赤雹根總皂苷對AA大鼠足跖部炎癥反應的作用*

閻 昊，顧士棟，鄒 君，佟繼銘，劉永平

(河北省中藥研究與開發重點實驗室，承德醫學院中藥研究所，河北承德 067000)

滿藥赤雹根是葫蘆科植物赤雹(Thladiantha dubia Bunge，TDB)的干燥根，主要分布于華北、東北、內蒙古等地區，資源豐富，為滿族民間沿用至今的一種藥物。赤雹根味苦、性寒，可治療乳汁不下、乳房脹痛以及多種慢性疼痛，如跌打損傷、肌肉痛、類風濕性關節炎等，且無明顯的毒副作用，具有重要的開發利用價值[1]。前期研究表明，赤雹根抗炎的主要成分赤雹根總皂苷(total saponins ofThladiantha dubiaroot，TSTDR)對佐劑性關節炎(adjuvant arthritis，AA)模型大鼠具有良好的療效，并且能明顯降低AA模型大鼠血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)以及白介素-6(IL-6)的含量[2]。本研究進一步觀察了TSTDR對AA大鼠足跖部炎癥反應病理學變化的改善作用。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 TSTDR，承德醫學院中藥研究所制備;雷公藤多苷片，安徽新隴海藥業有限公司，批號:100301;弗氏完全佐劑(FCA)，美國Sigma公司，批號:100M8725。

1.2 實驗動物分組及處理 健康雄性8周齡SD大鼠60只，體重180-200g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，合格證號:SCXK京2009-0007。大鼠隨機分為正常對照組，模型組，TSTDR低、中、高劑量組和雷公藤多苷組，每組10只大鼠。除正常對照組大鼠外，其余各組大鼠均于右后足跖部皮下注射FCA 0.1ml，以注射點周圍出現明顯白泡為佳，以造模后第18d大鼠關節炎指數AI值≥6為模型建立成功。

于造模后第18d開始，TSTDR各劑量組大鼠分別灌胃給予不同劑量的TSTDR(160、80、40mg/kg/d);雷公藤多苷組大鼠灌胃給予雷公藤多苷(12mg/kg/d);正常組和模型組大鼠分別灌胃給予相應體積的蒸餾水;各組大鼠每天給藥1次，連續給藥21d。

1.3 關節炎指數AI值評分方法 0級，無紅腫，0分;1級，跖關節稍腫，1分;2級，小趾關節及足跖關節腫脹，2分;3級，踝關節以下足爪腫脹，3分;4級，包括踝關節在內的全部關節腫脹，4分。AI值=非致炎3只肢體關節腫脹級別之和(最高分為12分)。

1.4 檢測大鼠足腫脹度 于給藥前(致炎后18d)以及給藥后第5d開始，每隔4d用游標卡尺測量大鼠左后足踝部直徑，并計算足腫脹度:足腫脹度(%)=[測量時踝部直徑值(cm)-造模前踝部直徑值(cm)]/造模前踝部直徑值(cm)。

1.5 組織病理學觀察 給藥結束后處死大鼠，剪取足跖部炎癥組織，10%甲醛固定液固定48h，常規石蠟包埋、切片，HE染色，10×20倍光鏡下觀察病理變化。

1.6 統計學處理 采用SPSS 17.0統計軟件進行統計分析，組間比較行方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TSTDR對大鼠足腫脹度的影響 與模型組相比，TSTDR高、中、低劑量組大鼠足腫脹度分別于給藥后第5d、9d、13d時明顯下降(P＜0.01);同時間點TSTDR各劑量組大鼠足腫脹度比較，差異無統計學意義;給藥后第21d TSTDR 高劑量組大鼠足腫脹度明顯低于雷公藤多苷組(P＜0.05)。見附表。

附表 TSTDR對AA模型大鼠左后足腫脹度的影響(n=10，±s)

附表 TSTDR對AA模型大鼠左后足腫脹度的影響(n=10，±s)

與同時間點模型組比較:*P＜0.01，**P＜0.05;與同時間點雷公藤多苷組比較:△P＜0.05

組 別 劑量(mg/kg)給藥前 5d 9d 13d 17d 21d模型組 — 0.32±0.16 0.43±0.18 0.43±0.19 0.43±0.19 0.42±0.22 0.43±0.19 TSTDR低劑量組 40 0.33±0.11 0.29±0.11 0.26±0.13 0.21±0.09** 0.18±0.06** 0.16±0.06*TSTDR中劑量組 80 0.25±0.12 0.26±0.15 0.22±0.12** 0.17±0.09* 0.17±0.08** 0.13±0.09*TSTDR高劑量組 160 0.27±0.10 0.22±0.11** 0.13±0.10* 0.11±0.08* 0.12±0.06* 0.10±0.08*△雷公藤多苷組 12 0.24±0.10 0.24±0.16** 0.18±0.13* 0.14±0.03* 0.14±0.05** 0.18±0.10**

2.2 大鼠足跖部HE染色結果 正常對照組大鼠足跖部為完整的肌肉組織，無炎癥浸潤及血管增生(附圖A)。模型組大鼠足跖部肌肉組織壞死，有大量炎性細胞浸潤，出現較多毛細血管增生，成纖維細胞大量生成(附圖B)。與模型組比較，TSTDR 80mg/kg/d組和雷公藤多苷組大鼠足跖部炎癥細胞浸潤水平明顯降低，但仍可見大量成纖維細胞(附圖C);TSTDR 160mg/kg/d組大鼠足跖部炎性細胞浸潤水平與成纖維細胞數明顯降低，血管增生明顯減少，可見新生的肌肉組織(附圖D)。

附圖 大鼠足跖部HE染色結果

3 討論

類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis，RA)是以多發性和對稱性增生性滑膜炎為主要表現的慢性全身性自身免疫性疾病。由于炎癥加劇和緩解反復交替進行，引起關節軟骨和關節囊的破壞，最終導致關節強直畸形[3]。RA的發病機理尚不明確，但有研究表明細胞因子網絡失衡，各種炎癥因子的表達相互促進，形成惡性循環，持續作用于病變部位是導致關節侵蝕進展的主要原因[4]。AA大鼠模型是常用的RA實驗動物模型，與RA同樣表現為關節部位的腫脹、滑膜組織增生、大量炎性細胞浸潤、血管增生以及骨組織的損傷等[5]。

本研究發現，TSTDR可明顯降低AA模型大鼠足腫脹度，表現出良好的抗炎效果，TSTDR 160、80、40mg/kg/d劑量組分別于給藥第5d、9d和13d顯示出治療作用。本研究提示，雖然不同劑量的TSTDR表現出相同的治療作用，但大劑量可更早達到治療效果。足跖部病理切片顯示，中劑量(80mg/kg/d)的TSTDR對于炎性細胞浸潤這一炎癥的早期反應即有一定的抑制作用，而對毛細血管增生、組織纖維化等無明顯抑制作用;而高劑量(160mg/kg/d)的TSTDR不僅能降低炎性細胞浸潤水平，還能減少毛細血管增生和組織纖維化。本研究結果表明，各劑量TSTDR均有降低AA模型大鼠足腫脹度、抑制足跖部炎癥反應的作用，并且，高劑量TSTDR的抗炎作用優于陽性對照藥雷公藤多苷，因此TSTDR可作為良好的抗RA藥物加以研究。

[1]宋立人，洪恂，丁緒亮，等.現代中藥大辭典[M].上冊.北京:人民衛生出版社，2001.1022.

[2]陳建雙，于海榮，張玉玲，等.赤雹根總皂苷對類風濕性關節炎大鼠血清細胞因子的影響[J].時珍國醫國藥，2010，23(5):1097-1098.

[3]戴冽，湯美安.類風溫關節炎的診斷與治療[J].新醫學，1998，29(2):61-63.

[4]Cantagrel A, Navaux F, Loubet-Lescoulié P,et al.Interleukin-1beta, interleukin -1 receptor antagonist, interleukin -4,and interleukin -10 gene polymorphisms: relationship to occurrence and severity of rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheumatism,1999, 42(6): 1093-1100.

[5]Kawahito Y, Kondo M, Tsubouchi Y,et al.15-deoxy-delta(12,14)-PGJ(2)induces synoviocyte apoptosis and suppresses adjuvantinduced arthritis in rats[J].J Clin Invest, 2000, 106(2):189-197.