脂氧素受體激動劑BML－111對左向右分流大鼠肺動脈壓力影響及其機制的研究※

湖北醫藥學院附屬太和醫院檢驗科（十堰442000）

陳永梅 周作華 趙 穎 陳 玲 孫 曼 龔興瑞△ 向 勇△▲

肺動脈高壓是眾多臨床心臟和肺部疾病發展的終末階段，其中炎癥反應是肺動脈發展過程中一種極為重要的因素，它可促使肺血管阻力增加，肺動脈壓力進行性升高，從而血管痙攣收縮、血管壁重建及原位血栓形成［1］。脂氧素是一種促炎癥消退物質，具有抑制內皮細胞、平滑肌細胞、成纖維細胞異常增殖，抑制中性粒細胞、單核細胞激活的作用，其已闡明的作用機制決定了它有可能具有治療肺動脈高壓的作用［2，3］。本試驗擬采用脂氧素受體激動劑處理左向右分流型大鼠，觀察其對肺動脈壓力的影響，并進一步探求其與作用機制。

材料與方法

1 動物與器械 健康成年SD大鼠30只，體重400～450g，由湖北醫藥學院動物實驗中心提供。實驗器材準備包括：壓力換能器、顯微鏡、手術顯微器械、肝素、水合氯醛、鹽酸戊乙奎醚、青霉素等。

2 模型制備 將100ml水合氯醛中加入鹽酸戊乙奎醚注射液1mg和氟哌利多5mg，采用3ml／100g的劑量腹腔注射麻醉，麻醉后固定于手術臺上，2mg／kg肝素行腹腔注射，術中持續面罩給氧。將P組、B組大鼠沿左側頸部斜形剪開，游離左側頸總動脈和頸外靜脈，頸外靜脈遠端結扎，頸總動脈下段用血管夾夾住，于發出頸外動脈分支前結扎剪斷，將BD20G的動脈穿刺針剪取1cm作為導管連接頸總動脈近端和頸外靜脈近端，聯接牢固后固定導管，松開血管夾，頸外靜脈變紅且有搏動則說明分流成功，縫合傷口前局部噴灑青霉素5萬單位。C組僅行麻醉和局部切開操作。將大鼠放回籠中，飼養6周后，B組每天腹腔注射1mg／kg BML－111，P組每天腹腔注射等量生理鹽水，連續4周后將大鼠取出進行實驗。

3 肺動脈壓力測量 將大鼠按照如前的方式行腹腔注射麻醉，麻醉后固定于手術臺上，分離右側頸外靜脈，將右心導管充滿肝素鹽水后插入，連接換能器并與監護儀相連，當置入導管進入右心室時記錄其右室收縮壓，監護儀出現肺動脈波形時記錄其平均肺動脈壓力，連續三次讀數，計算其平均值。壓力測量完畢后處死大鼠，游離右室（RV）和左室＋室間隔（LV＋S）并稱重，計算（RV）／（LV＋S）。

4 組織病理學測定 用生理鹽水沖洗肺動脈剩余的血液，同時用10%的中性甲醛在20cmH2O壓力下經氣管注入肺內，約5min后切取左肺于10%甲醛中固定48h，常規石蠟包埋、切片。

4．1 肺小動脈中膜厚度比 將處理好的切片采用Elastin－Van Gieson染色，光鏡下觀察用SimplePCI圖像采集系統處理，分別測量計算內、外彈力板之間的距離R和血管外徑D，每只大鼠測量30根肺部小動脈，直徑位于30～100μm，由公式計算中膜厚度百分比：2R／D100%。

4．2 肺小動脈纖維化比 將處理好的標本經Masson染色，在400倍顯微鏡下進行觀察，用圖像處理軟件將藍染的纖維組織和紅色的其它組織以及白色的背景分割開，計算藍染組織占總視野百分比。

4．3 肺組織 MMP－2，9、TIMP－1含量的測定將處理好的切片用免疫組織化學SP法染色肺組織，以胞膜和胞漿呈棕黃色顆粒為 MMP－2，9、TIMP－1表達陽性，無棕黃色顆粒者為表達陰性，采用Image－Pro Plus圖像分析系統在400倍光鏡下進行分析，每張切片隨機抽取五個視野作為測定目標，采用IOD行半定量分析。

5 統計學處理 本組對所有數據采用SPSS13．0統計分析，選用完全隨機設計的方差分析，采用最小有意義極差法（LSD）分析各組與對照組之間的比較，以P＜0．05為有顯著性差異，P＜0．01為有極顯著性差異。

結 果

1 大鼠一般情況 見表1。P、B兩組大鼠分流術后有部分大鼠表現為進食減少，毛發變粗，活動較差。P、B兩組大鼠體重增長減慢，術前三組大鼠體重無顯著性差異，術后6周，C組大鼠體重重于P、B兩組，第10周C組體重重于P、B兩組大鼠，且B組體重高于P組。

表1 各組大鼠體重變化情況（g，±s）

表1 各組大鼠體重變化情況（g，±s）

注：※與C組比較，P＜0．05；＃與P組比較，P＜0．05

測量指標 術前 第6周 第10周C組 416±12 462±14 486±18 P組 420±13 446±13※ 454±15※B組 419±15 443±15※ 468±16※＃

2 血流動力學改變 見表2。經術后10周的飼養，P組和B組大鼠PAMP、RVSP均較C組升高，且P組比B組升高明顯（P＜0．05），大鼠處死后，P組和B組RV／（LV＋S）較C組增加顯著（P＜0．05）。

3 中膜厚度及纖維化的比較 見表3P組和B組大鼠相比C組肺組織中膜厚度比和纖維化比增高，且P組比B組增加更明顯（P＜0．05）。

表2 各組大鼠PAMP、RV／（LV＋S）、RVSP（±s）

表2 各組大鼠PAMP、RV／（LV＋S）、RVSP（±s）

注：※與C組比較，P＜0．05；＃與P組比較，P＜0．05

測量指標 PAMP（mmHg）RV／（LV＋S） RVSP（mmHg）C 組 13．2±2．2 0．221±0．021 22．2±3．3 P組 30．4±4．1※ 0．304±0．031※ 37．7±5．2※B組 26．6±3．7※＃ 0．264±0．031※ 31．8±4．4※＃

表3 各組大鼠中膜厚度比和纖維比（±s）

表3 各組大鼠中膜厚度比和纖維比（±s）

注：※與C組比較，P＜0．05；＃與P組比較，P＜0．05

測量指標 中膜厚度百分比 纖維化百分比C組 12．3±2．5 15．6±5．8 P組 25．1±4．9※ 34．6±7．8※B組 20．6±3．4※＃ 26．3±6．9※＃

4 MMP－2、MMP－9、TIMP－1水平比較 見表4。P組和B組大鼠相比C組肺組織 MMP－2、MMP－9、TIMP－1含量增高，且P組比B組增加更明顯（P＜0．05）。

表4 各組大鼠MMP－2、MMP－9、TIMP－1水平（±s）

表4 各組大鼠MMP－2、MMP－9、TIMP－1水平（±s）

注：※與C組比較，P＜0．05；＃與P組比較，P＜0．05

測量指標 MMP－2 MMP－9 TIMP－1 C 組 32．6±6．2 35．8±8．7 30．4±5．9 P組 76．8±15．6※ 69．4±12．8※ 82．6±18．2※B組 58．3±12．9※＃ 52．2±11．4※＃ 61．6±14．4※＃

討 論

肺動脈高壓在先天性疾病中發生率比較高，主要表現為肺動脈壓力進行性升高，右心壓力升高，右心室肥厚，如果不及時干預，難免發展到不可逆的階段，最后常導致右心衰竭，病人死亡［4］。在近年來的研究中炎癥反應被認為是肺動脈高壓發生發展的關鍵因素，如肺動脈高壓病變過程中常伴隨著炎癥因子如白介素、腫瘤壞死因子、核因子、基質金屬蛋白酶等的變化，因此通過抑制炎癥反治療肺動脈高壓被認為是一個有效的辦法［5］。基質金屬蛋白酶是細胞外基質一種與降解膠原蛋白相關的水解酶，它可以影響而細胞外基質的改變包括膠原蛋白的變化和彈性蛋白的變化，在細胞外基質生長增殖的過程中起到重要調節作用。此外它還參與肺動脈血管平滑肌的增殖和遷移，細胞外基質的變化也是肺動脈高壓發展過程中的一個因素，已有實驗證明抑制MMP的表達，有助于減輕肺部炎癥和血管重構，延緩肺動脈高壓的形成［6，7］。

脂氧素是體內重要的促炎癥消退介質，它通過激活脂氧素受體發揮強大的抗炎作用，而BML－111作為一種脂氧素受體激動劑也可以通過作用于脂氧素受體而發揮相同的作用［8］。在本試驗中采用導管聯接左頸總動脈－頸外靜脈建立大鼠左向右分流型肺動脈高壓動物模型，模型建立后于第六周開始行腹腔注射干預，三組大鼠，在實驗開始時體重無差異，隨著分流導致肺動脈高壓的逐漸形成，P組和B組生長放緩，但P組生長更慢。大鼠處死前P組和B組測量的肺動脈壓力、右心室收縮壓均比C組升高，P組升高更明顯，大鼠處死后測得RV／（LV＋S）、中膜厚度比和纖維化比值P組和B組明顯增大，說明右室肥厚明顯，肺血管病理改變嚴重。采用半定量測得P組和B組MMP－2、MMP－9、TIMP－1升高，且P組比B組更明顯，說明P組和B組兩組大鼠肺部炎癥反應較重，而加入BML－111有助于減輕大鼠肺部炎癥。

本研究B組大鼠加入BML－111，可減輕左向右分流型大鼠肺動脈高壓的進展，減輕右室肥厚及肺部血管病理改變，其作用機制可能與BML－111抑制大鼠肺組織 MMP－2，9表達，增強TIMP－1的表達有關。

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［4］ 何振芬．肺動脈高壓診治研究進展［J］．陜西醫學雜志，2012，41（1）：110－112．

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［7］ 陳新軍，劉潔琳，溫紹君．血漿基質金屬蛋白酶－2，9與CABG患者心功能NYHA分級的相關性研究［J］．陜西醫學雜志，2012，41（10）：1354－1355．

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