ABO、RhD血型3種鑒定方法的比較

申衛(wèi)和

（海南省第二人民醫(yī)院，海南五指山 572200）

在做ABO血型鑒定時(shí)，臨床廣泛應(yīng)用的玻片法雖操作簡(jiǎn)單、方便快捷，但在臨床實(shí)際工作中卻時(shí)有發(fā)生血型鑒定錯(cuò)誤現(xiàn)象，而且往往是在患者需要輸血治療申請(qǐng)配血時(shí)被發(fā)現(xiàn)錯(cuò)定血型，導(dǎo)致臨床科室對(duì)檢驗(yàn)科產(chǎn)生不良印象，認(rèn)為檢驗(yàn)質(zhì)量差，檢驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確、不可靠。對(duì)檢驗(yàn)科工作會(huì)產(chǎn)生很大的負(fù)面影響。試管法是傳統(tǒng)經(jīng)典的ABO、RhD血型鑒定方法，其結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但與微柱凝膠法相比，敏感性較差，操作難以規(guī)范化、自動(dòng)化、檢測(cè)結(jié)果不易保存，而微柱凝膠法用于A(yíng)BO、RhD血型鑒定易于自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)被許多大醫(yī)院所采用。筆者在湘雅三院輸血科進(jìn)修學(xué)習(xí)期間，對(duì)于門(mén)診每天送檢血型鑒定標(biāo)本同時(shí)采用手工微柱凝膠法鑒定ABO、RhD血型結(jié)果與試管和玻片法進(jìn)行ABO、RhD血型鑒定結(jié)果進(jìn)行比較。

1 材料與方法

1.1 材料

湖南省湘雅三院輸血科2009年1月~2009年6月門(mén)診血型鑒定1 193例，抽取靜脈血1 ml用EDTA-K2抗凝，年齡 1 d～90歲。

1.2 試劑

ABO、RhD血型定型微柱凝膠試劑卡 （單克隆抗體）（長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供）反定型用的A型標(biāo)準(zhǔn)試劑細(xì)胞、B型標(biāo)準(zhǔn)試劑細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室自制2%~5%試劑紅細(xì)胞，按第一版《臨床輸血手冊(cè)》[1]操作。

1.3 設(shè)備

TD－3A型血型血清學(xué)專(zhuān)用離心機(jī)（長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)）

1.4 方法

對(duì)門(mén)診送檢血樣同時(shí)采用手工微柱凝膠法及手工鹽水試管法進(jìn)行ABO、RhD正反定型鑒定。用玻片進(jìn)行ABO、RhD正定型鑒定。

1.4.1 微柱凝膠法 ①正定型，將受檢者0.5%的紅細(xì)胞生理鹽水懸液，加入抗A、抗B、抗D、陰性對(duì)照微管凝膠孔中，每孔50μl即可使用微柱凝膠離心機(jī)，以900 r/min離心2 min；以1 500 r/min離心3 min，取出肉眼觀(guān)察結(jié)果。②反定型，先將受檢者血漿標(biāo)本加注Ac、Bc兩孔內(nèi)，每孔50μl。后在2孔標(biāo)本中分別加入相應(yīng)的A型B型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液50μl即可使用微柱凝膠離心機(jī)，以900 r/min離心2 min，1 500 r/min離心3 min取出觀(guān)察結(jié)果[2]。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)按試劑盒說(shuō)明書(shū)。陽(yáng)性：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中。反應(yīng)強(qiáng)度：特異性紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物位于凝膠表面為強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，復(fù)合物在膠中為弱陽(yáng)性反應(yīng);愈靠近膠底部顆粒愈小，反應(yīng)愈弱。陰性：被檢紅細(xì)胞抗原無(wú)相應(yīng)的抗體結(jié)合，不出現(xiàn)特異性抗原抗體復(fù)合物，紅細(xì)胞沉于微柱凝膠的尖底部。

1.4.2 試管法 ①查抗原（正定型）：取潔凈小試管2支，分別標(biāo)明抗A、抗B，用滴管加入抗A和抗B分型試劑2滴于試管底部，再分別加入受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混勻。②查抗體（反定型）取潔凈小試管2支，分別標(biāo)明A型、B型細(xì)胞。用滴管加入受檢者血清2滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B型5%試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混勻與正定型2管，立即放入離心機(jī)內(nèi)以1 000 r/min離心5 min。取出輕輕搖動(dòng)試管，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，以肉眼觀(guān)察來(lái)判斷結(jié)果[2]。

1.4.3 玻片法 正定型取清潔玻片用蠟筆標(biāo)明抗A、抗B，并加入抗A、抗B分型試劑各1滴于玻片標(biāo)記相對(duì)應(yīng)處，再以滴管分別加入受檢者10%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴充分混勻，連續(xù)約15 s以肉眼觀(guān)察來(lái)判斷結(jié)果[2]。

2 結(jié)果

在1 193例送檢血樣中，一次性正確率：微柱凝膠法正定型率100%、反定型率99.92%；試管法一次性正確率也分別達(dá)到99.92%、99.83%；玻片法一次性正確率為98.91%。這與張悅，張國(guó)平研究結(jié)果基本相符[3]。3種檢測(cè)方法結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 3種血型鑒定方法比較

3 討論

在上述3種方法血型鑒定不符17例。對(duì)可疑結(jié)果及時(shí)進(jìn)行復(fù)查其結(jié)果，①1例微柱凝膠法正反不符情況是：抗A（-）、抗 B（4+）、A 型（1+）、B 型（3+），后經(jīng)待檢者的血清與已知血型的試劑紅細(xì)胞即篩選紅細(xì)胞（I、Ⅱ、Ⅲ套）起反應(yīng)抗體篩查顯陽(yáng)性，表明有其他不規(guī)則抗體存在。后確定血型是“B”（已查到的抗原定型[2]）。微柱凝膠法是應(yīng)用分子排阻層析原理，通過(guò)微小的凝膠顆粒構(gòu)成的濾網(wǎng)，在離心條件下，將與抗體反應(yīng)的紅細(xì)胞浮于膠表面或膠中，將未與抗體反應(yīng)的紅細(xì)胞沉至微柱凝膠的尖底部。結(jié)果可以由自動(dòng)化儀器判讀，也可以由肉眼直視判讀。目前國(guó)內(nèi)一些大醫(yī)院主要用該法進(jìn)行ABO、RhD血型抗原鑒定，該法有自動(dòng)化和手工兩種，三院輸血科采用的是手工微柱凝膠法。②三例試管法正反不符多由操作繁瑣易出現(xiàn)漏加、錯(cuò)加抗A、抗B試劑或試劑紅細(xì)胞懸液濃度度不夠造成肉眼觀(guān)察困難。③對(duì)于13例玻片法判斷困難的可疑結(jié)果后經(jīng)試管法和、微柱凝膠法復(fù)查證實(shí)有8例定型錯(cuò)誤。這可能由亞型紅細(xì)胞抗原與抗體的凝集反應(yīng)慢、凝集強(qiáng)度弱，而造成誤判。此外還有一些疾病，如白血病、惡性腫瘤也會(huì)使RBC抗原變?nèi)?；而某些自身免疫性疾病或新生兒溶血患者的RBC會(huì)發(fā)生自發(fā)性凝集[4]。有時(shí)還可因?yàn)榧t細(xì)胞濃度過(guò)高或低，以及玻片、吸管、試管等污染造成假凝集，引起血型鑒定錯(cuò)誤[5-6]。

本研究表明，手工微柱凝膠免疫檢測(cè)ABO、RhD血型鑒定，其靈敏度、準(zhǔn)確性均與試管法一致，其反應(yīng)強(qiáng)度高于試管法、優(yōu)于玻片法。微柱凝膠法操作簡(jiǎn)便、快速、省時(shí)、省力，易于觀(guān)察結(jié)果，并可以長(zhǎng)時(shí)間保存血型鑒定樣本（保存7 d以上），有利于事后復(fù)查。該法樣本、試劑用量少，結(jié)果的判讀易于標(biāo)準(zhǔn)化，最大限度減少了操作者主觀(guān)因素的影響。玻片法正定型雖操作簡(jiǎn)單、方便快捷被廣泛應(yīng)用于臨床，可在操作時(shí)，是一塊玻片只能做一個(gè)人，做血型鑒定一個(gè)一個(gè)做，如標(biāo)本量大時(shí)就不便于操作，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。在實(shí)際工作中很少同時(shí)做反定型，由于沒(méi)有指控（反定型），如遇弱凝集、冷凝集、或假凝集時(shí)容易對(duì)結(jié)果誤判出錯(cuò)，而不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)。再有，做過(guò)的玻片放置時(shí)間稍長(zhǎng)就會(huì)因液體揮發(fā)而凝集也給審核簽發(fā)人員（主管檢驗(yàn)師）帶來(lái)不便。為確保血型鑒定的準(zhǔn)確性，避免血型差錯(cuò)。建議手工微柱凝膠法血型鑒定技術(shù)應(yīng)在二甲以上醫(yī)院推廣使用?？紤]到微柱凝膠法成本略高的關(guān)系，對(duì)門(mén)診用可采用試管法、而對(duì)住院患者則采用手工微柱凝膠法分步實(shí)施的辦法。

[1]王寶燕.輸血手冊(cè)[M].北京：科學(xué)出版社,2008:129-132.

[2]夏琳.臨床輸血診療技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:62-64.

[3]張悅,張國(guó)平.ABO血型2種檢測(cè)方法比較[J].職業(yè)與健康,2008,24(14):1393-1397.

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[6]余海燕,王席,丁后明.高效價(jià)冷凝集素患者引起的血型鑒定困難1例報(bào)道[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2008,46(22):130.