原因不明復發性流產患者免疫治療前后血清中趨化因子水平變化

楊素娟，趙志明，郝桂敏，尹桂然

（1.河北醫科大學第二醫院生殖醫學科，河北石家莊050000；2.河北醫科大學第二醫院婦產科，河北石家莊050000）

·論 著·

原因不明復發性流產患者免疫治療前后血清中趨化因子水平變化

楊素娟1，趙志明1，郝桂敏1，尹桂然2

（1.河北醫科大學第二醫院生殖醫學科，河北石家莊050000；2.河北醫科大學第二醫院婦產科，河北石家莊050000）

目的研究主動免疫治療前后血清中單核細胞趨化蛋白1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）、正常T細胞活化后所表達和分泌的調節蛋白（regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted，RANTES）和白細胞介素8（interlukin-8，IL-8）水平變化，探討其在原因不明復發性流產（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）發病中的作用。方法2011年4月—2012年5月在河北醫科大學第二醫院生殖醫學科就診的URSA患者40例為研究組，正常非孕及正常妊娠組各20例為對照組。采用酶聯免疫吸附法檢測免疫治療前后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平。結果URSA患者治療前血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平均明顯低于正常非孕組與正常妊娠組，差異有統計學意義（P＜0.05），而正常非孕組與正常妊娠組之間差異無統計學意義（P＞0.05）。URSA患者免疫治療后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平明顯上升，與免疫治療前相比差異有統計學意義（P＜0.05）。40例URSA患者根據免疫治療后是否持續妊娠分為持續妊娠組27例和非持續妊娠組13例。持續妊娠組免疫治療后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平增長率明顯高于非持續妊娠組，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論主動免疫治療可提高URSA患者血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平，在持續妊娠組升高明顯，尤其是RANTES具有封閉抗體效應，更有利于妊娠的持續發展。

流產，習慣性；趨化因子類；免疫；治療

復發性流產（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指連續發生2次或2次以上的自然流產。其發病原因復雜多樣，有遺傳、內分泌、解剖、感染等方面的原因，總體的發生率約為5％。原因不明復發性流產（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）是指患者發病原因不明，占40％～60％［1］。研究發現，URSA與同種免疫有關，學者們在該領域做了許多研究，但確切的機制尚待闡明。為探討趨化因子導致流產的可能機制，本研究報告40例URSA患者免疫治療前后的血清中正常T細胞活化后所表達和分泌的調節蛋白（regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted，RANTES）、白細胞介素8（interleukin-8，IL-8）和單核細胞趨化蛋白1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）水平的變化。

1 資料與方法

1.1 研究對象：URSA組為2011年4月—2012年5月在河北醫科大學第二醫院就診的URSA患者40例，年齡23～35歲，平均26.9歲。自然流產均≥2次，排除染色體、解剖、內分泌異常，無生殖道感染，男方精子無異常，也無自身免疫性疾病。所有病例均接受主動免疫治療［1-2］。根據妊娠結局，即是否持續妊娠，分為持續妊娠組（27例）和非持續妊娠組（13例）。正常非孕組為20例同期門診要求放置宮

內節育器婦女，年齡23～36歲，平均27.6歲。既往均有妊娠史，但無自然流產、死胎或死產史等。正常妊娠組為20例同期門診因孕40～49d要求人工流產的正常妊娠婦女，年齡22～34歲，平均27.9歲，既往無不良孕育史及上述疾病史，人工流產前無流產先兆。

1.2 方法：抽取研究對象空腹肘靜脈血3mL，置無菌試管室溫下待其自然凝固，2 000r/min離心10min，分離血清后置-70℃冰箱待測。采用酶聯免疫吸附法檢測血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平。測定過程中嚴格按試劑盒（RB美國）說明書操作，且為一次檢測，以減少批間誤差和操作誤差。

1.3 統計學方法：應用SPSS13.0統計軟件進行數據處理，計量資料以±s表示，分別采用方差分析和t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 URSA患者主動免疫治療前與正常非孕組、正常妊娠組血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平的比較：URSA患者主動免疫治療前血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平明顯低于正常非孕組和正常妊娠組，差異有統計學意義（P＜0.05），而正常非孕組與正常妊娠組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 URSA患者主動免疫治療前后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平的比較：URSA患者主動免疫治療后血清中3種趨化因子水平均明顯上升，與治療前比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表1 免疫治療前血清中3種趨化因子濃度比較Table 1 The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in serum before immunotherapy（±s，ng/L）

表1 免疫治療前血清中3種趨化因子濃度比較Table 1 The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in serum before immunotherapy（±s，ng/L）

*P＜0.05 vs URSA group by q testURSA：unexplained recurrent spontaneous abortion；MCP-1：monocyte chemotactic protein-1；RANTES：regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted；IL-8：interleukin-8

MCP-1 RANTES IL-8 URSA 40 130.771±133.351 228.379±187.936 351 Groups n .927±274.142 Non-pregnant 20 285.888±224.458*534.138±341.035*566.220±374.232*Pregnancy 20 232.418±183.086*416.043±408.000*539.745±340.786*

表2 URSA患者免疫治療前后血清中3種趨化因子水平比較Table 2 The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in URSA patients before and after immunotherapy（n=40，±s，ng/L）

表2 URSA患者免疫治療前后血清中3種趨化因子水平比較Table 2 The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in URSA patients before and after immunotherapy（n=40，±s，ng/L）

MCP-1：monocyte chemotactic protein-1；RANTES：regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted；IL-8：interleukin-8

Time MCP-1 RANTES IL-8 Before immunotherapy 130.771±133.351 228.379±187.936 351.927±274.142 After immunotherapy 287.276±199.793 425.429±270.616 525.107±269.259 t＜0.05＜0.05＜0.05 4.121 3.782 2.850 P

2.3 持續妊娠組與非持續妊娠組主動免疫治療后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平增長率的比較：持續妊娠組主動免疫治療后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平增長率均較非持續妊娠組明顯提高，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 持續妊娠組與非持續妊娠組主動免疫治療后血清中3種趨化因子增長率的比較Table 3 Com parison of grow th rates of MCP-1，RANTES，IL-8 levels after immunotherapy between ongoing pregnancy group and non ongoing pregnant group（％）

3 討 論

妊娠成功對于生殖免疫來說，是一種半同種移植。妊娠失敗、流產的常見原因有染色體、解剖、內分泌異常等，此外還存在同種免疫型復發性流產，是一種同種免疫現象，屬于免疫排斥［3］。流行病學調查發現，1次流產后再次流產的發生率為17％，2次流產后再次流產率為24％，3次流產后再次流產率為40％～50％［3］。對于胚胎染色體檢查正常，而找不到病因的流產患者來說，隨著流產次數的增加，其發生的比例亦增加［4］。

3.1 正常妊娠與趨化因子的關系：母體免疫在正常妊娠時，可能傾向輔助T淋巴細胞（Th）2型免疫應答而偏離Th1型細胞免疫，即向著Th2方向傾斜，以體液免疫為主。細胞滋養層細胞在各期胎盤階段均可分泌Th1型細胞因子IL-8、IL-10。IL-8參與胚胎植入的調控，促進宮頸成熟，還可加重宮內感染。

RANTES與相應的受體結合后主要是特異性趨化T細胞、單核細胞、嗜酸性細胞，并能殺傷T細胞的活性，還參與宮頸成熟與分娩發動機制。最近研究［5］發現，RANTES水平低下時可導致流產，其原理是胎兒被當作異物被母體免疫系統排斥，因而RANTES具有封閉抗體效應，對成功妊娠起著重要作用。

在母體激素分泌調控下，MCP-1可與其受體相結合，在胚胎植入子宮內膜的整個過程中起著重要的作用［6］。妊娠早期滋養葉細胞即產生少量的MCP-1，妊娠中、晚期則產生較多的MCP-1，參與宮頸成熟與分娩發動機制。

本研究在免疫治療前檢測URSA組、正常非孕組、正常妊娠組患者血清中的RANTES、IL-8、MCP-1濃度。結果表明，URSA組3種趨化因子濃度明顯低于正常非孕組和正常妊娠組，而正常非孕組與正常妊娠組比較差異無統計學意義，說明3種趨化因子濃度對胚胎植入的調控可能起著重要作用。

3.2 URSA與趨化因子的關系：鑒于上述血清中3種趨化因子在正常妊娠全過程中起著關鍵的作用。倘若趨化因子的濃度發生變化，將對胚胎植入產生不利影響而致流產。研究［7］表明，與對照組比較，URSA組Th1型細胞因子水平升高，而Th2型細胞因子水平降低；URSA患者血清中白細胞介素10水平明顯降低，打破了Th1型與Th2型細胞因子的平衡關系，不能抑制Th1型細胞因子的產生，從而向Th1型細胞因子方向傾斜，最終導致流產。

若患者對混合淋巴細胞反應（mixed leukocytes reaction，MLR）反應過強，說明母體對胎兒產生排斥

反應也強，而RANTES發揮封閉抗體的效應則正是通過抑制母體與配體間的MLR。如若RANTES水平低下，封閉抗體缺失或不足最終容易導致流產發生［7］。MCP-1對單核細胞有較強的趨化能力，雖然對自然殺傷（natural killer，NK）不具有趨化能力，但當不需要穿過內皮細胞時也可激活NK細胞的殺傷功能。

本研究結果表明，血清中3種趨化因子URSA組均低于正常非孕組、正常妊娠組，說明3種趨化因子，尤其是RANTES濃度的改變對URSA患者起著重要作用。

3.3 免疫治療與趨化因子的關系：URSA與免疫因素密切相關，倘要母體血清中缺乏抑制MLR的封閉因子，則母體可能會對攜帶父系抗原的胎兒產生排斥反應導致流產。3種趨化因子中能夠介導母體耐受主要是RANTES。研究［8］表明，URSA組與正常妊娠組比較，血清中MLR偏低，且其反應水平隨妊娠次數增加而升高。體外MLR實驗顯示RANTES能抑制母體對父系抗原的排斥反應，從而說明RANTES是通過免疫抑制來實現對胎兒保護作用的。增加孕酮的水平，可使子宮內膜中T細胞表達RANTES水平亦增高［9］，說明T細胞產生RANTES能力的下降，可能與URSA的發生有關。

研究證實，血清中RANTES水平明顯低的URSA患者，在接受配偶的淋巴細胞主動免疫治療后，MLR反應強度較前顯著下降，RANTES水平較前顯著升高，且有80％再次妊娠成功［10］。

本研究結果顯示，主動免疫治療后血清中3種趨化因子均上升，尤其是持續妊娠組比率顯著上升，表明主動免疫治療方法對URSA患者的持續妊娠的維持是可行的。

［1］楊素娟，江靜，郝桂敏，等.主動免疫治療原因不明習慣性流產的臨床研究［J］.實用婦產科雜志，2007，23（5）：300-302.

［2］楊素娟，尹桂然，劉慈，等.原因不明復發性流產的免疫治療［J］.河北醫藥，2010，32（24）：3486-3487.

［3］王文娟，邱麗華，林其德，等.連續2次原因不明自然流產免疫治療必要性的探討［J］.中國實用婦科與產科雜志，2010，26（2）：122-124.

［4］SUGIURA M，OZAKI Y，KATANO K.Diagnosis and treatment methods in recurrent miscarriage［J］.Nihon Rinsho，2010，68（12）：2351-2356.

［5］FRACCAROLI L，ALFIERI J，LAROCCA L，et al.A potential tolerogenic immunemechanism in a trophoblast cell line through the activation of chemokine-induced T cell death and regulatory T cellmodulation［J］.Hum Reprod，2009，24（1）：166-175.

［6］KIM NY，CHO HJ，KIM HY，et al.Thyroid autoimmunity and its association with cellular and humoral immunity in women with reproductive failures［J］.Am JReprod Immunol，2011，65（1）：78-87.

［7］司馬玲，蔡霞.反復流產免疫因素的研究進展［J］.中國優生與遺傳雜志，2011，19（6）：7-10，24.

［8］劉秀芝，李偉毅.趨化因子與生殖免疫［J］.生殖與避孕，2009，29（3）：172-175.

［9］RAMHORSTRE，PATEL R，CORIGLIANO A，et al.Induction of maternal tolerance to fetal alloantigens by RANTES production［J］.Am JReprod Immunol，2006，56（5/6）：302-311.

［10］LIN QD，QIU LH.Pathogenesis，diagnosis，and treatment of recurrent spontaneous abortion with immune type［J］.Front Med China，2010，4（3）：275-279.

（本文編輯：劉斯靜）

·病例報告·

LEVELSOF SERUM CHEMOKINES BEFORE AND AFTER INITIATIVE IMMUNOTHERAPY IN UNEXPLAINED RECURRENT SPONTANEOUS ABORTIONWOMEN

YANG Sujuan1，ZHAO Zhiming1，HAO Guimin1，YIN Guiran2
（1.Center of Reproductive Medicine，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，
China；2.Department of Gynaecology and Obstetrics，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China）

Objective The serum levels of three chemokines monocyte chemotactic protein-1（MCP-1），regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted（RANTES），interleukin-8（IL-8）before and after active immunotherapy were studied for the effect in the unexplained recurrent spontaneous abortion（URSA）pathogenesis.Methods Forty URSA patients in the hospital from April 2011 to May 2012 were enrolled in study group，with 20 normal non-pregnant，20 normal pregnancy women were included in control groups.The levels of MCP-1，RANTES and IL-8 were determined using enzyme linked immunosorbent assay.Results The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 of URSA patients before treatmentwere significantly lower than those of normal non-pregnant group and normal pregnancy group，the differences were statistically significant（all P＜0.05），while the differences between the normal non-pregnant group and the normal pregnancy group had no statistical significance（P＞0.05）.

abortion，habitual；chemotactic factors；immunity；therapy

R711.6

A

1007-3205（2013）06-0649-04

2013-04-01；

2013-05-16

2012年河北省醫學科學研究重點課題計劃（20120305）

楊素娟（1971-），女，河北肅寧人，河北醫科大學第二醫院主管檢驗師，醫學學士，從事生殖醫學研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.06.011

The levels ofMCP-1，RANTES，IL-8 in serum were significantly increased in URSA patients after immune treatment compared with before treatment，the differences were statistically significant（P＜0.05）. According to whether to continue pregnancy after immunotherapy，40 cases of URSA patientswere divided into the ongoing pregnancy group with 27 cases，and the non ongoing pregnant group with 13 cases.The growth rates of MCP-1，RANTES，IL-8 levels after treatment in the ongoing pregnancy group were higher than those of the non ongoing pregnant group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.ConclusionThe levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in patients with URSA can be improved after active immunotherapy，especially in the ongoing pregnancy group.RANTESwith a blocking antibody effect，may bemore conducive to the sustainable development of pregnancy.