ANA、SSA、SSB、RO-52在干燥綜合征診斷中的臨床意義

彭勇，譚立明，李華，陳娟娟，蔡勵(lì)利

(1、南昌大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院08級(jí)2班，江西南昌330006;2、南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西南昌330006)

·實(shí)驗(yàn)研究·

ANA、SSA、SSB、RO-52在干燥綜合征診斷中的臨床意義

彭勇1，譚立明2，李華2，陳娟娟2，蔡勵(lì)利2

(1、南昌大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院08級(jí)2班，江西南昌330006;2、南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西南昌330006)

目的探討干燥綜合征(SS)患者ANA、SSA、SSB和RO-52抗體檢測(cè)的臨床意義。方法選取2010年5月至2012年5月南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院住院及門(mén)診SS患者49例和非SS患者144例及40例健康對(duì)照體檢者，采用間接免疫熒光法測(cè)ANA；免疫印跡法測(cè)抗SSA、SSB和RO-52抗體，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果(1)三組ANA、SSA、SSB、RO-52陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；(2)SS組ANA與SSB、RO-52陽(yáng)性率(P＜0.01)和SSA與RO-52陽(yáng)性率(P＜0.05)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，SLE組除SSA與RO-52外其余陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),MCTD組SSA與SSB、RO-52陽(yáng)性率(P＜0.01)和SSA與SSB陽(yáng)性率(P＜0.05)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，RA組ANA與RO-52陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),各組其余陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；(3)SS組SSA/SSB與SSA/SSB/RO-52陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), SLE組SSA/RO-52與其余各項(xiàng)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),MCTD組SSA/RO-52與其余各項(xiàng)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；(4)在SS患者抗體檢測(cè)中ANA的敏感性高但特異性差，SSA、SSB、RO-52敏感性稍低但特異性高。結(jié)論SS患者檢測(cè)ANA及抗SSA、SSB和RO-52抗體等自身抗體，對(duì)SS的診斷、鑒別診斷具有重要的作用，可提高SS的診療水平。

干燥綜合征；SSA；SSB；RO-52；ANA

干燥綜合征(sjogren syndrome，SS)是一種全身性的自身免疫性疾病，由于臨床表現(xiàn)為口，眼干燥，關(guān)節(jié)腫痛等一系列臨床癥狀，很難確診。近年來(lái)，隨著科技和檢查手段的完善，干燥綜合征病例逐年增加。研究表明，SS患者的血清中存在多種自身抗體，如SSA、SSB等等，這些自身抗體對(duì)SS的早期診斷具有重要的意義。為了更好地對(duì)SS患者進(jìn)行診斷，臨床常對(duì)其檢測(cè)ANA、SSA、SSB和RO-52。雖然1997年Haneji等報(bào)道，α-胞襯蛋白在SS發(fā)病中具有重要意義，但是Zandbeh等報(bào)道α-胞襯蛋白診斷敏感性不如SSA、SSB，特異性不如SSB。故本文主要檢測(cè)ANA及ANA譜中SSA、SSB和RO-52在SS患者和非SS患者的敏感性和特異性比較來(lái)闡述這些檢測(cè)項(xiàng)目對(duì)SS的臨床意義。筆者對(duì)49例SS及144例非SS患者及40例健康對(duì)照者進(jìn)行了ANA、SSA、SSB和RO-52的檢測(cè)，比較單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)在SS診斷中的價(jià)值，得出聯(lián)合檢測(cè)ANA、SSA、SSB及RO-52抗體可以提高SS診斷特異性。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源來(lái)源于2010年5月至2012年5月就診于南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院住院及門(mén)診患者。其中確診的干燥綜合征患者49例，男6例、女43例，年齡27～64歲，平均40.8歲。144例非SS患者分別是系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)56例，男7例，女49例，年齡25～62歲，平均40.5歲；混合性結(jié)締組織病(MCTD)35例，男4例，女31例，年齡26～57歲，平均37.8歲；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)53例，男6例，女47例，年齡29～66歲，平均44.6歲。40例健康對(duì)照者均為南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院體檢中心健康體檢者，其中男5例，女35例，年齡為22～59歲，平均39.4歲。

1.2 診斷依據(jù)[1](1)有3個(gè)月以上的眼干澀感；反復(fù)出現(xiàn)眼沙粒感；每天3次以上的使用淚液代用品。凡有其中任1項(xiàng)者為陽(yáng)性。(2)有3個(gè)月以上的口干癥；反復(fù)持久的涎腺腫大；吞咽干性食物需頻繁飲用液體。凡有其中任1項(xiàng)者為陽(yáng)性可以診斷為干燥綜合癥。(3)濾紙?jiān)囼?yàn)≤5mm/5min為陽(yáng)性；角膜染色指數(shù)≥4為陽(yáng)性。2項(xiàng)中至少1項(xiàng)陽(yáng)性。(4)下唇黏膜活檢的單核細(xì)胞浸潤(rùn)灶≥1/4mm2陽(yáng)性。(5)腮腺造影、唾液腺同位素掃描和唾液流率中有任1項(xiàng)陽(yáng)性者。(6)血清抗SS-A或抗SS-B抗體陽(yáng)性。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn)(1)凡具備上述6項(xiàng)中至少4項(xiàng)，但必須含有條目4或條目6。(2)條目3、4、5、6任意3條陽(yáng)性。(3)患者有潛在疾病(如任一結(jié)締組織病)，而符合上述的1、2條目中的任意1條，同時(shí)符合條目3、4、5條目中任意2條[1]。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn)(1)不符合納入標(biāo)準(zhǔn)；(2)既往患肺結(jié)核者；(3)有慢性支氣管炎、肺氣腫、支氣管哮喘、支氣管擴(kuò)張、肺部腫瘤等呼吸系統(tǒng)疾病者；(4)慢性心、肝、腎功能不全者;(5)長(zhǎng)期吸煙者;(6)抗乙酰膽堿藥的應(yīng)用(如阿托品、莨菪堿、溴丙胺太林、顛茄等)[1]。

1.5 試劑與儀器ANA采用德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司免疫熒光試劑,抗SSA、SSB和RO-52抗體采用ANA譜試劑盒亦來(lái)自于德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司免疫印跡試劑。熒光顯微鏡為日本尼康公司生產(chǎn)，型號(hào)為Nikon E400。搖床為江蘇其林貝爾儀器制造有限公司生產(chǎn)的TS-8型脫色搖床。

1.6 方法ANA采用間接免疫熒光法：將待測(cè)血清用PBS吐溫緩沖液1:100稀釋，取25μl稀釋后血清與生物載片(HEp-2細(xì)胞和猴肝)室溫反應(yīng)30min，沖洗載片后加熒光二抗室溫反應(yīng)30min，重復(fù)沖洗后，用甘油/PBS封片，熒光顯微鏡閱片。

ANA譜采用免疫印跡法：將待測(cè)血清用樣本緩沖液1:101稀釋，檢測(cè)膜條放入溫育槽中，每槽加入1.5ml緩沖液，搖床溫育5min后吸去；再加入1.5ml稀釋后血清，搖床溫育30min后清洗；加入1.5ml酶結(jié)合物，搖床溫育30min后清洗；加入1.5ml底物液，搖床溫育10min；用蒸餾水清洗終止后判斷結(jié)果。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析所得數(shù)據(jù)使用SPSSl5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示，各組間結(jié)果相關(guān)性通過(guò)卡方檢驗(yàn)進(jìn)行比較，P＜0.01、P＜0.05均為組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 49例SS患者、144例非SS患者和40例健康對(duì)照者ANA與ANA譜中SSA，SSB和RO-52陽(yáng)性率對(duì)比關(guān)系見(jiàn)表1。

2.2 采用間接免疫熒光法及免疫印跡法檢測(cè)ANA、SSA、SSB和RO-52抗體結(jié)果見(jiàn)表2。體各組合項(xiàng)目結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 SS、非SS及健康體檢者檢測(cè)各種自身抗體結(jié)果[例(%)]

2.4 臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)結(jié)果SS患者中檢測(cè)ANA、SSA、 SSB和RO-52抗體等各項(xiàng)臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)結(jié)果，詳見(jiàn)表4。

表2 ANA、SSA，SSB，RO-52抗體與對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果[例(%)]

表3 SSA，SSB，RO-52抗體與對(duì)照組各組合陽(yáng)性率比較[例(%)]

表4 SS患者抗體檢測(cè)的各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)結(jié)果

3 討論

干燥綜合征屬于全球性疾病，在我國(guó)患病率為0.3%～0.7%，并且老年人群患病率為3%～4%[2]。從病人信息可以看出，患干燥綜合征等自身免疫性疾病的患者基本為女性，男女比例為1:7以下，并且年齡大多數(shù)都在40～50歲之間，此病隨年齡增加發(fā)病率有所增加。ANA是抗細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱,所以不僅僅局限于細(xì)胞核成分，無(wú)器官和種屬特異性。ANA譜也即是抗核抗體譜，此中涉及的抗原為可提取性抗原，不同特性的抗核抗體譜在各種自身免疫性疾病中的陽(yáng)性率有明顯的差異。筆者看出ANA在SS患者的陽(yáng)性率為93.9%，在非SS患者的陽(yáng)性率為70.8%，靈敏度高，但是特異性差，因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)所有抗原成分復(fù)雜，種類繁多，因此不同成分的抗原都能形成ANA陽(yáng)性。ANA在許多結(jié)締組織病都可以表達(dá)[3]，并且陽(yáng)性率都較高，甚至正常老年人可有低效價(jià)的ANA，缺乏特異性。因此ANA是作為自身免疫性疾病的篩選指標(biāo)，若ANA為陽(yáng)性，可以患各種自身免疫性疾病，應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步檢測(cè)ANA譜是否為陽(yáng)性。ANA譜中的SSA都是由許多小分子RNA與各自對(duì)應(yīng)的特定蛋白質(zhì)組成的核糖核蛋白顆粒，雖然靈敏度略小于ANA，但是特異性遠(yuǎn)高于ANA，在其他結(jié)締組織病表達(dá)較少[3]，對(duì)診斷更有指導(dǎo)意義。

抗RO-52在多種自身免疫性疾病中陽(yáng)性率較高，故抗RO-52抗體不能判斷為SS的特異性指標(biāo)。抗SSA、SSB抗體是診斷SS的標(biāo)志性抗體，抗SSA抗體的敏感性高，但是一部分SLE患者也會(huì)產(chǎn)生此類抗體，抗SSA、RO-52抗體在SS患者和SLE患者特異度相似，但是抗SSB抗體較抗SSA抗體診斷SS更為特異[4]。MCTD類似于SLE，其SSA與RO-52陽(yáng)性率較高，而SSB陽(yáng)性率較低，更加印證了SS的標(biāo)志性抗體中，抗SSB抗體更特異。RA也是常見(jiàn)的自身免疫性疾病，但診斷主要依賴臨床觀察其癥狀，ANA及ANA譜在此病癥中陽(yáng)性率低，故對(duì)RA患者進(jìn)行ANA和ANA譜聯(lián)合檢查，無(wú)特異性和敏感性指標(biāo)[5]。各種自身免疫性疾病患者的SSA與RO-52同時(shí)陽(yáng)性的例數(shù)較多，可能是由于抗SSA抗體陽(yáng)性的血清不僅含有抗天然的SSA抗體，還可能含有抗RO-52抗體。此外，ANA譜中SSA的各種組合在SS患者和其他自身免疫性疾病患者中的陽(yáng)性率不同，SS患者的ANA譜中各組合較同組合的其他自身免疫性疾病患者陽(yáng)性率都高，例如SSA/ SSB/RO-52在SS患者的陽(yáng)性率為34.7%，但在其他自身免疫性疾病的陽(yáng)性率低，而RO-52在SS患者、SLE患者和MCTD患者的陽(yáng)性率相差不大。與單項(xiàng)的ANA譜相比，ANA譜組合檢查陽(yáng)性患SS的比例增高，特異度增高[6]。

綜上所述，通過(guò)對(duì)ANA、SSA等3種自身抗體譜進(jìn)行ANA+SSA/SSB或ANA+SSB/RO-52及ANA+SSA/SSB/RO-52聯(lián)合檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測(cè)可提高對(duì)SS診斷的靈敏度和特異性[6]。但還需借鑒臨床其他檢查綜合診斷。總之，臨床上檢測(cè)SSA抗體具有必要性,聯(lián)合檢測(cè)SSA、SSB及RO-52抗體可以提高SS診斷特異性，可避免只檢查單項(xiàng)所帶來(lái)的漏診或誤診。

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[3]張建實(shí).ANA、SSA、SSB檢測(cè)對(duì)臨床診斷干燥綜合癥的意義[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志，2009,9(9)：2094.

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Clinical significance of ANA,SSA,SSB,RO-52 in the diagnosis of Sjogren's syndrome

PENG Yong，TAN Liming，LI Hua，et al.Class 2 Grade 08,School of Public Health,Nanchang University,Nanchang 330006,China

Objective To explore the clinical significance of detecting the ANA,SSA,SSB and RO-52 autoantibodies in Sjogren's syndrome(SS)patients.Methods A total of 49 cases of SS patients,144 cases of non-SS patients and 40 cases of healthy control subjects were selected from inpatients and outpatients in the Second Affiliated Hospital of Nanchang University from May 2010 to May 2012.ANA was measured with indirect immunofluorescence method;SSA,SSB and RO-52 antibodies were detected by immunoblotting.Results①The positive rates of ANA,SSA,SSB,RO-52 in three groups were different,and the difference had statistical significance(P＜0.01).②The positive rates of ANA,SSB and RO-52 in SS group were different from that of SSA with RO-52 the difference is statistically significant(P＜0.05).Compared the difference of the positive rates,there was statistical significance except SSA and RO-52 in SLE group(P＜0.01).In MCTD group,the positive rates of SSA,SSB and RO-52 were different from that of SSA and SSB(P＜0.05),the difference had statistical significance.In RA group,the difference of ANA and RO-52-positive rate had statistical significance(P＜0.01),the difference of positive rate in remaining groups had not statistical significance(P＞0.05).③Comparing the positive rates of SSA/SSB and SSA/SSB/RO-52 in SS group,the difference had statistically significance(P＜0.05).Comparing the positive rates of SSA/RO-52 with those of the rest in the SLE group,the difference had statistical significance(P＜0.01).Comparing the positive rates of SSA/RO-52 with that of the rest in MCTD group,the difference had statistical significance(P＜0.05).④Detection of ANA in SS patients had high sensitivity,but poor specificity,Detection of SSA,SSB, RO-52 had slightly lower sensitivity but higher specificity.Conclusion Detection of ANA and SSA,SSB,RO-52 autoantibodies in SS patients plays an important role in the diagnosis and differential diagnosis of SS,which can improve the levels of diagnosis and treatment of SS.

Sjogren syndrome，SSA，SSB，RO-52，ANA

R442.8，R446.62

A

1674-1129(2013)03-0229-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.03.010

江西省衛(wèi)生廳科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(編號(hào)20071081)江西省教育廳科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(編號(hào)GJJ08133)江西省科技廳支撐項(xiàng)目(編號(hào)2007SBI3008)

彭勇，男，1990年生，南昌大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院08級(jí)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)。

譚立明,主任技師，碩士生導(dǎo)師。