豬免疫抗體不同檢測方法的對比試驗(yàn)

[摘 要] 應(yīng)用某國產(chǎn)膠體金診斷試劑盒和進(jìn)口酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）診斷試劑盒，分別檢測豬血清中口蹄疫、豬瘟和藍(lán)耳病抗體合格率，比較兩種血清學(xué)診斷方法的準(zhǔn)確性。結(jié)果表明，膠體金診斷試劑盒結(jié)果和ELISA結(jié)果差異顯著，兩者的符合率較低。因此，應(yīng)加強(qiáng)國內(nèi)部分膠體金診斷試劑的監(jiān)控。

[關(guān)鍵詞] 抗體檢測 膠體金 ELISA

隨著養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展及動物防疫工作的進(jìn)一步深化，對動物進(jìn)行免疫接種已成為預(yù)防和控制動物疫病的重要手段。口蹄疫、豬瘟和藍(lán)耳病是國家要求強(qiáng)制免疫的重大動物疫病，其抗體監(jiān)測關(guān)系免疫效果的考核、合理免疫程序的建立，也是評估疫苗質(zhì)量、對重大動物疫情預(yù)警能力的的可靠依據(jù)。

縣級以上獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室目前開展抗體監(jiān)測主要使用ELISA試劑盒，其昂貴、費(fèi)時和要求專業(yè)儀器和專業(yè)人員的特點(diǎn)，使之不適合基層推廣使用。近年來，隨著一系列膠體金檢測產(chǎn)品在動物疫病檢測領(lǐng)域的推廣運(yùn)用，以其操作簡單、價格低廉、現(xiàn)場即時檢測等特點(diǎn)，迅速獲得了基層獸醫(yī)站和養(yǎng)殖戶的認(rèn)可。為了解這項(xiàng)新技術(shù)的檢測準(zhǔn)確性和可靠性，我們用膠體金和ELISA兩種試劑盒檢測豬血清中的抗體水平，其結(jié)果對比如下。

一、材料與方法

1.被檢血清

從全市5個規(guī)模養(yǎng)豬場采集并分離豬血清共27份，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.診斷試劑

口蹄疫合成肽ELISA試劑盒為上海優(yōu)耐特生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，批號：201012004；豬瘟抗體ELISA試劑盒為北京愛德士元亨生物科技有限公司生產(chǎn)，批號：43220-X681；豬藍(lán)耳病抗體ELISA試劑為北京愛德士元亨生物科技有限公司生產(chǎn)，批號： 40959-X061。

膠體金快速診斷試劑盒為蘇州艾瑞德生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，豬口蹄疫抗體快速檢測試劑盒批號：CFC005A；豬瘟抗體快速檢測試劑盒批號：CFC002A；豬繁殖與呼吸綜合癥抗體快速檢測試劑盒批號：CFC001A。

3.檢測方法

3.1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，以測得樣品OD值大于臨界值為陽性，否則為陰性。

3.2膠體金快速診斷法嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，以檢測線和對照線同時出現(xiàn)紫紅色線為陽性，只有對照線出現(xiàn)紫紅色線為陰性。

二、檢測結(jié)果

表1 兩種方法檢測血清抗體結(jié)果

兩種方法的檢測結(jié)果經(jīng)x2檢驗(yàn)，有顯著差異。

表2 樣品結(jié)果分布圖

三、結(jié)果分析

1.由表1可知，分別用2中診斷試劑盒測定27份血樣抗體，ELISA測得的口蹄疫和藍(lán)耳病抗體的合格率明顯高于膠體金 ，而測得豬瘟抗體的合格率略低于膠體金。從兩種方法的檢測結(jié)果的符合率來看，豬瘟最高，為74%，口蹄疫次之，為41%，藍(lán)耳病檢測符合率只有26%。兩種檢測方法的結(jié)果出現(xiàn)了明顯分離，因此，兩種檢測方法不具有平行相關(guān)性。

2.由表2可知，對樣本個體而言，既有ELISA檢測合格而膠體金不合格的樣本，又有膠體金檢測合格而ELISA檢測不合格的樣本。因此，不能以此判斷兩種檢測方法的敏感性高低。

四、討論

1.在重大動物疫病防控效果的考核中，抗體檢測是檢驗(yàn)免疫效果不可或缺的手段，而檢測方法的不同往往導(dǎo)致結(jié)果上存在一定的差異。在本實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用ELISA和膠體金兩種方法對27份豬血清進(jìn)行抗體檢測，結(jié)果有顯著差異（x2檢驗(yàn)，P>0.05）。ELISA檢測技術(shù)比較成熟，具有很高的特異性和敏感性，膠體金快速診斷法需憑肉眼觀察色帶深淺，與參照圖對照，難免主觀上的偏差。另外，膠體金抗原成分與被檢抗體的親和性，也與檢測的合格率直接相關(guān)。

2.而膠體金快速檢測試劑盒是新型定性和半定量的現(xiàn)場即時檢測技術(shù)，目前在人傳染病和激素類檢測上非常成功，而在畜禽應(yīng)用上處于起步階段。 本文對國家強(qiáng)制免疫的三種疾病分別用兩種方法檢測，結(jié)果證明，膠體金檢測技術(shù)目前僅適合基層養(yǎng)殖場，作為動物疫病的早期診斷和適時免疫的一項(xiàng)參考。不能忽視的是，一部分生產(chǎn)廠家技術(shù)并不成熟，提高該項(xiàng)技術(shù)檢測的可靠性是其能否進(jìn)一步推廣運(yùn)用的首要問題。否則，即使作為基層初步篩選的方法意義也不大。