實驗室常用梅毒螺旋體檢測方法及其優缺點

盧建初

（廣西忻城縣疾病預防控制中心，廣西 來賓 546200）

實驗室常用梅毒螺旋體檢測方法及其優缺點

盧建初

（廣西忻城縣疾病預防控制中心，廣西 來賓 546200）

梅毒螺旋體；檢測方法；優缺點

梅毒螺旋體（Treponema pallidum，TP）即蒼白密螺旋體的蒼白亞種（Treponema pallidum subspecies pallidum），是引起人類梅毒的病原體。在梅毒診斷中，由于抗體效價或方法特異性等原因使診斷結果常出現偏差，因此，高效的梅毒實驗室診斷已成為大勢所趨。本文對我國實驗室常用梅毒螺旋體檢測方法及其優缺點綜述如下。

1 梅毒螺旋體病原體檢測

1.1 暗視野顯微鏡檢查法

是最常用的螺旋體檢查方法，適用于對I期梅毒和II期梅毒早期的檢測。未檢出螺旋體不能排除梅毒的珍斷。陰性結果可能說明：螺旋體數量不足，即單次暗視野顯微鏡檢查陽性率＜50%；患者已接受抗生素或殺滅梅毒螺旋體的藥物治療；損害接近自然消退；損害不是梅毒所致。

1.2 鍍銀顯色法

與暗視野檢查法的臨床意義基本相同。利用梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染成棕黑色，背景呈現黃色的特性進行檢測，結果通過普通高倍顯微鏡觀察。鍍銀顯色法結果觀察梅毒螺旋體呈棕黑色，而背景呈淡棕色。

1.3 直接免疫熒光法

是目前國外采用較多的方法，其特異性與敏感性均優于暗視野顯微鏡檢查法。此法特異性高，也可用于口腔梅毒損害的檢查，但是敏感性較差。

由于梅毒螺旋體病原體檢測受取材及特殊顯微鏡限制，雖然直接涂片鏡檢簡便，但敏感性低而且標本要求較高[1]，故臨床應用較少。目前國內外實驗室診斷梅毒的主要方法為血清學試驗。

2 血清學試驗

梅毒血清學試驗主要包括非梅毒螺旋體抗原試驗和梅毒螺旋體抗原試驗。對潛伏梅毒血清學診斷尤為重要。

2.1 非梅毒螺旋體抗原血清試驗

原理基本相同：是以心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原檢查患者血清中的反應素，敏感性相似，對I期、II期梅毒有診斷價值，滴度隨療效逐漸下降。但敏感性和特異性較差，一般用于初篩試驗及療效觀察。目前常用的包括VDRL、RPR、TRUST、USR。

2.1.1 性病研究實驗室試驗（VDRL）：

硬下疳發生后1～2周，VDRL試驗出現陽性。I期梅毒只有2/3呈現陽性，多數II期梅毒者的滴度至少為1∶16，VDRL試驗假陽性滴度在1∶8以下。由于該試驗的試劑需現配現用，故國內實驗室很少采用。但VDRL是唯一可用于神經性梅毒診斷的血清學方法。

2.1.2 快速血漿反應素環狀卡片試驗（RPR）

在特制的紙片上進行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗體出現凝集，用肉眼可觀察結果。也可將標本倍比稀釋（1∶2、1∶4～1∶32）進行半定量試驗，對療效和判斷是否再感染有一定價值。該試驗結果容易判斷，肉眼即可觀察，血清不需滅活，也可用于檢測血漿，適于大量篩選試驗。RPR一般只作為初篩手段，不能單獨據其結果診斷梅毒感染，而應對患者進行全面檢查。

2.1.3 甲苯胺紅試驗（TRUST）

TRUST試驗同樣是檢測梅毒患者血清中存在著的反應素，即檢測的是心磷脂抗體[2]。其原理和方法與RPR相同。感染梅毒3-4周，TRUST結果呈陽性，可幫助臨床醫生了解患者的病情活動程度。但TRUST法只作為一項梅毒感染的篩選試驗[3]。

2.1.4 不加熱血清反應素試驗（USR）

USR試驗是一種改良的VDRL試驗方法，血清標本不需要加熱滅活，抗原不必每天配制，4-8℃冰箱可保存12個月，較為簡便。不能作為梅毒的確診檢查。

2.2 梅毒螺旋體抗原血清試驗

本試驗是以梅毒密螺旋體或非致病的密螺旋體為抗原，檢查患者血清中抗密螺旋體的特異性抗體。其特異性和敏感性均較高，適用于II期、III期、晚期潛伏以及作為梅毒確證試驗等。現常用的有FTAABS、TPHA、ELISA、TPPA、RT、WB和SYP等方法。

2.2.1 熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）

該試驗以完整形態的Nichol梅毒螺旋體作為抗原，空氣中干燥，丙酮固定，加上經吸收劑（用非致病性密螺旋體Reiter株提取制備而成）處理過的患者血清（去除非特異性蛋白，提高特異性），再加入熒光素一異硫氰酸熒光素（FITC）標記的抗人免疫球蛋白，與血清梅毒螺旋體抗體結合。是所有螺旋體試驗中最敏感的方法，特異性也很高，被認為是檢測梅毒的“金標準”。但該法不被實驗室作為首選方法。

2.2.2 梅毒螺旋體紅細胞凝集試驗（TPHA）

原理是將梅毒螺旋體Nichols株經超聲波碎后，得到可溶性抗原，致敏醛化、鞣化的羊或禽類紅細胞，可與人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗原結合，產生肉眼可觀察的凝集反應。通常作為梅毒螺旋體感染的特異性驗證試驗，是國內實驗室常用的梅毒螺旋體確證試驗。但該法對梅毒治療效果無判定價值。該法對I期梅毒的檢測陽性率不如FTA-ABS。

2.2.3 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA試驗是隨著近年梅毒螺旋體基因工程的研制成功而發展起來的一種血清學檢測方法，結果陽性說明正在或曾經感染過梅毒，而不能判斷梅毒的活動情況，故不能用于療效觀察、梅毒復發或再感染的診斷[1]。需注意的是ELISA法檢測時，如果血清中梅毒抗體濃度過高，會產生鉤狀效應[4]。

2.2.4 梅毒螺旋體抗體被動顆粒凝集試驗（TPPA）

TPPA是將純的梅毒螺旋體特異性抗原包被在凝膠顆粒上，當抗原和血清中抗體發生特異性反應時就會出現顆粒凝集現象，凝集的強度與抗體濃度成正相關。和ELISA一樣，TPPA檢測的是IgM和IgG抗體，結果陽性不能用于療效觀察。TPPA是目前公認的較常用的梅毒確證實驗[5]。目前國內最常用的梅毒血清學確證試驗是 TPPA，但仍然可出現生物學假陽性[6]。

2.2.5 梅毒螺旋體快速診斷試驗（TP-RT）

是采用雙抗原夾心免疫層析法或間接法免疫滲濾法，多采用膠體金進行標記，同時檢測IgG、IgM抗體（雙抗原夾心法）或單測IgM抗體（間接法）。其優點是簡便、快速，不需要特殊儀器。不足是敏感性和特異性尚有待進一步考查，價格較高。

2.2.6 梅毒螺旋體免疫印記試驗（WB）

該法是20世紀80年代發展起來的一種檢測技術，是通過電泳轉移硝酸纖維素膜抗原條帶上含有梅毒螺旋體的各種成分來確認是否有梅毒感染。敏感性高，特異性強。結果容易判斷，操作簡便。但成本太高。

2.2.7 梅毒螺旋體膠體金試驗（SYP）

SYP是新近發展起來的一種快速體外診斷技術，應用現代生物工程技術制備的高度純化的單克隆梅毒螺旋體的基因工程抗原，能夠高度選擇地找尋與之相結合的抗體的原理，因此具有快捷、簡便的特點（反應5～10min即可出結果），該法對梅毒初染階段和先天梅毒敏感性較低，但對其它階段患者血清具有很高的敏感性和特異性，從時間、經濟、準確度等方面來說是不錯的選擇[7]。

3 分子生物學技術（PCR法）

近年來分子生物學發展迅速，聚合酶鏈反應（PCR）技術廣泛應用于臨床，目前有四套擴增梅毒螺旋體DNA系統，擴增螺旋體DNA序列，使經選擇的螺旋體DNA拷貝數量增加，以提高診斷率。使用PCR技術直接檢測標本中的梅毒螺旋體的特異DNA片斷，對診斷困難或非典型的梅毒患者進行確診有很大的參考價值[1]。PCR法在I期梅毒的診斷中靈敏性高于血清學方法，但當前診斷梅毒的PCR仍存在引物的非特異性、對血清/全血、CSF等敏感性低等缺點。而且當皮損開始愈合、分泌物減少、血清學試驗陽性反應時，采用PCR方法就不合適。另外，PCR方法易受標本中的組織和細胞碎片等物質抑制，導致PCR假陰性結果。

4 存在的問題及研究方向

當前我國梅毒血清學診斷研究中急需解決的問題是：在全國各大小醫療機構，梅毒的篩查試驗和確證試驗不能相互替代，使得操作程序變得復雜。目前，我國實驗室常用的程序是：用酶法初篩，陰性則發陰性報告；酶法陽性則進一步同時用RPR/TRUST和TPPA進行復檢，TPPA陰性則發陰性報告，TPPA陽性則發陽性報告。隨著科技的飛速發展，對梅毒螺旋體診斷方法的進一步研究以及POCT（point of care testing）的推廣，研究人員仍在尋找全面、快速、準確、敏感而又廉價的檢測方法。各種方法都有獨特的優點和缺點，檢驗人員應從具體情況出發，因地制宜，發展和完善梅毒診斷方法，指導臨床及時治療梅毒患者，對控制梅毒的蔓延有重要意義。

[1]黃軍林,黃夏聲,黃育英,等.四種梅毒血清學檢驗方法臨床應用評價[J].中國衛生檢驗雜志,2012,22(8):1856-1857.

[2]曾 美 文.早 期 梅 毒 患 者 血 清 的 免 疫 學 變 化 [J].檢 驗 醫 學 與 臨床,2011,8(1):63-64.

[3]趙華,代渝,雷麗明.4種梅毒血清學試驗檢測方法的比較[J].中國皮膚性病學雜志.2006,20(4):229-230.

[4]鄧曉琴,楊茂,向艷玲,等.ELISA法梅毒檢測的鉤狀效應及其分析[J].中國輸血雜志,2006,19(3):220-221.

[5]祝新,吳志周,柯建良.四種梅毒血清學實驗檢測方法的比較[J].熱帶醫學雜志,2008,8(9):934.

[6]陳 紅 霞.瘤患 者與 老 年患 者 的TPPA假 陽 性 分析[J].江西醫學 檢驗,2007,25(3):288.

[7]王華,雷麗明,李代渝.梅毒螺旋體血清學檢測方法及應用[J].實用診斷與治療雜志,2006,20(9):660-661.

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