超聲提取素馨花總環烯醚萜苷的單因素實驗研究

杜乾坤，劉東海，楊緩緩，李文寧，郝 婷

(1.承德醫學院2009級中藥學系，河北承德 067000;2.指導教師)

學生園地

超聲提取素馨花總環烯醚萜苷的單因素實驗研究

杜乾坤1，劉東海2，楊緩緩1，李文寧1，郝 婷2

(1.承德醫學院2009級中藥學系，河北承德 067000;2.指導教師)

素馨花;總環烯醚萜苷;超聲提取

素馨花藥材又名耶悉茗花，為木犀科茉莉屬植物素馨花(Jasminum officinale L.var. grandiflorum)的干燥花蕾，具有疏肝解郁、行氣止痛之功效，在我國民間用于治療消化不良、十二指腸球部潰瘍及慢性肝炎、肝硬化等癥[1]。素馨花主要化學成分為環烯醚萜苷類、黃酮類和三萜皂苷類化合物[2-3]，其中環烯醚萜苷類化合物主要為橄欖苦苷，且具有抗HBV活性[4]。本研究以素馨花總環烯醚萜苷含量為考察指標，用紫外分光光度法進行含量測定，考察素馨花總環烯醚萜苷超聲提取工藝中的單因素及水平，為正交實驗法優選素馨花總環烯醚萜苷的超聲提取工藝提供實驗依據，為素馨花中環烯醚萜苷類化學成分的進一步分離純化奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 SP-752型紫外分光光度計(上海光譜儀器有限公司);電子分析天平(瑞士梅特勒AG-245型);RE-52AA旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠);CHRIST實驗室型冷凍干燥機(德國MARTIN CHRIST);素馨花(亳州藥材交易中心，軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所藥物化學研究室副研究員、生藥學博士李彬鑒定);橄欖苦苷對照品(實驗室自制，純度99.5%);試劑均為分析純。

1.2 方法[5]

1.2.1 標準曲線制定:取橄欖苦苷對照品5.00mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含0.0500mg的溶液，作為橄欖苦苷對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10ml，置25ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在232nm波長處用紫外分光光度計測定吸收度。得回歸方程:A=0.0289，C-0.0049，R2=0.9998。

1.2.2 樣品測定:五個水平的總環烯醚萜苷含量測定均采用紫外分光光度計測定。取各個水平所得的干浸膏各2.00mg，置50ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含0.0400mg的溶液，作為供試液。在232nm波長處用紫外分光光度計測定吸收度，用標準曲線計算出供試液中的總環烯醚萜苷的濃度C1，再用公式:總環烯醚萜苷收率(按藥材計算)(%)= (C1/0.0400×M干浸膏)/2.00×100%,計算出總環烯醚萜苷的收率。

2 結果

實驗選用了提取時間、提取溫度、料液比、提取次數以及乙醇濃度等對總環烯醚萜苷提取率起主要影響的5個因素，以素馨花總環烯醚萜苷的提取率為考察指標，進行了單因素考察。

2.1 提取時間對素馨花總環烯醚萜苷提取率的影響 固定提取溫度25℃，提取次數1次，料液比2:20，乙醇濃度30%，考察不同的超聲時間對素馨花總環烯醚萜苷提取率的影響，結果見圖1。

圖1 提取時間對總環烯醚萜苷提取率的影響

2.2 提取溫度對素馨花總環烯醚萜苷提取率的影響 固定提取時間20min，提取次數1次，料液比2:20，乙醇濃度30%，考察不同提取溫度對素馨花總環烯醚萜苷提取率的影響，結果見圖2。

圖2 提取溫度對總環烯醚萜苷提取率的影響

2.3 料液比對素馨花總環烯醚萜苷提取率的影響 固定提取時間20min，提取溫度25℃，提取次數1次，乙醇濃度30%，考察不同料液比對素馨花總環烯醚萜苷提取率的影響，結果見圖3。

圖3 料液比對總環烯醚萜苷提取率的影響

2.4 提取次數對素馨花總環烯醚萜苷提取率的影響 固定提取時間20min，提取溫度25℃，料液比2:20，乙醇濃度30%，考察不同提取溫度對素馨花總環烯醚萜苷提取率的影響，結果見圖4。

圖4 提取次數對總環烯醚萜苷提取率的影響

2.5 乙醇濃度對素馨花總環烯醚萜苷提取率的影響 固定提取時間20min，提取溫度25℃，提取次數1次，料液比2:20，考察不同提取溫度對素馨花總環烯醚萜苷提取率的影響，結果見圖5。

圖5 乙醇濃度對總環烯醚萜苷提取率的影響

3 討論

超聲提取的基本原理是利用超聲波產生強烈振蕩、高速和強烈的空化效應、攪拌作用，破壞植物藥材的細胞，使溶劑能滲透到藥材細胞中，加速藥材中有效成分的浸出提取。與傳統提取工藝相比，超聲波提取具有時間短、產率高、不需加熱(不破壞有效成分)、適應性廣、提取的藥液雜質少，有效成份易于分離、純化等優點。超聲提取是目前研究中藥有效成分時優先選擇的提取工藝之一。

前期工作中，我們考察了素馨花中總環烯醚萜苷的水冷浸、水煎煮、醇冷浸、醇回流等傳統提取工藝[6]。本實驗通過單因素試驗對素馨花中總環烯醚萜苷超聲提取的5種影響因素進行了優化。比較5種影響因素所得結果，溫度對提取率影響最小，可以忽略;乙醇濃度、提取時間、提取次數、料液比等對提取率均有顯著影響。相關研究結果可為正交實驗法優選素馨花總環烯醚萜苷的超聲提取工藝提供實驗依據。

[1]南京中醫藥大學.中藥大辭典[M].第二版.上海:上海科學技術出版社,2006.2476

[2]趙桂琴,夏晶晶,董俊興.素馨花糖苷類化學成分研究[J].藥學學報,2007,42(10):1066-1069.

[3]趙桂琴,董俊興.素馨花三萜皂苷類化學成分研究[J].中國中藥雜志,2008,33(1):38-42.

[4]Zhao GQ, Yin ZF,Dong JX. Antiviral ef fi cacy against hepatitis B virus replication of oleuropein isolated from Jaminum of fi cinale L.var.grandiflorum[J].Journal of Ethnopharmacology,2009,125(2): 265-268.

[5]陳文珠，郭偉忠，林茵.梔子藥材提取工藝的優化[J].井岡山學院(自然科學)，2008，29(6):75-77.

[6]郝婷，趙桂琴，張樹峰.素馨花中總環烯醚萜苷提取工藝的研究[J].時針國醫國藥，2011，26(6):1353-1355.

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1004-6879(2013)01-0075-02

2012-06-13)