乙肝病毒攜帶者Pre-S1抗原與HBeAg、HBV-DNA相關性探討

張春雷

(沭陽縣中醫院檢驗科，江蘇沭陽 223600)

乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者在HBV感染者中占大多數，據統計，全國約有1.2億人[1]。雖然HBV攜帶者沒有臨床癥狀，但部分攜帶者的肝臟存在HBV復制，如果不治療，最終可發展為肝硬化和肝癌。目前，乙型肝炎血清標志物的檢測方法有多種，尋求快速、敏感和特異性檢測手段具有十分重要的意義。HBV前S1(Pre-S1)抗原檢測已成為HBV感染、復制和乙肝患者診斷、治療和預后的一個重要指標，HBV-DNA檢測是判斷病毒復制活躍和具有傳染性的直接可靠依據。本研究觀察了HBV攜帶者Pre-S1抗原與HBeAg、HBV-DNA之間的相關性，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 我院325例HBV攜帶者的血清，入選標準:沒有肝炎癥狀和體征，肝功能等各項檢查正常，1年內連續隨訪3次以上，肝部B超檢查無明顯異常，HBsAg陽性。其中男213例、平均年齡30歲，女112例、平均年齡32歲。所有患者留取晨起空腹靜脈血，分離血清，-20℃保存。

1.2 檢測方法

1.2.1 HBeAg檢測:采用ELISA方法，試劑由上海實業科華生物技術有限公司提供。嚴格按說明書進行操作，并按照說明書給出的公式計算出臨界值(cut-off value)以判讀結果。

1.2.2 Pre-S1抗原檢測:采用雙抗體夾心ELISA法，試劑由上海阿爾法生物技術有限公司提供。嚴格按照試劑盒說明書的檢測步驟進行操作，根據酶底物反應后的呈色吸光值，測定血清中乙肝病毒Pre-S1抗原。

1.2.3 HBV-DNA定量測定:采用PCR法結合熒光探針體外擴增和檢測技術，試劑由廈門安普利生物工程股份有限公司提供，該試劑盒的檢測下限為5.0×100 copies/ml。

1.3 統計方法 計數資料采用Kappa統計量分析。

2 結果

2.1 各指標檢測陽性率 325例HBV攜帶者血清中，HBeAg陽性率為26.5%(86/325)，HBV-DNA 陽性率為40.6%(132/325)，Pre-S1 抗原陽性率為37.2%(121/325)。

2.2 HBeAg陽性和陰性組HBV-DNA、Pre-S1抗原的檢測情況86例HBeAg陽性標本，HBV-DNA陽性率90.7%(78/86)，Pre-S1抗原陽性率87.2%(75/86);239例HBeAg陰性標本，HBV-DNA陽性率22.6%(54/239)，Pre-S1抗原陽性率19.2%(46/239)。HBeAg與Pre-S1抗原具有良好的一致性(Kappa=0.61，P＜0.05),HBeAg與HBV-DNA一 致 性 較差(Kappa=0.17，P＞0.05)。見表1。

表1 HBeAg陽性和陰性組HBV-DNA、Pre-S1抗原的檢測情況

2.3 HBV-DNA陽性和陰性組Pre-S1抗原檢測情況 132例HBV-DNA陽性標本中Pre-S1陽性102例，陽性率為77.3%(102/132)，HBV-DNA陰性組中Pre-S1抗原陽性19例，陽性率為9.8%(19/193)，檢測HBV-DNA與Pre-S1具有良好的一致性(Kappa=0.67，P＜0.05)。見表2。

表2 HBV-DNA陽性和陰性組Pre-S1抗原檢測情況

3 討論

近年來，臨床一直以檢測HBV-DNA和Pre-S1抗原作為診斷和治療乙型肝炎的標準。熒光定量PCR技術檢測HBV-DNA雖然存在假陽性，但可直接檢測病毒基因片段，解決了病原體感染后發病時間、病情輕重與病原體數量對檢測結果的影響，是目前HBV診斷的金標準[2]。HBV前S1(Pre-S1)抗原由HBV前s1基因編碼，具有很強的免疫原性，對HBV附著肝細胞誘導特異性免疫反應有重要作用，因其含有肝細胞膜受體，與病毒侵入肝細胞以及HBV復制關系密切[3-4]。因此，Pre-S1抗原已成為HBV感染、復制和乙肝患者診斷、治療和預后的一個重要標志。

本研究中，HBV攜帶者血清標本檢測肝功能的指標都是正常的，但檢測肝功能指標并不能完全反映病毒在體內的復制情況。本研究結果發現，325例標本中HBV-DNA陽性率40.6%、Pre-S1抗原陽性率37.2%、HBeAg陽性率28.9%，表明肝功能正常的部分HBV攜帶者體內仍存在病毒復制，檢測HBV-DNA和Pre-S1抗原比HBeAg更能反映這一情況。HBeAg陰性標本中有19.2%的Pre-S1抗原陽性，22.6%的HBV-DNA陽性，說明HBeAg轉陰并不能代表HBV從體內清除或復制終止，這與Pichoud等[5]的報道基本相同。部分HBeAg陰性者HBV-DNA和Pre-S1抗原呈陽性，原因可能有兩個方面:①可能由于HBV基因的前C區發生變異導致HBeAg表達受限，而病毒本身復制不受影響[6-8];②可能是病毒釋放到血液中的量較少，ELISA法檢測抗原需要1015-1017個病原體才能出現陽性反應。本研究結果中，HBeAg陽性和陰性組HBV-DNA、Pre-S1抗原檢測結果的差異性，可能與HBV-DNA整合于宿主肝細胞基因組或由于基因變異而未能檢出有關。HBV-DNA陽性組Pre-S1抗原的陽性率明顯高于HBV-DNA陰性組，說明HBV-DNA檢測的敏感性高于Pre-S1抗原;HBV-DNA陰性組中檢測出Pre-S1抗原呈陽性表達，可能由于Pre-S1不僅表達在HBV Dane顆粒上、還表達在管型顆粒表面，當HBV生成較多的管型顆粒，即使病毒復制不活躍，也可能出現Pre-S1抗原陽性。

雖然HBeAg、HBV-DNA與Pre-S1抗原在檢出率上存在差異，但本研究結果顯示，HBV攜帶者HBeAg與Pre-S1抗原具有良好的相關一致性、與HBV-DNA的一致性較差，說明HBeAg與HBV-DNA存在一定差異，檢測HBeAg不能完全反應病毒在體內的復制情況。另外，本研究結果顯示，Pre-S1抗原與具有病毒復制意義的金標準HBV-DNA具有良好的相關一致性，說明Pre-S1抗原比HBeAg更能反應病毒在體內的復制情況。因此，聯合檢測Pre-S1抗原和乙肝病毒標志物對HBV攜帶者具有越來越重要的臨床意義。

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