妊娠母體不同階段花生四烯酸乙醇胺水平變化分析＊

封玉玲，周海英，李家莉，苗加偉，李 晶△，周 敏

（1.重慶三峽醫藥高等專科學校病理教研室，重慶萬州404120；2.重慶三峽中心醫院，重慶萬州404100；3.重慶三峽醫藥高等專科學校藥理教研室，重慶萬州404120；4.重慶醫科大學附屬第一醫院婦產科，重慶400016）

內源性大麻系統的兩種大麻素受體Ⅰ型大麻受體（cannabinoid receptor 1，CB1）和Ⅱ型大麻受體（cannabinoid receptor 2，CB2），在分娩過程中具有很好的止痛、鎮靜和抗炎的作用［1-2］。本文通過柱前衍生化高效液相色譜法（HPLC）分離，熒光檢測器檢測，測定妊娠女性血漿中內源性大麻受體（cannabinoid receptor，CBR）的內源性配體花生四烯酸乙醇胺（arachidonylethanolamide，anandamide，AEA）的變化，探討內源性大麻素AEA在這一過程中可能扮演的角色。通過分析妊娠過程中血漿AEA水平發生的變化，為臨床產科尋找新藥提供思路和策略。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年10月至2011年3月在重慶醫科大學附屬第一醫院婦產科產前檢查和住院分娩的孕婦200例，其中年齡為（26.5±3.2）歲，孕周為（28.6±3.7）周。根據妊娠時間不同分為孕早期（5～12周），孕中期（15～28周），孕晚期（36～39周）及產前4個組，每組50例。所選對象按照全國統編教材《婦產科學》［3］提出的診斷標準進行篩選。此外，選擇10名女性未孕的健康體檢者為對照組，年齡22～28歲，平均24.9歲。近期體檢合格，自愿參與本次研究。

1.2 方法

1.2.1 收集標本 所有孕婦取靜脈血3.0mL，孕早期及孕中期組清晨體檢時坐位抽取靜脈血，孕晚期組入院后次日清晨采集空腹靜脈血液；產前組于宮縮進入活躍期后抽取肘正中靜脈血3.0mL；志愿者采血時間同孕晚期婦女時間。上述血樣不同時間點采血后迅速轉入加有肝素抗凝試管，-70℃保存待測。樣品處理后用HPLC分離測定AEA水平。

1.2.2 血漿中AEA衍生化合物水平測定 分別取上面所得血漿樣品，精密吸取3mL，裝入含有肝素抗凝的試管中，加入甲苯0.5mL混懸器充分混勻2min，快速離心（10 000r／min）10min。微孔濾膜過濾，取1mL濾液（恒溫20℃）氮氣揮干后加入衍生化試劑DBD-COCl衍生化，HPLC測定樣品AEA衍生化合物水平，外標法定量。本文采用的AEA衍生化法［4］經改進在1.05～52.70ng呈良好線性。當信噪比（S／N）＝3時，AEA-DBD-COCl衍生物的檢測限為0.30ng。該方法中衍生物達到完全分離，沒有明顯內生雜質峰的干擾，具有較高的專屬性。此外日內、間密度試驗表明該方法穩定，準確可靠，適用于生物樣品分析測定樣品中AEA的水平。

1.3 統計學處理 所有實驗數據采用SPSS11.0統計軟件進行分析，計量資料以±s表示，樣本均數比較進行t檢驗，以P＜0.01為差異有統計學意義。

2 結 果

孕早期開始到孕晚期，妊娠母體血漿中AEA水平具有一定降低趨勢，孕中期及孕晚期孕婦血漿中AEA水平顯著低于對照組女性靜脈血漿中AEA，差異有統計學意義（P＜0.01）；臨產孕婦母體血漿中AEA水平發生急劇升高，即刻孕婦靜脈血漿中 AEA水平增加到（18.64±3.95）ng／L，并顯著高于妊娠母體孕中、晚期血漿中AEA水平（P＜0.01），見表1。

表1 各組血漿中AEA水平比較（±s，ng／L）

表1 各組血漿中AEA水平比較（±s，ng／L）

＊：P＜0.01，與對照組比較；△：P＜0.01，與產前組比較。

組別n AEA對照組10 11.57±3.94孕早期組 50 10.32±1.51＊孕中期組 50 6.17±1.78＊△孕晚期組 50 5.51±2.66＊△產前組 50 18.64±3.95＊

3 討 論

大麻主要有三大類：內源性大麻、人工合成大麻和天然植物中提取的大麻。而CBR在系統調節多種生理和病理的過程中發揮重要的作用，如控制飲食吸收、疼痛敏感度、炎癥和認知等。有研究發現內源性大麻配體AEA在人體不同生理狀態時發生改變，這些改變可能對人體具有一定保護作用［5］。女性在妊娠期間體內許多內源性小分子會發生顯著性變化，對妊娠整個過程常具有非常重要的生理及病理學意義［6-7］。

本文結果顯示，整個妊娠過程血中內源性大麻配體AEA水平發生顯著改變，孕早期到孕晚期孕婦血中AEA水平呈逐漸降低趨勢。有研究報道認為某些女性習慣性流產的原因可能與其孕前期體內AEA較高有關［8］。如缺失CB1大鼠由于缺乏CB1信號轉導而導致早產高發生率的現象［9］，意味著大麻受體信號轉導對人類早產可能產生類似影響。此外，AEA還具有調節子宮一氧化氮合酶活性作用［10］，AEA升高可能與孕婦的產程具有相關性，AEA水平升高越快產程越短。孕晚期母體血漿中AEA水平顯著低于未孕女性，但在臨產前母體血漿中AEA開始出現急劇升高，AEA有極高脂溶性，AEA發生變化意味著大麻受體CB1／CB2可能參與了整個妊娠過程并發揮作用。AEA在分娩時水平急劇升高，減少了子宮平滑肌等組織中前列腺素類的生物合成［11］（AEA水解產物為花生四烯酸和乙醇胺），而前列腺素對于分娩具有重要作用。大麻CB1／CB2受體及它們對應選擇性脂肪酰胺水解酶廣泛存在于子宮平滑肌、胎盤及胎盤膜，AEA參與了妊娠生理全過程，因此，有研究者認為它可能對懷孕／分娩具有重要調節作用。此外AEA可在子宮被合成，在羊水中也同樣發現AEA的存在。

焦慮是妊娠期主要的精神障礙，孕婦分娩時往往伴有疼痛及焦慮情緒，甚至妊娠焦慮癥。焦慮情緒不但危害孕婦的自身健康，也對胎兒產生極為不利的影響。精神情緒緊張、恐懼、疲勞增加了體內兒茶酚胺的分泌，兒茶酚胺進一步產生抑制宮縮作用。調節大麻CB1可以松弛子宮平滑肌，反饋性減少產婦體內兒茶酚胺的分泌，松弛子宮肌層，有助于子宮收縮。大麻受體CB2具有類似嗎啡受體的鎮痛作用，臨產前AEA濃度急劇升高作用于大麻CB1／CB2受體，對于孕婦生產過程發揮了緩解情緒緊張、鎮痛和助產等作用。毒品大麻素類物質可以產生令人愉悅的狀態，包括虛幻的感覺、欣快感、鎮痛、體溫降低，引起短期記憶缺失等作用，分娩過程急劇升高的AEA在體內可能扮演了同樣的角色。

大麻類提取物常被濫用，并產生不良精神癥狀和明顯成癮性，人們對于大麻藥物認識和研究一直被這些負面因素所影響。妊娠過程中內源性大麻配體AEA水平發生顯著改變，而這一變化可能意味著大麻系統在妊娠及分娩過程中發揮了作用，從這一角度來看，可能需要重新審視大麻類藥物在臨床婦產科的地位和意義。

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［3］樂杰.婦產科學［M］.7版.北京：人民衛生出版社，2008.

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［5］Van Sickle MD，Duncan M，Kingsley PJ，et al.Identification and functional characterization of brainstem cannabinoid CB2 receptors［J］.Science，2005，310（5746）：329-332.

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［8］Sun X，Dey SK.Cannabinoid／endocannabinoid signaling impact on early pregnancy events［J］.Curr Top Behav Neurosci，2009，1（1）：255-273.

［9］Wang H，Xie H，Dey SK.Loss of cannabinoid receptor CB1 induces preterm birth［J］.PLoS One，2008，3（10）：e3320.

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［11］Mitchell MD，Sato TA，Wang A，et al.Cannabinoids stimulate prostaglandin production by human gestational tissues through a tissue-and CB1-receptor-specific mechanism［J］.Am J Physiol Endocrinol Metab，2008，294（2）：E352-356.