應用酶聯免疫吸附試驗檢測肝炎病毒血清標志物臨界結果的報告分析

鄭 赫

（遼寧省大連市金州區第一人民醫院檢驗科，遼寧 大連 116000）

應用酶聯免疫吸附試驗檢測肝炎病毒血清標志物臨界結果的報告分析

鄭 赫

（遼寧省大連市金州區第一人民醫院檢驗科，遼寧 大連 116000）

目的 分析酶聯免疫吸附試驗測定肝炎病毒血清標志物假陽性的臨界值、產生原因及處理方法。方法 收集2010年1月至2013年8月期間，我院接受肝炎病毒篩查的患者370例，取血液標本采用酶聯免疫吸附試驗進行肝炎病毒血清標志物檢測，對于報告結果為假陰性或者假陽性者進行臨界值分析。結果 本組370份標本中，檢出HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb弱陽性依次為8例（14.0%）、65例（34.8%）、2例（13.3%）、14例（17.1%）、16例（14.3%）；15例HBeAb陰性和12例HBcAb陰性。結論 弱陽性標本往往存在臨界值問題，檢測中存在時陰時陽的情況。在臨床檢驗中，在報告陰性、陽性結果的同時應報告臨界值以及標本OD值。臨界值直接影響著檢測結果的準確性，應盡量避免，應用統一臨界值質控血清對于提高檢測結果的準確性具有重要意義。

酶聯免疫吸附試驗；肝炎病毒；血清標志物；臨界值

肝炎病毒血清免疫學標志物檢測是臨床診斷肝炎患病情況及判斷病情、傳染性等的重要手段。酶聯免疫吸附試驗（ELISA法）因具有簡便快速、特異性好、靈敏度高以及特異性強等特點而在臨床中廣泛應用。其診斷方法主要是根據配套試劑所設定的判斷值進行判斷，因該法在檢測中受到的影響因素較多，檢測結果重復性不好，極易導致處于判斷值周圍的標本產生假陰性或者假陽性[1]。目前，如何正確處理和報告肝炎病毒血清標志物檢查臨界結果是臨床檢驗人員關注的重點問題。本文就臨床實踐過程中出現的臨界值情況進行探討，旨在為臨床報告和處理臨界結果提供參考，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

選取2010年1月至2013年8月期間，我院門診以及住院患者370例的血清標本，均接受乙肝病毒血清標志物檢測。

1.2 儀器和試劑

TECAN SUNRISE酶標儀，TECAN HydroFlex 洗板機，移液器由賽默飛世爾科技公司提供。乙肝五項標志物試劑盒由上海科華公司生產，質控品均選自衛生部檢驗中心。

1.3 方法

所有操作均嚴格按照說明書進行。HBcAb按照1∶30的比例進行稀釋，將標本與質控品同時進行檢驗；質控品HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的含量依次為2ng/mL、2mIu/mL、30mIu/mL，4NCU/mL，2NCU/mL。臨界值計算嚴格按照說明書提供計算公式進行計算，其中，HbsAg、HBeAg及HBsAb的計算公式相同，對于平均陰性值＜0.05者，均按照0.05×2.1=0.105報告。即標本OD＞0.105表示陽性，反之則為陰性。HBeAb的臨界值計算為（平均陽性值+平均陰性值）/2。如標本的OD值＜臨界值則為陽性，反之則為陰性。HBcAb的臨界值計算為0.5×平均陰性OD值。臨界值判斷與HBeAb相同。

2 結 果

本組370份受檢標本中，57份為HBsAg陽性，其中，8份為弱陽性（標本OD≤2ng/mL質控品的OD），占總陽性數的14.0%。187份為HBsAb陽性，其中65份為弱陽性（標本OD≤2ng/mL質控品的OD），占總陽性數的34.8%；15份為HBeAg陽性，其中，2份為弱陽性（標本OD為0.157、0.114），占總陽性數的13.3%；82份為HBeAb陽性其中，14份為弱陽性（標本OD＜臨界值0.2），占17.1%；15份為弱陰性標本（標本OD＞臨界值0.2）；112例為HBcAb陽性，其中16例（14.3%）為弱陽性，12例為弱陰性（標本OD＞臨界值0.2）。

3 討 論

3.1 臨界結果的干擾因素

臨床研究發現，對于肝炎病毒標志物測定為強陽性患者而言，多次復查仍為陽性，而對于弱陽性或者弱陰性患者而言，其OD值越接近臨界值，重復性就會越差，在復查中極易出現時陰時陽的情況，導致患者或者臨床難以接受[2]。ELISA法的影響因素較多，例如試劑盒質量、儀器未校準、標本被細菌污染、標本溶血、標本凝固不全、劇烈震蕩樣本以及檢測時操作誤差等，均可導致測量值誤差而出現臨界結果[3]。本研究中，340例經ELISA檢查后，共有105例顯示為弱陽性，28例顯示為弱陰性。

3.2 臨界值范圍的界定

對于ELISA法臨界值的判定，目前尚無統一的臨界范圍界定標準，國內主要是根據試劑盒上提供的判斷值作為依據進行判斷，對測定結果未要求進行復檢，而進口試劑盒多要求進行復檢，但對于陰性結果小于判定值者亦未要求復檢。此外，進口檢驗試劑盒中，對于陽性結果均要求進行雙份復檢，對于陰性結果報告均要求以雙孔測定呈陰性時方可報告為陰性，對于復檢雙孔中一陰一陽者要求進行確認實驗[3]。因此，臨床實踐中應根據具體情況而定，可選擇低濃度定值室內質控品進行陽性臨界復檢范圍的設定，并對弱陽性以及較為接近判定值的陰性標本進行多次復檢，以初檢和復檢結果不相符較多的范圍作為臨界復檢范圍。

3.3 臨界結果的確認

對于篩查呈陽性的標本，應采用2種不同原理的試劑或者不同廠家的試劑進行復檢。根據國外檢測標準，所有的陽性標本均應作雙孔復檢，對于復檢結果不統一時再進行確認性試驗，以排除內源性干擾因素[4]。

3.4 臨界結果的處理與報告

在臨床檢驗中，對于獻血肝炎病毒的篩查應高度重視對于臨界陰性樣本的復檢，對于經復檢顯示仍呈臨界陰性者，則應避免采集此類血源。對于體檢人員的肝炎病毒篩查，則重視臨界陽性標本的復檢，對于經復檢仍呈臨界陽性者，應報告為“可疑”，并建議其進行進一步檢查。可改為定量基因擴增法或者具有較高靈敏度的免疫測定法進行復檢，切勿輕易報告陽性。對于經多次復檢仍為臨界陰性或者臨界陽性者，應結合其他標志物進行綜合分析，對于非初診患者，可查閱其以往檢測結果，分析其臨床用藥情況作出可疑、弱陽性或者陰性報告；也可向臨床醫生提供S/CO值，以指導臨床診斷治療。

[1] 司志霖,蔡曉寧.化學發光免疫分析與酶聯免疫吸附試驗檢測乙型肝炎病毒標志物比較分析[J].現代醫藥衛生,2013,29(2):196-198.

[2] 陳慧英,肖艷群,張健,等.酶聯免疫吸附試驗檢測乙型肝炎病毒表面抗原臨界樣本復檢范圍的探討[J].檢驗醫學,2010,25(6):447-450.

[3] 盧振,汪海華.酶聯免疫吸附試驗檢測乙型肝炎病毒標志物的影響因素及存在問題[J].檢驗醫學與臨床,2011,8(2):255-256.

[4] 林耀堂,陳海熒.乙型肝炎病毒前S1蛋白檢測在乙型肝炎病毒感染臨床診斷的應用[J].現代醫藥衛生,2013,29(12):1870-1871.

R373.2

B

1671-8194（2013）34-0081-02