宮頸脫落細胞RASSF1A基因甲基化在宮頸癌中的臨床意義

李 琦，胡昌華，張 婧（.武漢市漢陽醫院婦產科，湖北武漢 430050；2.襄陽市中心醫院婦產科，湖北襄陽 4402）

RAS相關區域家族1A（RASSF1A）可增強絲氨酸－蘇氨酸激酶MstI活化，抑制Cyclin D1積聚而促進細胞死亡受體信號傳導通路，與腫瘤發生、發展及轉歸密切相關[1－2]。RASSF1A基因在宮頸癌組織中呈高甲基化狀態，可作為宮頸癌分子診斷和預后評估的標志物[3－4]，但僅可用于術后組織標本檢測，臨床應用受限。本研究采用甲基化特異性聚合酶鏈反應（MSP）檢測宮頸癌患者和健康女性宮頸脫落細胞RASSF1A基因啟動子甲基化狀態，研究宮頸脫落細胞RASSF1A基因甲基化在宮頸癌中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年1月至2012年6月經手術治療的75例初治宮頸癌患者，年齡35～80歲，平均50.5歲，包括鱗狀細胞癌56例、腺癌12例、腺鱗癌7例，根據2009年國際婦產科聯盟（Figo）宮頸癌分期標準，分為Ⅰ期15例、Ⅱ期35例、Ⅲ期17例、Ⅳ期8例。同期體健健康女性75例納入對照組，年齡34～80歲，平均50.4歲。年齡分布組間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法 由臨床醫生采集宮頸脫落細胞標本，以DNA提取試劑盒（北京天根）提取細胞DNA，經甲基化修飾試劑盒（北京天漠）處理后，進行MSP檢測。采用Methyl Primer Express V1.0設計MSP引物，引序列見表1，由大連寶生物工程有限公司合成。MSP反應體系為25μL，反應條件為95℃10min，95℃1min、65℃30s、72℃30s循環35次，72℃10min，擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳后檢測。

表1 RASSF1A基因MSP引物序列（5′→3′）

1.3 統計學處理 采用SPSS11.0軟件進行數據分析。計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher精確檢驗法；顯著性檢驗水準為α＝0.05，P＜0.05為比較差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 RASSF1A基因啟動子甲基化檢測結果 宮頸癌患者宮頸脫落細胞RASSF1A基因啟動子甲基化率為64.0%（48／75），健康女性為甲基化率為1.3%（1／75），宮頸癌患者甲基化率高于健康女性（P＜0.05）。

2.2 RASSF1A基因啟動子甲基化與病理因素的關系 不同年齡和病理類型宮頸癌患者RASSF1A基因啟動子甲基化率比較差異無統計學意義（P＞0.05），但不同組織學分級、腫瘤最大徑、淋巴結轉移、器官轉移、Figo分期患者比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 宮頸癌患者宮頸脫落細胞RASSF1A基因啟動子甲基化與病理因素的關系

3 討 論

RASSF1A基因位于3號染色體短臂中的抑癌基因，可抑制Cyclin D1積聚而促進細胞死亡受體信號傳導通路，與腫瘤發生、發展及轉歸密切相關[5]。RASSF1A基因在結腸癌、胃癌等消化系統腫瘤中呈高甲基化狀態，甲基化導致基因發生表觀遺傳學改變，通過阻遏轉錄因子與啟動子結合，抑制或下調RASSF1A表達水平，使其失去對細胞周期的調控作用，最終導致細胞癌變[6－8]。崔華英等[3]研究結果表明，宮頸癌組織RASSF1A基因啟動子甲基化率高達73.8%，認為RASSF1A基因啟動子甲基化可作為宮頸癌的分子診斷和預后評估的生物標志物。本研究中，宮頸癌患者宮頸脫落細胞RASSF1A基因啟動子甲基化率為64.0%，高于健康女性，與宮頸癌組織檢測結果相比，甲基化率稍低，但宮頸脫落細胞檢測可在術前進行，使其具有更好的預測性。

甲基化是表觀遺傳學最重要的轉錄前調控機制，可引起染色體及DNA空間構象發生改變，主動或被動阻遏轉錄因子結合到轉錄起始點而調控基因表達[9]?；騿幼蛹谆c腫瘤發生、病情進展及預后緊密相關，可作為腫瘤的基因水平生物學標志物，比蛋白質類腫瘤標志物具有更高的靈敏度及特異性[10]。本研究中，宮頸癌患者宮頸脫落細胞RASSF1A基因啟動子甲基化率在不同年齡和病理類型患者間的差異無統計學差異（P＞0.05），但在不同組織學分級、腫瘤最大徑、淋巴結轉移、器官轉移、Figo分期患者間的差異具有統計學意義（P＜0.05），組織學分級高、腫瘤最大徑大、有淋巴結轉移及器官轉移、Figo分期晚的患者宮頸脫落細胞RASSF1A基因啟動子甲基化率高于組織學分級低、腫瘤最大徑小、無淋巴結轉移及器官轉移、Figo分期早的患者，說明與宮頸癌組織類似，宮頸脫落細胞RASSF1A基因啟動子甲基化與宮頸癌患者病情及預后密切相關，可作為分子診斷及病情預后評估的標志物。

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