武漢市寵物犬狂犬疫苗免疫效果評價

摘要：為評價武漢市內寵物犬狂犬疫苗的免疫情況，為制定狂犬病的防制對策提供依據，采用間接ELISA法，對325只寵物犬進行狂犬病毒抗體撿測。結果在325只被檢測的寵物犬中，抗體陽性的犬有153只，占47.1%，抗體陰性的犬有172只，占52.9%；其中抗體陽性犬只有38只犬能夠產生保護性狂犬病毒抗體（即抗體強陽性），占總數的11.7%；假陽性或潛在感染狂犬病毒的寵物犬7只，占2.2%。

關鍵詞：寵物犬；狂犬疫苗；免疫效果

中圖分類號：S852.5+2 獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2013）02-0026-02

狂犬病是由狂犬病毒引起的一種高致死性人畜共患性疾病，近幾年我國狂犬病的發病數呈持續上升之勢，居世界第二位，僅次于印度[1]。2003年以來的統計顯示，在國家27個法定傳染病中，狂犬病死亡數和病死率位居榜首。文獻顯示[2]，在亞洲，由犬引起的狂犬病占到98%，而由貓及其他動物引起的占2%。寵物犬是目前與人類接觸最密切的動物，為了解寵物犬狂犬疫苗免疫接種的效果，筆者與同事于2004年6月對武漢市內的寵物犬進行了免疫效果檢測和評價工作，時隔多年，經過整理當時檢查結果，現報告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 寵物犬 來自武漢市內各城區的寵物飼養家庭，通過新聞媒體發布消息，以完全自愿的形式接受狂犬病毒IgG抗體檢測。

1.1.2 試劑 根據國家科技部科技基礎專項（項目編號2002DEA20023）任務要求研制的“實驗犬狂犬病毒抗體ELISA檢測試劑盒”產品（湖北省疾病預防控制中心生產，產品專利申請號20031011 1497.6）。

1.1.3 主要儀器與器械 酶標儀（BIO-RAD Model NO.550），常規加樣器，寵物犬專用固定設備及常規采血工具，離心機（上海安亭科學儀器廠生產）等。

1.2 方法

1.2.1 寵物犬背景調查方法 在采樣時按照設計的調查表，收集寵物犬的種類、來源、年齡、性別及免疫接種疫苗的種類和免疫方法，為狂犬病流行因素調查提供依據。

1.2.2 寵物犬固定方法 在犬主人的配合下，用犬專用固定設備控制犬頭頸部，防止犬突然攻擊采樣人員，然后按照常規方法[3]對犬前肢皮下靜脈采血2 mL左右，并分離血清。

1.2.3 檢測操作方法 按照狂犬病毒抗體ELISA檢測試劑盒使用說明書進行操作。取出酶標板，每孔滴加樣品稀釋液100 ？滋L，陽性血清、陰性血清和空白對照孔不加稀釋液→精確吸取待檢血清l ？滋L ，加入相應的樣品孔中，同時取陽性、陰性血清100 ？滋L加入相應的對照孔中，空白對照孔不加。37 ℃溫育30 min→倒掉孔中的反應液，拍干，用洗滌液洗板5次，拍干→每孔滴加酶結合物100 ？滋L，37 ℃溫育30 min→倒掉孔中的反應液，拍干，用洗滌液洗板5次，拍干→每孔滴加底物A、底物B各一滴（50 ？滋L），37 ℃作用15 min，觀察結果。

1.2.4 結果判定方法 目測：待檢樣品孔顯藍色判為陽性。機測：每孔滴加終止液一滴（50 ？滋L），用酶標儀測每孔OD450 nm值。Cutoff=2.1×陰性對照平均OD值（陰性平均值不到0.1按0.1計算）。樣品孔OD值≥Cutoff值判為陽性。

2 結果

2.1 寵物犬背景情況

本次檢測工作，共有325只寵物犬接受采樣檢測。這些犬來自武漢三鎮，品種多、體型各異，各年齡段均有，其中武昌區有237只犬、漢口有48只、漢陽30只、地址不詳的有10只。按年齡段分：1歲以下犬（不含1歲）90只、1～5歲（不含5歲）215只、5歲以上（含5歲）15只、年齡不詳的有5只。這些犬大部分采用國產多聯疫苗免疫，少部分采用進口疫苗和狂犬疫苗單價苗免疫。

2.2 檢測結果

在325只被檢測的寵物犬中，抗體陽性的犬有153只，占47.1%，抗體陰性的犬有172只，占52.9%；其中抗體陽性的犬中只有38只能夠產生保護性狂犬病毒抗體（即抗體強陽性），占總數的11.7%；假陽性或潛在感染狂犬病毒的寵物犬7只，占2.2%。其中1歲以下小齡犬同年齡段陽性率只有2.2%，1～5歲中青年犬同年齡段陽性率為14.9%，老齡犬為6.7%，中青年犬的抗體陽性率要高于小齡犬和幼犬，結果見表1。

3 小結與討論

這次接受狂犬病毒抗體檢測的寵物犬來自武漢三鎮非常喜愛寵物的家庭，并且非常重視寵物犬的狂犬疫苗預防接種工作，本應該體現出較好的檢測結果，之所以不能達到預期的效果。可能與以下因素有關：寵物犬的預防接種有誤區，以為犬的五聯、六聯或七聯疫苗能夠達到預防狂犬病的效果，理論上來分析，在防止傳染病的問題上，預防多種疫病的疫苗聯在一起，彼此之間是有干擾作用的，尤其是預防狂犬病，使用單價狂犬疫苗肯定比使用多價（如犬的五聯、六聯或七聯）疫苗的效果好。我們通過動物實驗也充分證明了這一點。

中青年犬的抗體陽性率之所以高于小齡犬和幼犬，是因為犬經過長期多次預防接種后，具備主動產生狂犬病毒抗體的免疫應答機制，只要每年按時、按程序接種疫苗，是可以產生有效的保護性狂犬病毒抗體的，接種三次狂犬疫苗的犬，其抗體陽性率高于接種兩次的犬的結果也證明了這一點。而由于送檢的老齡犬數量較少，并沒有真實反應出老齡犬的免疫情況。

市面上使用的犬五聯、六聯或七聯疫苗，是以預防犬瘟熱和細小病毒病為主，預防狂犬病通常擺在第三位，因為前兩者疾病主要是通過呼吸道和消化道感染發病，發病率非常高，治療的效果差，但預防效果好；而后者是通過動物之間相互咬傷才可能感染發病，這種機會比較小，上述檢測結果也證明了這一點。

接受狂犬病毒抗體檢測的寵物犬均來自愛寵家庭，在預防接種、動物福利待遇和衛生條件方面比較優越，但其寵物犬產生狂犬病毒抗體的比率和抗體水平并不高，據此推測，武漢市養寵物的一般家庭，其寵物犬能夠產生狂犬病毒抗體的比率和抗體水平可能更低。

在325只被檢測的寵物犬中，有7只沒有接種任何狂犬疫苗但顯示有抗體產生，占2.2%，這可能與檢測方法有關，出現假陽性結果，也有可能這些犬處于狂犬病毒感染階段，需要進一步觀察，值得特別注意。

參考文獻：

[1] 張永振，肖末接，孫玉輝，等.中國1984～2002年狂犬病流行情況及防制對策[J].中國流行病雜志，2003，24（10）：883～886.

[2] 王顯軍.狂犬病的流行病學研究[J].山東衛生，2003，（11）：52-53.

[3] 孫敬方.動物實驗方法學[M].北京：人民衛生出版社，2001.