菌尿?qū)δ蛞悍治鰞x測(cè)定尿紅細(xì)胞的影響

郭瑞瑩

鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南鄭州450000

泌尿系疾病、特別是腎病診斷的診斷，尿紅細(xì)胞檢測(cè)是重要實(shí)驗(yàn)指標(biāo)之一。評(píng)價(jià)腎臟濃縮稀釋功能，用尿液滲透壓的測(cè)定方法相對(duì)較準(zhǔn)確，但這種方法測(cè)定不僅需要特殊的儀器，而且操作起來(lái)十分繁瑣。一般情況下，檢測(cè)尿液有形成分多是采取顯微鏡尿沉渣檢查，自動(dòng)尿液沉渣分析儀的出現(xiàn)，方便了尿常規(guī)的過(guò)篩檢測(cè)，不但檢測(cè)速度快，使人為的誤差減小，相對(duì)安全，而且具有高精密度，同時(shí)，在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，菌尿在對(duì)尿液分析儀檢測(cè)法和人工鏡檢法的結(jié)果不一致，引發(fā)尿路感染的細(xì)菌可能影響到尿紅細(xì)胞的測(cè)定，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)兩種檢測(cè)儀器和方法，采用不同的菌株分析研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來(lái)源 菌尿：患者因在醫(yī)院泌尿系和門(mén)診感染而住院中，用無(wú)菌的操作原則，采集患者的新鮮正常的晨尿液標(biāo)本1120份；非菌尿：同樣用無(wú)菌的操作原則，隨機(jī)收集非泌尿系感染患者的新鮮正常晨尿液標(biāo)本1120份，經(jīng)過(guò)篩查，全部為陰性。用UF－1000全自動(dòng)尿沉渣分析儀采用120份樣本；IQ-200全自動(dòng)尿液分析儀采用1000份樣本。將相對(duì)濃度、不同種類的細(xì)菌，加入到這些結(jié)果正常的部分尿液標(biāo)本中，使之達(dá)到105-106個(gè)／mL細(xì)菌總數(shù)，并與不加細(xì)菌的尿液做比較。

1.1.2 試驗(yàn)器材UF－1000全自動(dòng)尿沉渣分析儀及其配套試劑、IQ-200全自動(dòng)尿液分析儀及配套試劑；顯微鏡、改良血細(xì)胞計(jì)數(shù)板。

2 UF－1000全自動(dòng)尿沉渣分析儀的方法

1.2 方法

1.2.1 菌株 大腸桿菌（大腸埃希菌）、綠膿桿菌（銅綠假單胞菌）、金葡菌（金黃色葡萄球菌）為質(zhì)控菌株 ，尿紅細(xì)胞的測(cè)定：取10 mL尿液，把尿液混合均勻，依照UF－1000的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行嚴(yán)格的操作，把試驗(yàn)的結(jié)果記錄下來(lái)，同時(shí)把尿液用一次性滴管滴入到一次性的尿板中，10大方格的紅細(xì)胞數(shù)采用顯微鏡計(jì)數(shù)，以紅細(xì)胞平均數(shù)／μL報(bào)告，試驗(yàn)必須在2 h內(nèi)完成。

1.2.2 尿潛血的測(cè)定 把尿液混合均勻，取4～5滴后直接滴入潛血板反應(yīng)孔內(nèi)，需在5 min內(nèi)完成并觀察結(jié)果。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)處理 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)選用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包，t檢驗(yàn)進(jìn)行計(jì)量資料，采用χ2檢驗(yàn)處理計(jì)數(shù)資料，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

對(duì)尿紅細(xì)胞的測(cè)定，不同菌尿有不同的結(jié)果，綠膿桿菌影響最大，金葡菌影響最小，大腸桿菌比金葡菌影響較大一些，見(jiàn)下表1。

表1 不同各類菌尿?qū)δ蚣t細(xì)胞測(cè)定結(jié)果的影響

以鏡檢法作為標(biāo)準(zhǔn)，UF－1000檢測(cè)尿紅細(xì)胞比較菌尿組假陽(yáng)性率高于非菌尿組，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01），見(jiàn)表2。

表2 以鏡檢法為標(biāo)準(zhǔn)UF－1000檢測(cè)尿紅細(xì)胞假陽(yáng)性率（%）

3 IQ-200全自動(dòng)尿液分析儀方法

3.1 方法

3.1.1 菌株 大腸桿菌（大腸埃希菌）、綠膿桿菌（銅綠假單胞菌）、金葡菌（金黃色葡萄球菌）為質(zhì)控菌株。

3.1.2 紅細(xì)胞尿液的配制 尿液分200份一組，共分為4組，將留取的尿液標(biāo)本混合，以5mL/管分裝試管。取門(mén)診血常規(guī)標(biāo)本，根據(jù)測(cè)出的紅細(xì)胞數(shù)進(jìn)行稀釋，以50～150/μL的濃度滴入到分裝好的尿液標(biāo)本中。

3.1.3 菌尿的配制 首先計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)菌株，再把細(xì)菌加入到尿液中，使糞腸球菌、金葡菌、大腸桿菌的濃度分別為104、105、106、107cfu/mL， 白色念珠菌濃度分別為10×104、8.5×104、7×104、6.5×104cfu/mL。

3.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，所有數(shù)據(jù)均以（±s）表示，顯著性檢驗(yàn)采用方差分析檢驗(yàn)、配對(duì)t檢驗(yàn)。

3.2 結(jié)果

白色念珠菌對(duì)IQ-200分析儀檢測(cè)紅細(xì)胞的影響明顯，白念珠菌的濃度在6.5×104紅細(xì)胞與明顯差異；放置一定時(shí)間后，霉菌大部分孢子長(zhǎng)出菌絲，可以被IQ-200的軟件識(shí)別。

4 討論

此實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)細(xì)菌來(lái)作成菌尿，進(jìn)行測(cè)定其紅細(xì)胞得出的結(jié)果，可以肯定菌尿?qū)δ蚣t細(xì)胞測(cè)定有一定的影響。臨床中采用顯微鏡檢測(cè)的方法居多，雖然鏡檢結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但是此方法效率低，很難滿足臨床檢測(cè)的需要。尿液分析儀的各類較多，不同的類型設(shè)計(jì)原理也一樣，所以對(duì)細(xì)菌的識(shí)別能力也會(huì)有不同程度的差別，細(xì)菌的種類對(duì)紅細(xì)胞的檢測(cè)影響程度也不同。此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，在不同菌尿的影響下，和使用不同分析儀會(huì)有不同的結(jié)果，

UF-1000的原理是采用激光流式細(xì)胞技術(shù)，及多項(xiàng)領(lǐng)域技術(shù)于一體，對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)的快速定量分析和分選，對(duì)診斷泌尿系感染方面有很大的作用。此次得到結(jié)果，綠膿桿菌影響最大，假陽(yáng)性的結(jié)果中發(fā)現(xiàn)有大腸桿菌、腸球菌、葡萄球菌屬和真菌等，原因是儀器在多種原因影響下造成漏檢。

IQ-200全自動(dòng)分析儀解決了尿沉渣檢查不能達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)化的問(wèn)題。此方法不用對(duì)尿液離心，對(duì)尿液分析全自動(dòng)化，最適用批量樣本檢測(cè)。IQ-200的精密度高，攜帶污染率低，同時(shí)，在臨床應(yīng)用中也有不足之處，由其是在對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)時(shí)非常容易受到影響。此次試驗(yàn)得出，由于大腸桿菌、金葡菌和糞腸球菌的形態(tài)與紅細(xì)胞的形態(tài)有差異，IQ-200的自動(dòng)微粒識(shí)別軟件對(duì)其識(shí)別十分準(zhǔn)確，而對(duì)霉菌會(huì)造成誤差，原因是霉菌在形態(tài)上與紅細(xì)胞相似，如有這種情況，可以向標(biāo)本中加入幾滴冰醋酸，便能夠區(qū)別開(kāi)來(lái)。

綜上所述，干擾尿液分析儀檢測(cè)紅細(xì)胞結(jié)果的原因很多，其中來(lái)自以部分細(xì)菌的影響為一種，尿液分析儀不但可以把紅細(xì)胞完整檢測(cè)，又能檢測(cè)游離的血紅蛋白，同時(shí)，由于尿液中有肌紅蛋白也可呈陽(yáng)性反應(yīng)，使鏡檢與尿液分析儀測(cè)定結(jié)果不一致，出現(xiàn)假陽(yáng)性。

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