短暫性腦缺血發作患者血小板活性檢查臨床意義

段偉 張忠波 劉瑩瑩 張立鯤

短暫性腦缺血發作(TIA)是缺血性腦血管病的一種常見類型，其神經功能損害是短暫的，但TIA后卒中的發生率將明顯增加［1］。血小板與血管內皮的相互作用一致被認為是缺血性腦血管病重要因素，其中活化血小板起著關鍵作用［2］。為了探討TIA患者血小板活性的變化情況及臨床意義，我們采用流式細胞術對30例TIA患者的CD62P和CD63的陽性表達率進行了檢測分析，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 我院神經內科住院的TIA患者30例，男18例，女12例。年齡42～78歲(平均59.2歲)，診斷符合短暫性腦缺血發作的中國專家共識更新版(2011年)的診斷標準［3］，考慮到血糖、血壓對CD63表達率的影響，故全部病例排除合并有高血壓病、糖尿病。正常對照組選擇性別和年齡與病例組相似的無高血壓病、糖尿病及腦卒中病史的健康人30例。男15例，女14例，年齡39～79歲(平均58.4歲)。

1.2 試劑和儀器 美國BD亞洲公司生產的流式細胞儀BD FACS Aria和上海碧迪醫療器械有限公司提供的美國進口分裝試劑。

1.3 方法 所有受試者采血前2周未服用或停用抗血小板制劑及抗凝血酶制劑。常規采靜脈血5 ml，置于含有1/10體積0.109 mol/L枸櫞酸鈉抗凝劑管中，3000 r/min離心10 min，收集上層血漿進行檢測。具體實驗操作和結果判定均嚴格按照試劑和儀器的說明書進行。

1.4 統計學方法 采用SPSS 12.0統計分析軟件，所得數據用±s表示，組間比較采用非配對t檢驗。

2 結果

TIA組發作期、緩解期和對照組的CD62P、CD63的表達情況見表1。經統計學處理，TIA患者在發作期和緩解期的CD62P、CD63陽性表達率均高于正常對照組，差異均具有顯著性(P＜0.01)。

表1 TIA組與對照組CD62P、CD63表達的比較(±s)

CD62P CD63 TIA組發作期組別 例數30 8.22±1.04 8.04±1.08 TIA組緩解期 30 7.96±0.91 8.01±1.22正常對照組30 2.01±0.43 0.88±0.26

3 討論

TIA是臨床常見病，可導致缺血區可行性區域神經功能障礙，是腦梗死的前兆。目前認為，TIA發作的病因主要包括腦動脈粥樣硬化的基礎上發生微栓塞或血流動力學改變，是血管內皮細胞受損、血小板和白細胞被激活、凝血因子被活化、抗凝和纖溶系統功能減低以及血液黏度增高等一系列病理狀態。在血管狹窄、收縮，內皮下較遠暴露等條件存在時，血小板發生粘附并被激活，活化的血小板通過多種途徑，加速體內血栓的形成及凝固過程，同時通過血小板收縮擠出血清，使血凝塊變得更堅實。有研究表明，α顆粒膜糖蛋白(CD62P)、溶酶體顆粒膜糖蛋白(CD63)被認為是識別血小板活化分子標志物［4］。CD62P又稱P-選擇素(P-selectin)，是血小板膜α顆粒發生釋放反應的標記物，是血小板晚期活化程度的一個特征性指標。CD63為溶酶體整合膜糖蛋白，在正常血小板僅有極少的分子表達，在活化血小板膜和表面連接的小管系統膜上大量表達，也是血小板活化的一種標志［5］。血小板被激活后，α-顆粒膜上的CD62P很快與血小板質膜融合移至膜表面，而血小板內的溶酶體膜蛋白的CD63也隨血小板活化脫顆粒而表達于血小板膜表面。采用單克隆抗體能夠準確的標記檢測這兩個糖蛋白，因此，測定CD62P、CD63是直接客觀的檢測活化血小板的特異方法。流式細胞儀(FCM)能對流動液體中排成單列的細胞或顆粒進行逐個分析，測定細胞或顆粒的光散射和熒光情況，以獲得其大小，內部結構DNA，RNA，PRO，Ag等物理及化學特征，具有測量指標多、檢測速度快、對所需的細胞或顆粒可以進行分選等特點。由于FCM檢測能夠達到基因和分子水平，彌補了以往血小板膜上糖蛋白測定方法的缺陷和不足，通過特異光譜的測定分析，FCM可以提供血小板生理的細微變化，從而比較準確地反映出血小板表面膜活化依賴性改變、膜受體的缺陷及CD62P、CD63的表達率等。我們采用FCM對對30例TIA患者的發作期和緩解期的CD62P和CD63陽性表達率進行了檢測分析。結果表明，TIA組發作期和緩解期的CD62P的陽性表達率分別為(8.22±1.04)和(7.96±0.91)，CD63的陽性表達率分別為(8.04±1.08)和(8.01±1.22);對照組的CD62P和CD63的陽性表達率分別為(2.01±0.43)和(0.88±0.26)。經統計學處理，TIA患者在發作期和緩解期的CD62P、CD63陽性表達率均高于正常對照組，差異均具有統計學意義(P＜0.01)。

總之，TIA患者的血小板表面CD62P和CD63表達均增強，表明TIA患者的血小板活化程度異常增高，為臨床進行抗血小板治療提供了實驗依據。今后，我們還將研究TIA患者經抗血小板治療后的CD62P、CD63陽性表達率的變化情況。

［1］ 李俊玉，畢齊.關于短暫性腦缺血發作的最新認識.中國卒中雜志，2012，7(1):36-39．

［2］ 段金海，哈斯朝魯，張生林.腦梗死患者血漿ICAM21、CD62P、CD63的動態變化及其臨床意義.臨床神經病學雜志，2005，18(4):260-262．

［3］ 短暫性腦缺血發作的中國專家共識組.短暫性腦缺血發作的中國專家共識更新版(2011年).中華內科雜志，2011，50(6):530-533．

［4］ 陳飛，徐運.腦小血管病的發病機制和臨床特點.國際腦血管病雜志，2011，19(8):620-624．

［5］ 劉運涌，楚蘭.頻發頸動脈系統短暫性腦缺血發作患者顱內外血管檢查及血小板活化分析.中華臨床醫師雜志(電子版)，2012，6(6):1643-1644．