直腸癌患者血漿腫瘤型M2丙酮酸激酶檢測的臨床價值

蔡瑞云， 陳洪亮，金鳳哲

(瑞安市紅十字醫院檢驗科，浙江溫州325200)

腫瘤型M2丙酮酸激酶(TuM2-PK)是近年來新發現的一種腫瘤標志物，也是研究熱門之一。相關研究報道顯示多種腫瘤患者血漿TuM2-PK水平升高，而且與腫瘤的生長、侵襲、淋巴轉移存在一定的相關。目前有關TuM2-PK對直腸癌診斷價值的研究較少。為此，我們檢測了直腸癌患者血漿TuM2-PK水平，探討TuM2-PK在直腸癌中的應用價值。

材料和方法

一、研究對象

收集瑞安市人民醫院和瑞安市紅十字醫院腫瘤外科2012年3月至12月住院的直腸癌患者153例，男107例，女46例，年齡46～82歲;收集同期直腸良性病變患者48例，其中直腸息肉26例、低級別直腸上皮內瘤變15例、高級別直腸上皮內瘤變7例，男31例，女17例，年齡42～73歲。所有患者均經病理診斷證實，直腸癌患者術前未接受任何放化療。隨機選取無腫瘤史、癌胚抗原(CEA)、癌抗原199(CA199)、癌抗原72-4(CA7-24)正常的健康體檢者32名作為正常對照組，男20名，女11名，年齡39～72歲。

二、方法

1.樣本收集 所有對象均于早晨采用EDTAK2抗凝管采集空腹靜脈血2 mL，1 h內離心分離出血漿存于-80℃備用。

2.儀器與試劑 儀器為瑞士帝肯TECAN SUNRISE全自動酶標儀，檢測波長為450 nm。TuM2-PK采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測，試劑盒由德國ScheBo ò Biotech AG公司提供，嚴格按試劑說明書進行操作，以TuM2-PK＞15 U/mL 判斷為陽性結果［1］。

3.檢測方法 采用雙抗體夾心ELISA。用純化的人丙酮酸激酶M2型抗體包被微孔板，血漿樣本中的TuM2-PK與之結合反應，再加入HRP標記的羊抗人抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經洗滌后加底物TMB顯色，顏色深淺與樣本中TuM2-PK水平成正比，用酶標儀讀取標準液與樣本的吸光度(A)值，檢測中需制定標準曲線，標準液由廠家提供，通過標準濃度與對應的A值在CURVE EXPERT軟件下建立標準曲線，然后通過樣本的A值算出樣本TuM2-PK濃度。

三、統計學方法

結 果

一、各組血漿TuM2-PK水平比較

直腸癌組血漿TuM2-PK水平為(26.23±5.36)U/mL，明顯高于直腸良性病變組［(18.52±3.66)U/mL］及正常對照組［(17.68±4.02)U/mL］(P均＜0.05)。而直腸良性病變組與正常對照組之間差異無統計學意義(P＞0.05)。

二、直腸癌不同臨床病理參數間TuM2-PK陽性率的比較

直腸癌患者血漿TuM2-PK陽性率與腫瘤細胞分化程度、淋巴結轉移與否及臨床TNM分期有關，見表1。

表1 直腸癌不同臨床病理參數TuM2-PK表達陽性率的比較

三、血漿TuM2-PK診斷直腸癌的性能指標

以病理結果為金標準對直腸癌組與直腸良性病變組TuM2-PK檢測結果進行診斷性能分析。血漿TuM2-PK檢測直腸癌的敏感性為62.09%、特異性為79.16%、陽性似然比為2.20、陰性似然比為0.49、陽性預測值為90.47%、陰性預測值為39.58%。

討 論

丙酮酸激酶(PK)是糖酵途徑中的一個關鍵酶，相對分子質量約為240 000，主要以由4個亞基組成的四聚體形式存在，有2種結構基因(L基因、M基因)和4種同工酶。4種同工酶通常以酶的活性四聚體形式存在，但在腫瘤細胞中主要以磷酸化丙酮酸低親和力的二聚體形式存在。這種二聚體的M2型PK被稱為TuM2-PK，與磷酸烯醇丙酮酸親和力很低，因此，會導致磷酸烯醇類物質的大量堆積，DNA合成的增加［2］。TuM2-PK在增生細胞中呈普遍表達，但在惡性腫瘤中呈現過度表達，惡性腫瘤這種異常能量代謝是TuM2-PK增高的主要原因。在腫瘤的壞死或轉移的過程中TuM2-PK會被釋放到外周體液中，因此外周血中可以檢測到TuM2-PK［3］。

本研究結果發現在直腸癌組血漿TuM2-PK水平明顯高于直腸良性病變組與正常對照組(P均＜0.05)，而直腸良性病變組與正常對照組之間無明顯差異(P＞0.05)。由此可見，確定TuM2-PK的醫學決定水平可用于區別直腸的良、惡性病變，這與盧仁泉［4］等對胃癌的研究結果相似。直腸癌患者TuM2-PK的陽性率與癌細胞的分化程度、腫瘤是否有淋巴轉移以及臨床病理TNM分期有關，而與患者性別、年齡、腫瘤的大小無關。雖然TuM2-PK陽性率與腫瘤浸潤深度之間不存在正相關關系，但隨著浸潤的加深，TuM2-PK的陽性率也呈增加趨勢。癌細胞分化程度越低，血漿中TuM2-PK水平就越高;有淋巴轉移的患者TuM2-PK陽性率高于未發生淋巴轉移的患者。在臨床病理TNM分期中，Ⅲ～Ⅳ期患者血漿TuM2-PK陽性率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者。這些結果均明確表明直腸癌患者TuM2-PK水平隨著癌細胞生物狀態的改變而改變，一定程度上反映了腫瘤的發生、發展。

本研究采用ELISA檢測TuM2-PK，試劑中包被的2種單克隆抗體針對TuM2-PK不同的位點，避免了與其他PK同工酶的交叉反應，保證了結果的準確性。本研究發現TuM2-PK診斷直腸癌的靈敏度、特異性分別為62.09%、72.16%，低于Hardt等［4］的報道，靈敏度也低于葉維潔等［6］的報道，但高于其他腫瘤標志物如CEA、CA199等的靈敏度和特異性。

綜上所述，直腸癌患者血漿TuM2-PK水平可在一定程度上代表癌細胞的生物學狀態，反映了直腸癌的發生、發展。如果能通過本地區大規模人群的研究，確定TuM2-PK的陽性判斷閾值，將有助于提高TuM2-PK的臨床應用價值。

［1］Lüftner D，Mesterharm J，Akrivakis C，et al.Tumor type M2 pyruvate kinase expression in advanced breast cancer［J］.Anticancer Res，2000，20(6D):5077-5082.

［2］方偉達，梁文勇，余其昌.肺癌患者腫瘤M2型丙酮酸激酶的表達水平及臨床意義［J］.現代腫瘤醫學，2011，19(7):1352-1353.

［3］Mazurek S，Boschek CB，Hugo F，et al.Pyruvate kinase type M2 and its role in tumor growth and spreading［J］.Semin Cancer Biol，2005，15(4):300-308.

［4］盧仁泉，郭 林，許曉峰.胃腸道惡性腫瘤患者血漿腫瘤型M2-丙酮酸激酶測定及其臨床價值［J］.檢驗醫學，2008，23(4):370-373.

［5］Hardt PD，Ngoumou BK，Rupp J，et al.Tumor M2-pyruvate kinase:a promising tumor marker in the diagnosis of gastro-intestinal cancer［J］.Anticancer Res，2000，20(6D):4965-4968.［6］葉維潔，金冶寧.腫瘤型丙酮酸激酶在結直腸癌血漿中的測定及其臨床意義［J］.現代腫瘤醫學，2010，18(3):511-514.