃堿對照品（批號 171241-200506，購自中國食品藥品檢定研究院），黃芩苷（批號110715-200815，購于中國食品藥品檢定研究院），乙醇為醫用級，甲醇為色譜純，水為重蒸水。飲片均購自安國以嶺中藥飲片有限公司，經鑒定均符合《中國藥典》（2010年版）一部各自項下規定。

2 方法與結果

2.1 正交試驗設計

選取提取次數（A）、提取時間（B）、加醇量（C）

為考察因素，（D）設為空白，以鹽酸麻黃堿、黃芩苷含量和出膏率為指標，按L9（3）4正交設計表進行試驗，因素水平見表1。

表1 乙醇提取工藝正交試驗因素水平

2.2 試驗方法

2.2.1 樣品提取 按比例稱取復方飲片共9份，按照 L9（3）4正交試驗設計表，加 60%乙醇回流提取，提取液合并，濾過，減壓回收乙醇，適量濃縮，轉移至1 000 mL量瓶中，放冷至室溫，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，備用。

2.2.2 鹽酸麻黃堿含量測定

2.2.2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液（9∶91）為流動相，流速1 mL/min；檢測波長207 nm[1]。

2.2.2.2 對照品溶液制備 精密稱取鹽酸麻黃堿對照品10 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。精密量取3 mL置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2.3 供試品溶液制備 精密量取 2 mL提取液，置分液漏斗中，加入1 mol/L的氫氧化鈉溶液10 mL，用乙醚提取5次（分別為 15，15，15，10，10 mL）合并乙醚層，加鹽酸-甲醇（1∶100）1 mL，置水浴上揮干，殘渣加流動相溶解，定容于10 mL量瓶中，搖勻，濾過。

2.2.2.4 測定方法 精密吸取供試品溶液和對照品溶液各5 μL，注入高效液相色譜儀，測定供試品與對照品峰面積，計算。

2.2.3 黃芩苷含量測定

2.2.3.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇－0.1%磷酸溶液（45∶55）為流動相，流速1 mL/min；檢測波長280 nm[2]。

2.2.3.2 對照品溶液的制備 取黃芩苷對照品約10 mg，置 250 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。

2.2.3.3 供試品溶液的制備 精密量取提取液2 mL，置 50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過。

2.2.3.4 測定法 吸取供試品溶液和對照品溶液各 5 μL，注入高效液相色譜儀，測定供試品與對照品峰面積，計算。

2.2.4 出膏率測定 精密吸取提取液各 100 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥5 h，置干燥器中冷卻 30 min，迅速精密稱定重量，計算。

2.3 結果

見表2。

2.4 結果分析

直觀分析表明，各因素對鹽酸麻黃堿含量的影響大小依次為：提取次數＞提取時間＞加醇量，最佳工藝為A2B3C3；對黃芩苷含量的影響大小依次為：提取次數＞加醇量＞提取時間，最佳工藝為A3B3C3；對出膏率的影響大小依次為：提取次數＞提取時間＞加醇量。

方差分析（結果見表 3，4，5）表明，對3個指標提取次數的差異均具有統計學意義，其中鹽酸麻黃堿（P＜0.01）、黃芩苷（P＜0.05）、出膏率（P＜0.01），其他因素的差異均無統計學意義。

從提取次數分析，提取3次與提取2次相比，鹽酸麻黃堿和黃芩苷含量差異均較小，但提取3次比提取2次出膏率明顯增加，結合節約能源、降低成本和降低服用量因素考慮，確定提取次數為2次。從提取時間分析，鹽酸麻黃堿和黃芩苷含量兩個指標隨提取時間延長均呈上升趨勢，確定提取時間為2 h。從加醇量分析，加醇量對3個指標影響均較小，考慮到乙醇成本較高，確定加醇量為第1次10倍量，第2次8倍量。綜上所述，確定乙醇提取工藝為：加60%乙醇回流提取2次，每次2 h，第1次加10倍量，第2次加8倍量。

2.5 乙醇提取工藝的驗證實驗

稱取選凈的藥材，分別按最佳工藝A3B3C3的組合條件和選定工藝的A2B3C（3，2）組合條件進行重

復驗證實驗，測定鹽酸麻黃堿、黃芩苷含量和出膏率，結果見表6。

表2 乙醇提取工藝正交試驗結果

表3 乙醇提取工藝方差分析——鹽酸麻黃堿

表4 乙醇提取工藝方差分析——黃芩苷

表5 乙醇提取工藝方差分析——出膏率

結果表明，最佳工藝和選定工藝的3個指標含量差距較小，而且選定工藝乙醇用量減少，節約能源，有利于降低生產成本，故采用選定工藝。

3 討論

3.1 根據前期預實驗，鹽酸麻黃堿和黃芩苷在60%乙醇中溶解度較大，因此本研究正交試驗采用60%乙醇回流提取。

3.2 麻黃為本方君藥，具有發汗散寒、宣肺平喘、利水消腫的作用[3]，麻黃堿類生物堿是麻黃主要

的有效成分；黃芩苷為黃芩中主要有效成分，具有抗菌、消炎等作用[4]，與加味定喘片的功能主治一致，故以鹽酸麻黃堿、黃芩苷為含量考察指標。

3.3 本研究采用正交實驗設計，以鹽酸麻黃堿、黃芩苷含量和出膏率為評價指標優選了影響提取物含量的3個因素，得出最佳提取工藝，再結合實際大生產情況，對各影響因素進行了優化，最終確定了乙醇提取工藝為：加60%乙醇回流提取2次，每次2 h，第1次加10倍量，第2次加8倍量。

表6 乙醇提取工藝驗證結果

[1] 趙文明，承偉.RP-HPLC法同時測定小兒肺熱咳喘泡騰顆粒中鹽酸麻黃堿和苦杏仁苷的含量[J].沈陽藥科大學學報，2010，27（6）：474-476.

[2] 王曉宏.孕婦金花片的質量標準研究[J].現代中藥研究與實踐，2012，26（4）：72-75.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010年版）一部[M].北京：中國醫藥科技出社，2010：300-301.

[4] 黃志軍.黃芩苷藥理作用研究進展[J].天津藥學，2012，24（3）：61-64.

Study on the Ethanol Extraction Process for Jiaweidingchuan Tablets

Li Wenlie，Meng Zuohuan，Cao Haifang，Bai Yanliu，Li Jin，Zheng Xiaojie（Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co.Ltd.，Hebei Shijiazhuang 050035，China）

Objective:To optimize the ethanol extraction process for jiaweidingchuan tablets.Methods:Based on the orthogonal experiment design and using the contents of ephedrine hydrochloride and baicalin and the rate of extractum as indexes to optimize the ethanol extraction process for jiaweidingchuan tablets.Results:The optimum condition for the ethanol extraction of jiaweidingchuan tablets was the reflux extraction twice with addition of 60%ethanol，2 hours each time （10 and 8 times in volume respectively）.Conclusion:The optimized extraction process is scientific and reasonable，which can provide a basis for commercial productions.

Jiaweidingchuan Tablets；Ephedrine Hydrochloride；Baicalin；Orthogonal Design；Rate of Extractum；Ethanol Extraction Process

10.3969/j.issn.1672-5433.2013.11.005

2012-11-13）

李文烈，男，碩士，主管中藥師。研究方向：中藥新藥研發。通訊作者E-mail：liwenlie21@163.com