淺談外體（exosome）在腫瘤免疫治療中的應用

王雅卓 郝淑維*

（河北醫科大學，河北 石家莊050000）

淺談外體（exosome）在腫瘤免疫治療中的應用

王雅卓 郝淑維*

（河北醫科大學，河北 石家莊050000）

腫瘤屬于現代社會中常見的多發病，指的是機體在多種致癌因素的作用下，人體局部組織的某個細胞基因發生變異，從而形成的異常病變，主要分為良性與惡性兩類。惡性腫瘤對于人體的危害是非常大的，甚至有可能威脅到患者的生命安全，且很難治愈，就目前來說，外體（exosome）在腫瘤的免疫治療中具有一定的應用價值，已經取得了較為明顯的免疫治療效果。外體富含有多種類型的蛋白成分，可以起到使機體開啟免疫應答系統的作用。本文就exosome在腫瘤免疫治療當中所具有的應用價值這一問題做了相關闡述，以供大家參考。

外體；exosome；腫瘤；免疫治療；應用

隨著近些年來人們生活及工作習慣的不斷改變，各種疾病的發生率也越來越高，其中較為常見且嚴重的一種疾病就是腫瘤，尤其是惡性腫瘤。惡性腫瘤會對人類健康產生重大威脅，當前來說，手術、放射治療與化學療法仍然是主要的腫瘤但是這些手段均沒有達到理想的治療效果，且副作用較大。而隨著分子生物學、免疫學在臨床應用的日趨廣泛，對腫瘤進行免疫治療逐漸變成了一種新型的腫瘤治療手段。外體（exosome）指的是一種大小約50～90nma的囊泡，該種特質可以由多種哺乳動物的細胞分泌而形成，可以選擇性的將某些細胞蛋白移出，在細胞之間傳遞很多種類型的分子，可以誘發與增強機體免疫反應，是較為有效的腫瘤免疫療法。

1 外體概念及組成

外體是起源于人體細胞內的晚期核內體，即多泡體。當人體細胞經吞而形成早期的核內體之后，其內會包含外源性抗原，早期的核內體囊膜突入、內陷，形成許多小囊泡，而且可以選擇性的接收人體細胞胞漿之內的脂內及蛋白質成分，進而形成晚期的核內體，也就是多泡體[1]。

在電鏡下，外體呈典型杯狀，是由雙層脂質膜所包圍的扁平型半球體，其直徑約為50～100nm，且這些特征和多泡體內部的小囊泡一致。外體所攜帶的來源細胞中的某些特定膜蛋白、脂質和胞質溶膠原進入到細胞的外環境中，這些外體可以作為細胞功能使者，參與許多生理以及病理生理的過程。多種非造血和造血細胞及多種類型的腫瘤細胞都可以釋放外體。

外體組成成分會隨細胞的來源不同有所差異，所具有功能也有所不同[2]。外體功能主要與細胞來源有關，且可以說，外體功能一定程度上與細胞表面的蛋白功能有明顯的關系。目前研究已表明外體蛋白分子組成大致分為兩類，第一類為普通的蛋白質，是在所有外體上面都有分布的，第二類為特異性類型的蛋白質，通常來說，這種類型的蛋白質只是存在于特定的細胞來源外體，和其生物學功能關系非常密切。這兩類外體分子的組成能夠充分地體現出抗原肽的結合情況，并通過轉運和呈遞等多種形式，誘導T型細胞活化，并激活對應的免疫反應，起到重要的作用。

同時，外體中除了蛋白質外，還會包含多種其他成分，如脂質。目前臨床學者對外體脂質的研究仍不充分，但是已經證實其具有外體主要成分—神經鞘磷脂、及磷脂酰絲氨酸等等，而其中最為主要的兩種成分是神經鞘磷脂和磷脂酰絲氨酸。

2 外體分離及各項風險

外體本身是一種具有特殊理化性質的物質。通過多項研究細胞發現，在體外細胞培養過程中，外體最為常見的一種有效提取方法是使用高速離心方法。通過此方法除掉死細胞與大碎片，接下來采用蔗糖密度梯度懸浮的方法對其進行分離。外體所呈現的形式是以脂質囊漂浮在上面的[3]。利用這一方法能夠取得相對一致的外體類型，隨后再利用免疫電鏡結合Western印跡的方法，進而更好地對外體表面分組的組成進行分析，可以取得較好的效果。需要注意的是，此方法需要對大量細胞進行培養，且需要對大量的細胞進行培養，同時還要避免在分析過程中容易受到其它蛋白質的干擾。

隨近些年來我國的分子生物科學技術的飛速發展，分離外體的新型方法也應運而生，目前較為常用的分離外體的方法，是使用免疫磁珠方法、流式細胞儀兩種，效果均較好。而其中使用抗-HLA-DP、-DQ、-DR抗體免疫磁珠進行吸附，同時將外體有效地分離開。但是此方法盡管能夠使與免疫不相關的MHCII外體除掉，然而這種免疫磁珠并不能將其中含有HCII類的分子漿膜性小泡進行有效分離，因此在操作過程中要增加其他干預手段，如加入特異性標記CD63。此外還需要對各種特異性的熒光抗體準確標記后，應當采取流式的細胞儀對表面分子進行分析。這一種方法非常簡便，易用，所需要細胞的數量非常少，不會受到細胞蛋白的干擾，但這種方法的費用比較高，并不適用于大規模的制備和提取。

3 外體在臨床腫瘤免疫治療當中的應用

就目前來說，臨床腫瘤的免疫治療方面主要包括腫瘤細胞來源外體與DC來源外體。

3.1 DC分泌外體

1998年有專家對DC分泌外體做了首次的報道，并且研究了關于DC分泌外體的功能、主要方法、產生方式等。其認為，人體外周組織中已經成熟的DC細胞與尚未成熟的DC細胞，對病原體進行了充分的攝取，其能夠產生MHC抗原肽類型復合體。而在MHC抗原肽類型復合體中，存在較多的通過Dexosome運送的復合體，但是這些物質并未直接接觸到病原體DC中[4]。同時，人體外周組織內的DC還能夠遷移到淋巴結，進而對其他DC產生活化作用。通過這些方法使人體免疫應當增強的目的。目前來說，已經可以對單核細胞源DC所分泌的Dexosome按照GMP標準成功制備入，當前已經有公司研發出腫瘤疫苗，以Dexosome作為疫苗的基礎，且已經完成了臨床I期試驗。

同DC相比較，Dexosome在腫瘤的治療方面具有多種優點，如抗原性強，穩定高效等，但Dexosome瘤苗對于不同類型腫瘤的治療效果仍然需要進一步進行觀察。

3.2 人體腫瘤細胞所分泌出的外體

腫瘤細胞來源外體是人體的腫瘤細胞自身產生的，是具有天然的腫瘤抗原物質，同時也能夠將腫瘤抗原向抗原呈遞細胞，引起抗腫瘤免疫應答。同時，Texosome作為一種腫瘤抗原呈遞系統時，也屬于新型腫瘤排斥抗原的來源[5]。

通過蛋白質組學分析，臨床學者證實，Texosome中是包含有MHC I類分子、腫瘤抗原、以及腫瘤抗原的伴侶分子-熱激蛋白的物質。盡管人體Texosome中包含MHC I類分子，但是其自身身并不能夠誘導CTL產生相關反應，只有在它與DC同時存在，才可以誘導CTL反應。此外，研究還發現，Texosome是攜帶腫瘤抗原的，并且可以誘導抗原發生特異性免疫應當，誘導抗腫瘤細胞的反應發生。

4 結 論

雖然近些年來外體在臨床腫瘤免疫治療方面取得了一些效果，然而如果想將其作為免疫治療方式并普遍應用在臨床中的話，還是存在許多問題的。從當前臨床研究發現，患者在接受以外體為基礎的腫瘤免疫治療之后，癥狀確實有所緩解，但緩解者非常少，所以外體在腫瘤的免疫治療方面仍待深入研究。

[1] 沈宜,向自武,陳國慶等.As2O3聯合H22源exosome的抗腫瘤作用研究[J].激光雜志,2009,30(4):82-84.

[2] 張家模,吳小候,張堯,等.膀胱移行細胞癌來源exosome的制備及相關蛋白分子的鑒定[J].腫瘤防治研究,2010,37(6):636-639.

[3] 任微娜,常春康,范華驊,等.外來體在腫瘤免疫治療中的研究進展[J].內科理論與實踐,2009,4(1):66-68.

[4] 薩仁高娃,吳巖,肖文華,等.exosome與腫瘤免疫治療的研究進展[J].感染、炎癥、修復,2008,9(3):181-184.

[5] 李秋文,肖文華.外體(exosome)在腫瘤免疫治療中的應用[J].生物技術通訊,2009,20(2):243-245.

R730.51

A

1671-8194（2013）18-0083-02

*通訊作者：E-mail：haoshuwei@sina.com