兩種方法分別測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量

盧彤宇

（吉林省人民醫(yī)院藥劑科，吉林 長春 130021）

兩種方法分別測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量

盧彤宇

（吉林省人民醫(yī)院藥劑科，吉林 長春 130021）

目的 比較兩種不同方法測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量。方法 采用 NaNO2-Al（NO）3，和差示分光光度法，均以蘆丁為對照品測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量。結果 采用 NaNO2-Al（NO）3 比色法及差示分光光度法測定的烏腺金絲桃中的總黃酮含量分別為 10.5% 及 8.4%。結論 以蘆丁為對照品，NaNO2-Al（NO）3 比色法測定的烏腺金絲桃總黃酮中的含量更高，可以作為含量測定的方法。

烏腺金絲桃；總黃酮；分光光度法

烏腺金絲桃[1-2]（Hypericum attenuatum Choisy）為藤黃科金絲桃屬植物，為民間常用中藥。具有止血、鎮(zhèn)痛、通乳等功效，近年來研究表明該植物含有十幾種黃酮及其苷類化合物，黃酮類化合物具有較好的藥理活性。為了開發(fā)利用烏腺金絲桃，了解藥材中總黃酮的含量，我們采用兩種不同的方法測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量。為烏腺金絲桃藥材的進一步開發(fā)利用打下基礎。總黃酮的測定方法有很多種，比色法是最常用的方法之一。比色法有NaNO2-Al（NO）3[3-4]、差示分光光度法和AlCl3比色法。其中以NaNO2-Al（NO）3最為常用，本實驗比較了上述2種方法來測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量，為烏腺金絲桃中成分測定提供依據。

1 儀器與試藥

紫外可見分光光度計752N（上海精密科學儀器有限公司）；電子天平BS124S（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；蘆丁對照品購于中國食品藥品檢定研究院（批號：100080-200707）。烏腺金絲桃藥材購于藥材公司 ，由長春中醫(yī)藥大學鑒定教研室鑒定。其他試劑均為分析純。

2 方 法

2.1 供試品的制備

取烏腺金絲桃藥材，粉碎，取藥材粉末約1 g，精密稱定，置于100mL量瓶中，加80mL50%乙醇，超聲提取20min，放冷，用50%乙醇補足至刻度，搖勻，即得。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取在105℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品適量，加50%乙醇制成每毫升含1mg 的對照品溶液。

2.3 NaNO2-Al（NO）3比色法

2.3.1 標準曲線

分別取蘆丁標準品溶液1、2、3、4、5mL，置于10 mL量瓶中，加入亞硝酸鈉試液0.3mL，搖勻，放置6min，加入10%硝酸鋁試液0.3mL，加入氫氧化鈉試液 3mL，加50%乙醇定容至刻度，在505nm處測定顯色后溶液的吸光度。以吸光度為縱座標，對照品溶液的濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方程為y=31.958x+0.393（R=0.9993）。結果表明， 蘆丁溶液濃度一定范圍內呈良好的線性關系。

2.3.2 樣品溶液中總黃酮含量的測定

取供試品溶液5mL，置于10mL量瓶中，按“2.3.1”項下操作，測定505nm處吸光度，計算烏腺金絲桃中總黃酮的含量。

2.4 差示分光光度法

2.4.1 標準曲線

分別精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5mL，各兩份，置10 mL容量瓶中，其中一份加入50%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為參比液。另一份加入2%ZrOCl2·8H2O乙醇溶液1.5 mL，再加50%乙醇稀釋至刻度。混勻，靜置1 h，在波長為420nm 處測定吸光度。以吸光度為縱座標，對照品溶液的濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方程為 y=31.057x+0.340，（R=0.9994）。結果表明，蘆丁溶液濃度一定范圍內呈良好的線性關系。

2.4.2 樣品溶液中總黃酮含量的測定

取供試品溶液5mL，置于10 mL量瓶中，按“2.4.1”項下操作，測定420nm處吸光度，計算烏腺金絲桃中總黃酮的含量。

3 結果與討論

3.1 兩種方法測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量

采用NaNO2-Al（NO）3比色法及差示分光光度法測定的烏腺金絲桃中的總黃酮含量分別為10.5%及8.4%。采用NaNO2-Al（NO）3比色法測定的黃酮含量更高，故對此方法在線性關系良好的基礎上進一步進行方法學考察。

3.2 NaNO2-Al（NO）3比色法的方法學考察

3.2.1 精密度

精密吸取對照品溶液5mL，置10mL容量瓶中，按“2.3.2”項下方法，在505nm 下連續(xù)5次測定吸光度，相對標準偏差（RSD%）為1.45%。表明儀器精密度良好。

3.2.2 穩(wěn)定性

精密吸取對照品溶液5mL，置10mL容量瓶中，按“2.3.2”項下方法，在10，20，30，59，60min 在505nm 下測定吸光度，考察其吸光度穩(wěn)定性。結果表明，供試品溶液在60min內穩(wěn)定性良好，吸光度的相對標準偏差（RSD%）為1.51%。

3.2.3 重復性

準確稱取同一批次烏腺金絲桃5份，按照“2.3.2”項下操作方法制備5份供試品溶液，精密吸取每份供試品溶液各5mL，置10mL 量瓶中，在505nm下測定吸光度，測得供試品溶液中總黃酮的平均含量為10.32%，相對標準偏差（RSD%）為1.87%。

3.2.4 回收率

精密稱取已知含量的烏腺金絲桃5份，每份0.5g，各加入5mL 對照品（濃度為：1.05 mg /mL），“2.3.2”項下方法制備5份加標樣品溶液，分別測定吸光度，計算回收率。平均回收率為99.32%，相對標準偏差（RSD%）為1.79%。結果表明該方法準確度良好。

4 結 論

本文采用2種常用的分光光度法對烏腺金絲桃中黃酮類化合物含量進行了測定，為進一步明確烏腺金絲桃中的總黃酮類化合物提供依據。

[1]劉春新,張利.金絲桃素的研究進展[J],廣東化工,2010,37(3):14-15.

[2]余 愛 農 ,馬 濟 美 .金 絲 桃 素 研 究 新 進 展 [J].湖 北 民 族 學 院 學報,2003,21(1):44-45.

[3]馬 陶 陶 ,張 群 林 ,李 俊.中 藥 總黃 酮 的 含 量 測 定 方 法 [J].安 徽 醫(yī)藥,2007,11(11):1030.

[4]何珺,顏仁梁,劉志剛.NaNO2-Al(NO)3-NaOH比色法測定總黃酮應用中的常見問題[J].今日藥學,2009,19(12):18.

R927.2

：B

：1671-8194（2013）10-0072-02