216例金黃色葡萄球菌中紅霉素對克林霉素誘導耐藥檢測

胡麗娟 劉華山 陳淑娟

216例金黃色葡萄球菌中紅霉素對克林霉素誘導耐藥檢測

胡麗娟 劉華山 陳淑娟

目的 了解金黃色葡萄球菌(SA)對紅霉素和克林霉素的耐藥性, 檢測紅霉素對克林霉素誘導耐藥的發生率。 方法 采用美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)推薦的紙片擴散法, 用紅霉素和克林霉素雙紙片法(D-試驗)和VITEK 2 Compact AES分析紅霉素對克林霉素誘導耐藥表型。 結果 216株SA中有76株(MSSA22株, MRSA54株)呈紅霉素耐藥、克林霉素敏感, 其中29株D-試驗陽性(MSSA 8株, MRSA 21株),檢出率分別為36.4%、38.9%。結論 臨床微生物實驗室應加強對SA中克林霉素誘導耐藥的檢測, 以指導臨床醫生合理選用大環內酯類、林可酰胺類抗菌藥物。

金黃色葡萄球菌；紅霉素；克林霉素；誘導耐藥； D-試驗

金黃色葡萄球菌(SA)是引起醫院感染和社區感染的常見致病菌之一, 自1961年英國醫師Jerons首次臨床報告第一例耐甲氧西林SA(MRSA)感染患者以來, 其耐藥性逐年增加, 已經成為醫院感染的主要致病菌。MRSA往往又同時對B-內酰胺酶類抑制劑復合抗生素及碳青酶烯類耐藥。因此,臨床常使用大環內酯類(紅霉素)、林可酰胺類(克林霉素)、B類鏈陽霉素抗生素治療MRSA引起的感染。克林霉素由于其組織滲透性強等特點常用于皮膚和軟組織感染的治療, 也是青霉素和頭孢菌素過敏的常規替代藥品, 隨著這些藥物使用增多, 其耐藥性也增加。且紅霉素具有誘導克林霉素耐藥的作用, 使得克林霉素治療無效。通過VITEK 2 Compact高級專家系統(AES)進行檢測, 了解福建省莆田學院附屬醫院可誘導克林霉素耐藥的發生率。

1 資料與方法

1.1 菌株來源 2013年3月～2013年3月從本院臨床科室送檢的標本中分離SA共216株, 其中痰液142株、分泌物和膿液61株、尿液6株、血液3株, 其他4株。

1.2 鑒定及藥敏試驗 細菌鑒定采用法國生物梅里埃公司VITEK-2 Compact全自動分析系統進行鑒定到種, 藥敏卡選用AST-GP67測定, 該卡采用2個孔位檢測紅霉素誘導克林霉素耐藥；1個孔位是0.5 μg/ml克林霉素, 另一個孔位是(0.25 μg/ml克林霉素+0.5 μg/ml紅霉素)。D-試驗檢測采用美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)2009年版標準進行操作與判斷結果。

1.3 培養基及藥敏紙片 Mueller-Hinton瓊脂平板、哥倫比亞血瓊脂平板和巧克力色血瓊脂平板均購自鄭州安圖綠科生物工程有限公司, 藥物紙片紅霉素(15 μg/片)和克林霉素(2 μg/片)均購自英國Oxoid公司。

1.4 質控菌株 金黃色葡萄球菌ATCC25923購自福建省臨床檢驗中心。

2 結果

2.1 MRSA檢出率 216株SA中MSSA 62株(28.7%), MRSA 154株(71.3%)。

2.2 SA對紅霉素和克林霉素藥敏結果 216株SA中, 紅霉素耐藥而克林霉素敏感76株(35.2%), 紅霉素敏感而克林霉素耐藥2株(0.9%), 兩者同時耐藥114株(52.8%), 兩者同時敏感24株(11.1%)。

2.3 D-試驗結果 對76株紅霉素耐藥而克林霉素敏感的SA進行D-試驗, 其中22株MSSA, D-試驗陽性8株, 發生率為36.4%, 54株MRSA, D-試驗陽性21株, 發生率為38.9%。將以上D-試驗陽性的SA經VITEK-2 Compact AES檢測顯示耐藥表型均為MLSB INDUCIBLE, 誘導克林霉素耐藥陽性, 與CLSI紙片確證D-試驗法比較, 靈敏度為100%。

3 討論

在SA中, 獲得性對大環內酯類和林可霉素耐藥很普遍。對大環內酯類耐藥機制有能量依賴的主動外排和核糖體靶位改變2種［1］, 前者由msrA基因編碼外排蛋白導致對大環內酯類和B型鏈陽霉素耐藥, 對克林霉素敏感。后者由msr基因編碼, 引起對具有相同靶位的大環內酯類、林可霉素類和B型鏈陽霉素同時耐藥(MLSB耐藥)。耐藥可分為結構型(cMLS)和誘導型(iMLS)。cMLS型耐藥的表型為對紅霉素和克林霉素均耐藥, 常規的體外藥敏試驗均能測出。iMLS型耐藥的表型為對紅霉素耐藥而克林霉素敏感, 用常規藥敏試驗不能測出, 為此, CLIS/NCCLS于2004年推薦用D-試驗作為紅霉素誘導克林霉素耐藥的檢測。以免造成臨床治療失敗。

以上D-試驗結果顯示, MSSA 和MRSA的誘導型克林霉素耐藥的發生率差異不大, 分別為36.4%和38.9%, 表明本院SA誘導耐藥率較低, 與楊燕［2］報道相近, 但比黎文成［3］報道的低, 這可能與不同地區SA的紅霉素耐藥基因構成的差異及大環內酯類藥物使用多少有關。對于紅霉素耐藥克林霉素敏感的SA, 本院微生物室多采用VITEK-2 Compact 通過AES中的藥敏綜合分析程序直接篩選紅霉素誘導克林霉素耐藥表型。儀器綜合分析檢測結果及AES后報告最終結果。與CLSI紙片確證D-試驗法比較, 靈敏度為100%。為此可為臨床及時提供準確可靠的結果, 指導醫生更合理地使用抗生素。

［1］ Leclercq R.Mechanisms of resistance to macrolides and lincosamides: nature of the resistance elements and their clinical implications.Clin Infect Dis, 2002,34(4):482-492.

［2］ 楊燕,孫長貴,曾賢銘,等.耐紅霉素葡萄球菌對克林霉素誘導型耐藥的檢測.國際檢驗醫學雜志, 2007,17(2):121-124.

［3］ 黎文成,李勰璘,付玉梅,等.D-試驗在葡萄球菌對克林霉素誘導型耐藥的檢測.廣州醫學院學報, 2008,36(1):41-42.

Detection of erythromycin-induced resistance to clindamycin among 216 strains of staphylococcus aureus

HU Li-Juan, LIU Hua-Shan, CHEN Shu-Juan.Department of Laboratory, Affiliated Hospital of Putian University, Putian 351100, China

Objective To investigate the resistance of staphylococcus aureus (SA) to erythromycin and clindamycin, and detect the incidence of erythromycin-induced resistance to clindamycin.Methods Disk diffusion susceptibility method was performed for erythrom ycin and clindamycin according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).The inducible resistance phenotype was analyzed by clindamycin and erythyomycin double-disk diffusion method (D test) and VITEK 2 Compact AES.Results Analyzing the susceptibility of 216 SA strains, 76 strains (22 strains of MSSA, 54 strains of MRSA) were resistant to erythromycin but sensitive to clindamycin.29 of the 76 strains were positive in D- test (8 strains of MSSA, 21 strains of MRSA); the positive rates were 36.4% and 38.9% respectively.Conclusion The occurrence of induced resistance to clindamycin is considerably high.It suggested that D-test should be routinely performed in erythromycin-resistant but clindamycin-sensitive staphylococcus in microbiological laboratories.The report of inducible clindam ycin resistance is significant evidence to guide clinical physicians to use antibiotic correctly.

Staphylococcus aureus；Erythromycin；Clindamycin； Inducible resistance； D- test

351100 福建省莆田學院附屬醫院檢驗科(胡麗娟陳淑娟)；福建省莆田市城廂區醫院(劉華山)