血小板聚集檢測方法及質(zhì)量控制

劉方鶴 榮敬娟 曹珍珍 劉文靜

在血管損傷的情況下，血小板與血管內(nèi)皮下組織接觸，除引起血小板粘附于損傷部位之外，血小板與血小板之間也會(huì)相互粘著，即血小板聚集。血小板聚集是血小板參與止血和血栓形成的重要環(huán)節(jié)。

1 血小板聚集檢測的方法

1.1 比濁法血小板聚集試驗(yàn) 先制備富血小板血漿(PRP)和乏血小板血漿(PPP)，將PRP加入比濁杯中，杯中加入攪拌棒，再加入誘導(dǎo)劑，在恒溫和特定的攪拌條件下，進(jìn)行比濁，隨著血小板發(fā)生聚集，PRP懸液的濁度隨之下降，透光度增加。光電池將光濁度的變化轉(zhuǎn)換為電訊號(hào)的變化，在記錄儀上進(jìn)行記錄，根據(jù)描計(jì)曲線即可計(jì)算出血小板聚集的程度和速度［1］。

1.2 電阻抗法全血血小板聚集試驗(yàn) 用阻抗血小板聚集儀可測定稀釋的抗凝全血的血小板聚集功能，將兩個(gè)電極插入樣本，當(dāng)有電流通過時(shí)，血小板會(huì)粘附到電極上，然后添加誘導(dǎo)劑加以攪拌，在電極周圍的血小板發(fā)生聚集，隨著電極上聚集的血小板增多，兩電極之間的電阻抗相應(yīng)增加，用記錄儀記錄下電阻抗變化的速率和幅度，用來表示血小板的聚集反應(yīng)。該試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)在于不用制備PRP，而且脂血中的血小板功能也可測量，但不適合血小板計(jì)數(shù)極低的患者［2］。靜脈采血，0.109 mol/L枸櫞酸鈉1:9比例抗凝;取全血標(biāo)本0.5 ml加0.9%生理鹽水0.5 ml，放置在試驗(yàn)槽內(nèi)，10 min后進(jìn)行測定。此法也可對(duì)PRP或洗滌紅的血小板進(jìn)行聚集試驗(yàn)。

1.3 循環(huán)血小板聚集體檢測 血液循環(huán)中存在的血小板聚集體在甲醛溶液中被固定下來，而在無甲醛的EDTA溶液中，則發(fā)生解聚分離。比較兩份標(biāo)本中游離血小板數(shù)，即可算出形成聚集體的血小板百分率。

1.4 體外自發(fā)性血小板聚集檢測 枸櫞酸鈉抗凝的PRP在聚集儀中攪拌時(shí)，PRP中的血小板在不加誘導(dǎo)劑條件下發(fā)生聚集，此時(shí)聚集的產(chǎn)生與血小板內(nèi)源性ADP釋放有關(guān)［2］。采靜脈血，枸櫞酸鈉抗凝，按比濁法制備PRP與PPP，PRP試管用石蠟封口置室溫下30 min，取PRP 0.3 ml加入比濁管中，放入一根攪拌棒。調(diào)整 PRP與PPP在聚集儀透光度分別為90與10。將PRP在聚集儀中攪拌30 min。聚集率＞20%可確定為自發(fā)性聚集。

1.5 血小板功能分析儀-100 血小板功能分析儀-100(PFA-100)是微處理器控制的儀器，它可定量測定高切變力下血小板和血小板相關(guān)的止血功能。

2 臨床意義

血小板聚集率降低見于血小板無力癥，巨血小板綜合征，貯存池病，梅—赫(May-Hegglin)異常，以及低(無)纖維蛋白原血癥，尿毒癥，肝硬化，服用血小板抑制藥(如阿司匹林等)后。血小板聚集率增高見于高凝狀態(tài)和血栓性疾病，如急性心肌梗死，心絞痛，糖尿病，腦血管病變，深部靜脈血栓形成，高β-脂蛋白血癥，抗原一抗體復(fù)合物反應(yīng)，人工瓣膜，口服避孕藥，高脂肪飲食，吸煙等。一般而言，血小板聚集率減低對(duì)疾病診斷有重要意義，但血小板聚集率增高僅有臨床參考價(jià)值。在動(dòng)脈粥樣硬化血栓性并發(fā)癥(心肌梗死、腦血栓、外周動(dòng)脈閉塞)及高凝狀態(tài)或血栓前期體內(nèi)自發(fā)性血小板聚集物增多。本試驗(yàn)敏感性不高，但簡單易行，并能反映體內(nèi)情況，可做為體內(nèi)血小板活化的一項(xiàng)參考指標(biāo)。

3 血小板聚集試驗(yàn)質(zhì)量控制

被檢者一周內(nèi)忌服影響血小板功能的藥物，受檢前8 h內(nèi)禁止吸煙并空腹12 h以上，以防止采集乳糜血;采血時(shí)患者應(yīng)放松，防止靜脈攣縮;采血應(yīng)順利，避免反復(fù)穿刺，致使組織損傷或混入氣泡;止血帶壓力盡量小，束縛時(shí)間不應(yīng)過長，以免引起血小板釋放反應(yīng);采血完畢應(yīng)立即與抗凝劑充分混和，來回顛倒3～4次，避免用力振蕩。標(biāo)本應(yīng)放在15～25℃溫度下，低溫會(huì)致使血小板激活。采血后試管應(yīng)加蓋，防止血液中的CO2逸出，使血漿pH值上升，血漿pH值6.8～8，可獲得最佳聚集效果。試驗(yàn)報(bào)告得到之后，應(yīng)對(duì)結(jié)果的可信性進(jìn)行確認(rèn)，對(duì)異常結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床資料進(jìn)行分析。應(yīng)掌握各種誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)血小板聚集曲線參數(shù)的參考范圍，掌握血小板聚集圖形。低血小板數(shù)會(huì)影響血小板聚集，如果PRP中血小板計(jì)數(shù)低于100×109/L，結(jié)果就不可靠。

［1］ 劉毅敏，覃軍．血小板聚集檢測方法進(jìn)展．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2004，19(4):383.

［2］ 歐陽錫林，林子林，王海寶，等．薄片法血小板聚集實(shí)驗(yàn)監(jiān)測服用抗血小板藥物患者．中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2005，13(2):234-237.