家蠶無性克隆母蛾的微粒子病檢測靈敏度分析初報

徐杰，魯興萌，劉培剛，杜鑫，孟正樂，何恩潔

（1.浙江省蠶種質量檢驗檢疫站，浙江 杭州 310020；2.浙江大學動物科學學院，浙江 杭州 310029；

3.浙江省農業科學院蠶桑研究所，浙江 杭州 310021）

家蠶無性克隆母蛾的微粒子病檢測靈敏度分析初報

徐杰1，魯興萌2，劉培剛3，杜鑫3，孟正樂1，何恩潔1

（1.浙江省蠶種質量檢驗檢疫站，浙江 杭州 310020；2.浙江大學動物科學學院，浙江 杭州 310029；

3.浙江省農業科學院蠶桑研究所，浙江 杭州 310021）

由于單交制種模式與常規蠶種制種模式不同，因此需要建立適合單交制種模式的新蠶種生產技術規程和質量檢疫檢驗標準。本文對雌蠶無性克隆和常規交配制種條件下的母蛾微粒子病檢出率進行分析，結果表明雌蠶無性克隆制種方式下的母蛾對微粒子病檢疫沒有產生不良影響，即使摘除卵管和蠶卵，其檢測靈敏度也是足夠的。

家蠶；無性克隆；母蛾；微粒子病；檢疫

近些年來，浙江省農科院蠶桑研究所利用雌蠶無性克隆（也稱孤雌生殖、無性繁殖）技術育成了發生率和孵化率分別達90%和80%以上的實用化雌蠶無性克隆系（基因型完全相同、后代全部為雌性的品種），并與經濟性狀優良的限性卵色品種或平衡致死系（根據卵色能將雌、雄分開）雜交先后育成了綜合經濟性狀優良的新型單交品種浙鳳1號（原名：雌29×卵36）和新型雄蠶品種“雌35×平28”，前者已通過浙江省品種審定，后者正在參加浙江省家蠶新品種實驗室鑒定［1～3］。這種新型的“單交制種”新模式，提供給蠶種生產企業的原種，一方全為雌蠶，另一方全為雄蠶，免去了雌雄鑒別這道復雜的工序，將有效解決目前原蠶區蠶種生產過程中的雌雄蠶蛹鑒別費時、費工的問題，大幅度提高制種效率及雜交徹底率，有利于提高蠶種質量［4］。

單交品種的育成與應用將推進我國蠶種生產技術的創新，提高蠶種生產企業的效益。但由于單交制種模式與現行蠶種制種模式不同，需要建立新的蠶種生產技術規程和蠶種質量檢疫檢驗標準。如雌蠶無性克隆系原種生產，需要從羽化的處女蛾體內取出未受精卵處理，這種制種方式即摘除卵管和蠶卵的母蛾是否會對微粒子病的檢疫產生不良影響［5］。需要對摘除卵管和蠶卵的母蛾微粒子病檢測靈敏度進行測試，判斷雌蠶無性克隆的母蛾微粒子病檢出率與正常交配產卵的母蛾微粒子病檢出率是否存在顯著差異，為建立新型蠶種生產模式下的蠶種質量檢疫檢驗標準提供依據。為此，2012年秋期浙江省蠶種質量檢疫檢驗站、浙江大學動物科學學院蠶蜂研究所、浙江省農科院蠶桑研究所聯合開展了相關研究，現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試家蠶微粒子蟲孢子液：由浙江大學動物科學院蠶蜂研究所提供，分別設置103spore/ml、105spore/ml、107spore/ml等3種不同濃度。

供試蠶品種：“無毒”秋豐、白玉原種，由浙江省蠶種質量檢驗檢疫站提供。

供試“無毒”母蛾：由浙江省蠶種質量檢驗檢疫站提供一樣本檢驗“無毒”的二樣本蛾盒。

1.2 飼養和感染

供試的“無毒”秋豐、白玉原種，由浙江省農科院蠶桑研究所按DB33/T 217.4-2007《桑蠶種繁育規程》飼養至4齡大眠，提供給浙江大學動物科學學院添毒用大眠蠶1600條；浙江大學動物科學學院蠶蜂研究所在5齡起蠶時，分別添食103spore/ml、105spore/ml、107spore/ml等3種不同濃度的微粒子蟲孢子懸浮液。添毒后按常規方法飼養至化蛹，鑒別雌、雄蠶蛹備用。

1.3 制種

試驗區雌蛹化蛾當天下午14～16時按無性克隆制種方式摘除輸卵管和蠶卵，摘除輸卵管和蠶卵后的蛾體60℃烘干后備檢。

對照區雌蛹化蛾后與對交品種雄蛾交配產卵，產卵的母蛾待自然死亡后60℃烘干備檢。

1.4 微粒子病靈敏度檢測

將感染母蛾與“無毒”母蛾以1∶27的比例混合。母蛾鏡檢由浙江省蠶種質量檢疫檢驗站按DB 33/ T217.3-2007《桑蠶種母蛾檢疫規程》3.6規定的檢疫流程進行磨蛾、過濾、離心、鏡檢，調查檢出率。以“無毒”母蛾（28蛾/盒）鏡檢結果作為陰性對照。

1.5 數據處理

使用Microsoft Excel 2003程序，對試驗數據進行方差分析，百分數進行Sin-1（P）1/2轉換。

2 結果與分析

2.1 不同制種方式的母蛾微粒子病檢出率

將雌蠶無性克隆（試驗區）和常規交配制種（對照區）的母蛾微粒子病檢出率進行了統計分析，結果見表1。

表1 雌蠶無性克隆與常規制種的母蛾微粒子病檢出率（%）Table 1 Pebrine detectable rate of female silkworm parthenogenetic clone and conventional eggs production（%）

對雌蠶無性克隆與常規制種的母蛾微粒子病檢出率原始數據進行了Sin-1（P）1/2轉換，結果見表2。

表2 雌蠶無性克隆與常規制種的母蛾微粒子病檢出率Table 2 Pebrine detectable rate of female silkworm parthenogenetic clone and conventional eggs production

2.2 不同制種方式的母蛾微粒子病檢出率方差分析

對不同制種方式、不同感染濃度母蛾微粒子病檢出率作無重復雙因素方差分析，結果見表3。

通過分析發現，不同感染劑量對母蛾微粒子病檢出率影響顯著：

F（劑量）=13.494＜Fcrit（臨界值）=5.143

P（概率）=0.006＜0.01

而不同制種方式對母蛾微粒子病檢出率沒有表現出明顯差異：

F（制種方式）=1.828＜Fcrit（臨界值）=4.757

P（概率）=0.242＞0.05

PA preliminary Analysis on Moth Pebrine Detection Sensitivity of Silkworm Parthenogenetic Clones

XU Jie1，LU Xing-meng2，LIU Pei-gang3，DU Xin3，MENG Zheng-le1，HE En-jie1
（1.Silkworm Egg Technical Service Center，Agricultural Deportment of Zhejiang Province，Hangzhou 310020，China；2.Colleges of Animal Sciences，Zhejiang University，Hangzhou 310029，China；3.Sericultural Research Institute，Zhejiang Academy of Agricultural Sciences，Hangzhou 310021，China）

Because of the differences between the single-cross eggs production mode and conventional eggs production mode，it is necessary to establish new suitable eggs production technical specification and quality inspection standard. The female moth pebrine detection rate of female silkworm parthenogenetic clones and conventional eggs production were analyzed，results showed that there were no adverse effects on moth pebrine quarantine under female silkworm parthenogenetic clones eggs production.Even if the ovarian tubes and eggs were removed，the detection sensitivity is also enough.

silkworm；parthenogeneticc clone；moth pebrine disease；quarantine

S882.2

A

0258-4069［2013］02-032-03

項目來源：浙江省農業新品種選育重大專項（2012C12910）

徐杰，男，浙江嘉興，碩士，高級農藝師。主要從事蠶種質量檢疫檢驗。E-mail：osan@sina.com