淺議化學發光法診斷系統檢測乙型肝炎表面抗原

張彩梅 黨生亮

（烏審旗疾病預防控制中心 內蒙古自治區鄂爾多斯市烏審旗蒙醫醫院，內蒙古 鄂爾多斯017300）

淺議化學發光法診斷系統檢測乙型肝炎表面抗原

張彩梅 黨生亮

（烏審旗疾病預防控制中心 內蒙古自治區鄂爾多斯市烏審旗蒙醫醫院，內蒙古 鄂爾多斯017300）

化學發光法診斷系統由于其高靈敏度和準確度、無輻射及簡便快速等眾多優越性進入人們的視野，被用來檢測乙型肝炎表面抗原。本文簡要介紹了化學發光法檢測系統的種類及其檢測乙型肝炎表面抗原基本原理、現狀和優勢，最后對化學發光法檢測系統在檢測乙型肝炎表面抗原方面的應用進行了展望。

化學發光法；檢測；乙型肝炎表面抗原

乙型肝炎是一種嚴重威脅中國乃至世界的傳染性疾病，亦是全球性的公共衛生難題[1]。近年來，世界感染乙型肝炎人數和因乙型肝炎死亡人數與日俱增，正確及時地診斷乙型肝炎感染和加強對乙型肝炎表面抗原的檢出能力一直以來都是醫學界面臨的巨大挑戰，它們對乙型肝炎的預防、及早治療、治療過程監控具有重要意義。化學發光法診斷系統應運而生，其用于檢測乙型肝炎表面抗原具有準確率和靈敏度高、特異性強、重復性好等優點，被認為是很有前途的一種檢測乙型肝炎表面抗原的方法，有望取代傳統的檢測方法成為免疫分析的主流檢測手段，有力保障廣大人民健康。

1 乙型肝炎表面抗原檢測的傳統手段

乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAG）為乙型肝炎病毒感染第一個出現的病原標志，是最主要的診斷指標之一，它的檢測為后來及早治療、降低輸血傳播乙型肝炎的潛在風險奠定基礎，因此選擇準確率、特異度、靈敏度高但又要成本低的檢測方法至關重要。傳統的檢測乙型肝炎病毒表面抗原的方法主要有酶聯免疫吸附法、熒光免疫法、放射免疫法等。前者因方便快速、成本低成為國內應用較多的一種方法，單它有兩個致命的缺陷：首先，它只能簡單定性不能定量，但定量對臨床藥物療效評價具有重要意義，不能定量對乙型肝炎的診斷和后續治療非常不利；其次，它靈敏度（只有10-8M）和重復性差，很容易因病毒感染的窗口期問題、病毒變異和試驗中其它各種不確定因素導致假陽性或假陰性等漏檢現象，加大乙型肝炎潛在傳染風險，給人們健康帶來威脅。因此，醫藥界極需要新型的靈敏度和準確度都有改善的檢測技術應用于乙型肝炎表面抗原的臨床篩查，這成為長期困擾醫護人員的一道難題。

2 化學發光法簡介

2.1 化學發光法檢測乙型肝炎表面抗原基本原理

化學發光（CLIA）是化學反應產生能量被分子吸收形成激發態分子，當分子由激發態返回基態時能量以可見光形態發出的一種化學現象。化學發光法檢測系統檢測乙型肝炎表面微量抗原是將化學發光體系與免疫反應相結合的一種新型免疫測定技術。

化學發光法檢測系統檢測乙型肝炎表面抗原的主要技術基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的發光劑標記，常見的標記物有三聯吡啶釘、吖啶酯、魯米諾及其衍生物等。首先，將保持免疫活性的抗原或抗體通過磁性復合物（如抗體-抗原-發光劑復合物）或者其它的方法固定在固相載體表面；然后，讓受檢標本抗體或抗原與固相載體表面的抗原或抗體起反應，產生能量，激發產生可見光，光強與受測抗原濃度成一定比例關系。例如電化學發光法[2]，將抗體用化學發光劑[Ru（bpy）3]2+標記，在電子供體三丙胺（TPA）和外加電場的作用下使得和抗體形成復合物的[Ru（bpy）3]2+在激發態和基態間循環往復，不斷發射波長620nm的光子，產生電化學發光，直接測量光的強度即光子的強度就可知乙型肝炎抗原濃度，高效穩定且無輻射，對人體無害。

2.2 化學發光法診斷系統種類

化學發光法診斷系統用于乙型肝炎表面抗原檢測最先在1978年由Halman建立。經過醫藥科學界20多年的研究而逐步完善，大大推動了化學發光法檢測系統的發展。我們現在臨床通常所說的化學發光法診斷系統可分四種類型，魯米諾衍生物ABEI標記的化學發光法診斷系統、酶標記的化學發光法診斷系統、吖啶酯衍生物標記的化學發光法診斷系統、電化學發光法診斷系統，上述四種檢測方法的反應類型均為夾心法和競爭法。

2.2.1 魯米諾衍生物標記的化學發光法診斷系統

魯米諾衍生物是最早被用來標記抗原或抗體的試劑，其發射信號為持續時間很短的閃光，手工操作、難以控制且靈敏度低，因此很難得到實際臨床應用。

2.2.2 酶標記的化學發光法診斷系統

酶（如辣根過氧化物酶）標記的化學發光法診斷系統是在魯米諾衍生物標記的化學發光法診斷系統的基礎上發展起來的，加入發光底物對-碘酚或對-苯酚的魯米諾-H2O2液[3]，將閃光轉化為輝光，大大改善了靈敏度，快速高效，可半自動開放，但影響結果的因素太多，造成重復率和準確度相對較低。

2.2.3 吖啶酯衍生物標記的化學發光法診斷系統

吖啶酯衍生物標記的化學發光法診斷系統的光信號為閃光，發光底物為NaOH-H2O2，方便快速，干擾及影響結果的因素少。近年來有人將此種化學發光技術與磁性微粒子分離技術相結合形成一種化學發光微粒子免疫分析法[4]，以微米級的磁性顆粒做為固相載體，大大提高了靈敏度，同時簡化了后處理程序。

2.2.4 電化學發光法診斷系統

電化學發光法診斷系統是新近發展起來，集電子發光技術、電分離技術、生物-化學技術為一體的化學發光法診斷系統[5]，它一般用化學發光劑[Ru（bpy）3]2+作為標記物，由電激發來產生化學發光，光信號為電激發閃光。電激發增強了電信號，是目前干擾最少、最快速、靈敏度相對來說最高的一種檢測乙型肝炎表面抗原的化學發光檢測法，但檢測成本較高。

3 化學發光法檢測乙型肝炎表面抗原評價

3.1 化學發光法檢測乙型肝炎表面抗原的優勢

自從化學發光法診斷系統問世，其技術優勢已被大量實驗研究結果所證實。總結起來，它具有以下幾個優勢：①高靈敏度，靈敏度高達10-8M以上，大大降低了漏檢率，使疾病能夠被及早檢出，縮短窗口期，且降低了輸血傳播乙型肝炎的潛在風險；②可以定量，這是化學發光法十分重要的一個優勢，定量可以使醫護人員對臨床藥物療效做出及時的評價，使隨時監控病情成為可能；③無輻射，由于它檢測的是電子的濃度，因此對人體無放射性或毒性危害；④穩定性好，其標記物穩定，反應快，檢測時間較短；⑤重復性好，污染和人為因素帶來的誤差小，測試結果具有較高的可靠性。

3.2 化學發光法檢測乙型肝炎表面抗原的現狀

近十年來，當代生物技術的研究和應用取得高速發展，各種化學發光法診斷系統相繼問世，這一技術從稀有逐漸過渡到常規檢測手段，其中在歐美國家處于成熟期，被臨床普遍使用。

但目前國外提供的試劑盒價格高，鑒于檢測成本的問題，我國對化學發光法檢測乙型肝炎表面抗原這一技術的應用僅限于少數大醫院，臨床應用率不高，難以普及，并且大部分儀器都為進口發光化學儀器，如Abbott公司的AXSYM、強生公司的Vitro ECi、羅氏公司的ELECSY，國內關于化學發光檢測系統的儀器和試劑在測定乙型肝炎表面抗原的方面臨床應用的可行性和適應性較低。

4 展 望

化學發光法檢測系統用于乙型肝炎表面抗原測定具有反應快、檢測線性范圍寬且特異性強等其他檢測方法無可比擬的優勢，給廣大乙型肝炎患者及潛在患者的預防和治療迎來了新的曙光，但由于成本和技術的限制在我國普及率不高。

我國應加強化學發光法檢測系統精密儀器、相關試劑及其反應機理的研制和開發工作，提高儀器的自動化檢測和精密度，提高試劑的靈敏度，減少漏檢、誤檢，提高國產化學發光儀和試劑的臨床應用可行性和適應性，打破國外大公司對試劑的壟斷，做好乙型肝炎的早發現，早診斷，早治療的工作，讓化學發光法檢測系統的應用為全世界人民的健康提供有力保障。

[1]Ly TD,Delmas AS,Marie P,et al.Sensitivities of Four New Commereial HePatitis B Virus Surfaee Antige(HBsAG) Assays in Deteetion of HBsAg Mutant Forms[J].J Clinical Microbiology, 2006,4(7):2321-2326.

[2] 張建榮,席向紅,郭小龍,等.電化學發光法測定乙肝表面抗原的方法學性能評價[J].華北煤炭醫學院學報,2011,13(4):473-474.

[3] 封滿良,章竹君,張新榮.增強化學發光酶免疫分析法測定人血清中的乙型肝炎表面抗原[J].陜西師大學報(自然科學版), 1994,22(2):35-37.

[4] 韓亞男.基于化學發光微粒子免疫分析法對乙型肝炎抗HBc和抗HBe的精密測定[D].大連:大連醫科大學,2011.

[5] 王利娜.電化學發光免疫分析技術檢測乙肝標志物的方法學評價及臨床應用[D].大連:大連醫科大學,2008.

R512.6+2；R446.1

：A

：1671-8194（2013）06-0047-02