肌肉病理未見異常的肌無力患者肌肉組織myostatin基因mRNA表達

趙曉萍蒲傳強

（1 北京軍區總醫院神經內科，北京100700；2 解放軍總醫院神經內科，北京 100853）

肌肉病理未見異常的肌無力患者肌肉組織myostatin基因mRNA表達

趙曉萍1蒲傳強2

（1 北京軍區總醫院神經內科，北京100700；2 解放軍總醫院神經內科，北京 100853）

肌肉病理；肌無力；肌肉組織

病理檢查結果陽性是疾病診斷的金標準，正常成人肱二或股四頭肌肌纖維直徑 60～80μm，肌質均勻，肌核扁平，位于周邊，每根肌纖維橫斷面上肌核數不超過5個。I、IIA、IIB型肌纖維各占約1/3。常規病理檢查符合上述標準，結論通常是肌肉病理檢查未見異常。Myostatin屬于轉化生長因子-β（TGF-β）超家族的成員之一，是骨骼肌生長發育抑制因子（肌抑素）。由骨骼肌分泌，作用于衛星細胞，其基因突變或抑制其表達后動物（牛、兔、狗及人）骨骼肌異常發達。本研究的目的是探討酶組織化學染色病理結果未見異常的肌無力患者肌肉組織中Myostatin基因mRNA的表達情況。

1 對象與方法

1.1 對象

自覺肌肉無力，但體檢、肌酶譜及肌電圖檢查未見異常患者9例。年齡14～45歲，平均年齡25.3歲，病程3～48個月，平均病程11.8個月。其中，男性4例，年齡14～45歲，平均年齡27歲，病程6～48個月，平均18個月；女性5例，年齡18～27歲，平均年齡23歲；病程3～11個月，平均6個月。具體每例臨床特點如下，見表1。

1.2 方法

標本獲取：左側肱二頭肌開放式活檢，常規冰凍切片組織學檢查未見明顯異常。

Myostatin mRNA表達情況分析：應用RT-PCR方法，檢測肌肉組織中Myostatin mRNA表達，并以管家基因GAPDH mRNA表達水平為內參照，經凝膠電泳鑒定，圖像分析系統分析積分光密度值（A），計算表達指數（I）I myostatin = A myostatin/ A GAPDH。

2 結 果

灰度測定顯示各例肌肉組織中GAPDH 基因mRNA表達水平相近（灰度值739～788，年齡相關系數-0.1341）。9例患者中2例未見Myostatin mRNA表達（男女各1例），7例有表達。有表達者的表達指數I為0.16～1.15；平均表達指數為0.5655。男女分層后表達指數無明顯差別（0.425 vs0.678，P=0.4185）。表達指數與活檢時的年齡的相關系數為0.2961，與病程的相關系數為0.0399。男性年齡相關系數為0.6855，女性為0.2306；男性病程相關系數為0.2083，女性為0.5799。

3 討 論

血清肌酸激酶活性（CK）及肌電圖未見異常，臨床表現為肌肉無力的骨骼肌疾病包括輕型先天性肌病、代謝性肌病、神經肌肉接頭疾病及周圍神經病早期等，全身性疾病亦可表現為肢體無力及沉重感。肌肉病理未見異常的無力性疾病有神經肌肉接頭疾病、超微結構異常性肌病、未認識的疾病、全身性疾病，或情感障礙性疾病。

Maher AC等以兩組年齡在18～25歲（12例vs 12例、11例vs 13例）的健康志愿者為對象的研究表明，男女肌肉組織中Myostatin基因mRNA及蛋白含量均無明顯差別，均明顯低于內標基因及蛋白（β-actin）含量[1]。與其結果相似，本組男女患者的myostatin mRNA表達亦無明顯差異，不同的是其中2例未見表達。產生這一結果的原因可能系本組研究對象為肌無力患者，并非正常人群個體。雖然常規病理檢查顯示骨骼肌形成未見異常，但其超微結構及分子結構是否異常不得而知。動物實驗顯示熱休克蛋白基因剔除小鼠的myostatin基因mRNA表達水平明顯減少，其常規骨骼肌病理結構與野生型相似，但免疫組化染色證明其串珠素蛋白缺乏[2]。因此，此2例可能系超微結構異常的患者，需進一步深入研究觀察。

一項以股四頭肌為對象，針對年齡分別為：18～30歲（8例）和80～89歲（6例）的女性的研究顯示老年女性的myostatin基因mRNA表達水平高于年輕女性。本組對象的表達與年齡無明顯相關性，但按性別分層后，女性亦與年齡無相關性。可能與年齡跨度小，均為青壯年患者（14歲～45歲）有關。文獻中青年組表達量約為GAPDH的1.8倍，而老年組約為2.9倍，但本組中表達水平最高者為GAPDH的1.15倍。此差別不除外種族間差異所致，亦可能為所檢目標肌肉不同所致[3]。而男性的表達指數與年齡正相關（相關系數0.6855），與病程無明顯相關；女性患者的表達與病程成正相關（相關系數0.5799）。提示男性年齡增長或女性病和與myostatin基因表達水平增高的互為因果。

綜上所述，本研究結果顯示，常規組織病理學結構正常的肌肉組織中myostatin基因mRNA表達水平變異較大。國人的表達水平可能低于高加索人，其表達指數在男性可能與年齡相關，而在女性可能與病程相關。

[1] Maher AC,Fu MH,Isfort RJ,et al.Sex Differencesin G lobalm-RNAContentof HumanSkeletal Muscle[J].PLoS One,2009,4(7): e6335.

[2] Xu Z,Ichikawa N,Kosaki K,et al.Perlecan deficiency causes muscle hypertrophy,a decrease in myostatinexpression,and changes in muscle fiber composition[J].Matrix Biol,2010, 29(6):461-470.

[3] Williamson DL,Raue U,Slivka DR,et al. ResistanceExercise,Skeletal MuscleFOXO3A, and 85-Year-OldWomen[J].J Gerontol A Biol Sci Med Sci,2010,65A(4):335-343.

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1671-8194（2013）27-0151-02