均勻設計探討水溶性氮酮對復方水楊酸酊透皮吸收的作用

藍芬

均勻設計探討水溶性氮酮對復方水楊酸酊透皮吸收的作用

藍芬

本實驗采用簡單小室裝置, 以離體大白鼠皮膚為透皮屏障, 用生理鹽水為接受液, 研究了不同濃度的水溶性氮酮對復方水楊酸酊透皮吸收的影響, 并且應用均勻設計法對可能影響水溶性氮酮對復方水楊酸酊透皮吸收促進作用的二個因素,在6個水平上進行試驗探討,并對試驗結果進行重復,試驗數據的二次多項式逐步回歸分析,求得回歸方程, 同時應用微積分求得極值, 從而獲得水溶性氮酮對復方水楊酸酊透皮吸收促進作用的最佳濃度為0.64%。

均勻設計；復方水楊酸酊；水楊酸；水溶性氮酮；透皮吸收

復方水楊酸酊是廣東省廣州市第一人民醫院一種常用的外用制劑, 為了提高臨床治療效果, 作者應用均勻設計法探討水溶性氮酮對復方水楊酸酊透皮吸收的作用, 因此進行了試驗研究。

1 儀器

采用日本島津的UV-2201紫外分光光度計與南通科學儀器廠的858-2恒溫磁力攪拌器。

2 處方與原料

2.1 處方 薄荷腦20 g, 液化酚30 ml, 水楊酸20 g, 乙醇適量 全量1000 ml。

2.2 應用的原料有：薄荷腦(藥用級)、液化酚(藥用級)、水楊酸(藥用級)、乙醇(藥用級)、生理鹽水(廣東省廣州市第一人民醫院自制)、水溶性氮酮(中山市漠雨精細化工有限公司產品)。

3 實驗方法和結果

3.1 均勻試驗設計

3.1.1 因素水平表 此試驗中擬定2個因素:X1(時間): 2～12(h);X2(水溶性氮酮含量 ):0～8(%)。水溶性氮酮含量(%)只有5個水平,因此采用了擬水平法［1, 2］,即將其中一個水平重復使用, 見表1。

采用U6(64)表,根據使用表的規定選擇其中的1, 3列,組成U6(62)表,把X1, X2二個因素分別放入U6(62)表的六列上,將各因素的各水平填入,見3.1.2。按照試驗方案安排的條件進行試驗,每個試驗號的結果分別填入3.1.2的試驗結果內,見3.1.2。

表1 因素水平表

表2 均勻實驗方案及結果

表2 均勻實驗方案及結果

試驗號因素試驗結果(透皮吸收率)(%)試驗號因素試驗結果(透皮吸收率)(%) X1(h)X2(%)y1y2y3X1(h)X2(%)y1y2y3 1 2 36.737.817.8648510.3811.8111.86 2 4 82.032.553.15510014.4014.9815.54 111.1211.9812.17612313.9115.7316.41 3 6

3.1.2 U6(62) 均勻試驗方案及結果 見表2。

3.2 制備標準曲線

3.2.1 測定吸收光譜 取水楊酸準確配制成20 g/ml的生理鹽水溶液后, 以生理鹽水作空白, 在200～400 nm波長范圍內掃描, 可見水楊酸吸收光譜在296.2 nm處有最大吸收；同樣對薄荷腦、液化酚、水溶性氮酮分別準確配制成20 g/ml的生理鹽水溶液后, 在此波長處均無吸收；對鼠皮的空白透皮試驗,在此處吸收極小, 后兩者表明均對本試驗測定都無影響。

3.2.2 制備標準曲線方程 精密稱取0.1076 g水楊酸, 配制濃度為1.076 mg/ml的水楊酸標準液(置于100 ml容量瓶中,用生理鹽水溶解并至刻度)。之后,分別精密吸取標準液配成2.15、4.34、6.456、8.608、10.76、16.14及21.520( μg/ml)的溶液(置于100 ml的容量瓶中, 用生理鹽水稀釋至刻度), 在波長296.2 nm處測定吸收度(以生理鹽水為空白), 然后確定吸收度Y關于濃度X的回歸方程, 得標準回歸方程為：Y=0.0021+ 0.0279X, P＜0.001, 表明線性關系是很好的 (2.152 μg/ml≤X≤21.520 μg/ml范圍)。

3.2.3 制備供試液 不含水溶性氮酮的供試液：取復方水楊酸酊8.0 ml, 置于10 ml的容量瓶中, 加乙醇至10 ml(振搖)得；含8%水溶性氮酮的復方水楊酸酊供試液：取0.8 ml水溶性氮酮與8.0 ml復方水楊酸酊, 置于10 ml容量瓶中, 乙醇加至刻度(振搖)。其余3種濃度的供試液均照此法制得(有：1%、3%與5%)。

3.2.4 制備離體鼠皮 將大白鼠處死(必須是健康的), 去毛干凈后取腹部皮膚(同時除其脂肪), 分別用蒸餾水與生理鹽水沖洗干凈, 然后放入裝有生理鹽水容器中并放置于冰箱冷藏備用(使用時間不能超出3 d)。

3.2.5 試驗方法及裝置 此次試驗采用簡單小室裝置, 在（37±1）℃恒溫, 試驗應用的釋放池內徑為1.2 cm的玻璃管(兩端開口), 試驗用皮固定于釋放池的下端, 用皮剛接觸接受液面;接受池裝有40 ml生理鹽水(用一個50 ml的燒杯裝著), 連續攪拌速度約為270 rpm。然后吸取0.5 ml供試液于釋放池中, 分別根據每個試驗號的時間吸取接受液1.0 ml(精密的)(吸取多少接受液, 就補加多少生理鹽水；每個試驗號做三次；具體6個試驗號各在那個時間精密吸取接受液, 見3.1.2。)置10 ml容量瓶中, 以生理鹽水至刻度, 在296.2 nm處測定吸收度(以生理鹽水為空白), 所測得的吸收度計算水楊酸含量(通過標準曲線方程), 這里Y=Xi/Xo * 100%［Xo為水楊酸在釋放池中的含量;Xi為各試驗號接受池中水楊酸的量, Y為透皮吸收率(%)),計算透皮吸收率(%)(各次抽取樣損失的量就正后算入Xi內, 再求Y值)。各試驗號的透皮吸收百分率)見3.1.2。

4 數據處理

將3.1.2中的數據進行重復試驗數據的二次多項式逐步回歸分析。整個運算過程, 采用了SAS統計軟件包在微機上進行。所得回歸方程如下：Y=6.74086+0.81350X1+0.17354X2-0.13527X22(P＜0.01),同時, 運用微積分對以上的回歸方程求極值, 得最佳水溶性氮酮濃度為0.64%；回歸方程中X1系數為正值, 這說明隨著時間增長, 透皮吸收率也在增加, 即作用持久。

5 討論

5.1 含0.64%水溶性氮酮的復方水楊酸酊其透皮吸收為最好, 這說明并非水溶性氮酮的濃度越高, 對藥物的透皮作用越好, 而是在一個最佳的水溶性氮酮濃度。

5.2 從水溶性氮酮對復方水楊酸酊透皮吸收的試驗結果來看, 促透作用顯著、緩和且持久。

5.3 本實驗采用均勻設計法, 均勻設計法是一種很好的試驗設計方法, 它具有均勻分散, 試驗次數少等特點, 類似試驗一般要做30次測定；而均勻設計只做6次測定, 如果重復三次, 減少的次數就更多了, 從而可以看出均勻設計的優點。

［1］ 方開泰.均勻設計與均勻設計表.北京: 科學出版社, 1993:47-50.

［2］ 方開泰,馬長興.正交與均勻設計.北京: 科學出版社, 2001: 108- 109.

510180 廣東省廣州市第一人民醫院